雞傳染性支氣管炎病毒QX株感染雞的組織病理學研究

李曉梅

摘? 要：目前雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）QX基因型是我國主要流行的一種IBV。為充分了解該基因型毒株對宿主相關器官的病理損傷情況，特將IBV-QX 株人工感染發病，在臨床明顯期（9d）采集試驗雞的心、肝、脾、腦、胰、腺胃、十二指腸、法氏囊和胸腺進行病理學分析。結果顯示：發病雞臨床癥狀明顯，出現典型的“花斑腎”;病理學分析得出，發病雞心肌細胞顆粒變性;肝細胞輕度脂肪變性;脾臟少量淋巴細胞壞死，并且有少量異嗜性粒細胞浸潤;腦膜充血;胰腺細胞顆粒變性、壞死;腺胃上皮細胞變性壞死，固有層炎性細胞浸潤;十二指腸未見明顯病變;法氏囊大部分淋巴濾泡呈現空泡化，殘留濾泡淋巴細胞極度減少;胸腺皮質部壞死淋巴細胞核濃縮深染。本試驗簡明地闡述了IBV-QX 株對傳統上的非靶器官的病理損傷，有助于進一步揭示IBV的致病機制。

關鍵詞：雞傳染性支氣管炎病毒;QX基因型;病理變化

中圖分類號：S858.315.3? ? ?文獻標識碼：B? ? ?文章編號：1673-1085（2019）07-0009-04

雞傳染性支氣管炎（Avian Infectious Bronchitis，AIB）是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的一種高度接觸性傳染病。IBV感染后的雞主要出現呼吸道、腎臟和生殖道等部位的病理變化，致使感染發病雞飼料報酬比降低、產蛋率下降而造成巨大經濟損失[1]。IBV對所有品種、各年齡段和不同性別的雞均有易感性，特別是4周齡前的雛雞最為易感發病[2]。陳良珂等人對我國17個省市的390株IBV研究發現，QX基因型占比55%，臨床分型腎型占比82%。由此可知，我國主要流行的IBV為QX基因型，其主要造成腎臟部位病變[3]。1962年美國學者首次系統地對腎型IBV進行了描述[4]，隨后世界各地陸續報道腎臟病變的分離株;1995年我國山東和江蘇兩省報道了臨床表現型為生殖型的病例[5]，被感染預備母雞或產蛋母雞生殖道出現病變，造成產蛋率下降、產畸形蛋或軟殼蛋，甚至出現卵黃性腹膜炎，未表現明顯臨床癥狀的發病雞停止產蛋，俗稱“假母雞”。IBV屬單股正鏈含包膜的RNA病毒，在復制過程中很容易發生基因突變，此外，IBV轉錄過程不連續的特點使其在復制時更容易出現較高頻率的基因插入、基因缺失和基因重組[6，7]。研究表明，IBV的S蛋白決定宿主選擇和組織嗜性及血清型[8]。但有學者將IBV的動態分布與病理變化聯系起來，發現各基因型的IBV在器官中的病毒載量與病理損傷存在一定的相關性[9]。現已明確IBV可對宿主的呼吸道和腎臟等主要靶器官造成明顯的病理損傷，但很少報道該病毒對其它器官組織的損傷情況[10，11]。為此，本試驗就人工感染IBV后的臨床癥狀明顯期采集發病雞的相關組織制作病理切片，以探究IBV對宿主相關器官的損傷情況，進一步為IBV的致病機理研究提供素材。

1? 材料與方法

1.1? 試驗材料

1.1.1? 病毒株? IBV-QX毒株由山東省農業科學院家禽研究所山東省禽病診斷與免疫重點實驗室惠贈。

1.1.2? 試驗動物? 9日齡SPF雞胚購自山東昊泰實驗動物繁育有限公司，用于病毒復蘇。8日齡SPF雛雞，雌雄不限，購自濟南斯派福瑞禽業科技有限公司。

1.2? 試驗方法

1.2.1? IBV-QX株的EID50測定? 首先，將IBV-QX株用9日齡雞胚連傳3代以復壯病毒;然后，取45枚9日齡SPF雞胚，用含50000U/ml丁胺卡那的PBS對收集的雞胚尿囊液進行10倍梯度稀釋，每個梯度對應5枚雞胚，尿囊腔接種0.1ml/胚，共設置8個梯度;對照組接入等劑量的滅菌PBS。接毒后，早晚各照胚1次，棄去24h內死胚，24h后死胚置于4℃保存，144h后統一收胚，按照相關公式計算出該分離株的EID50，并觀察雞胚發育情況。

1.2.2? 人工感染發病與樣品采集? 50只8日齡SPF雛雞分養在2個動物房的隔離器內，試驗組和空白對照組各25只。試驗組雞接毒劑量為0.1ml（滴鼻，病毒滴度約為1.5×103 EID50/ml），空白對照組用等量滅菌PBS處理。兩組雞均在攻毒后9d隨機取5只剖檢，觀察組織器官病變情況并采集心、肝、脾、腦、胰、腺胃、十二指腸、法氏囊和胸腺，用4%中性福爾馬林溶液固定后制作病理組織切片。15d時統一處理余下試驗雞。

2? 結果與分析

2.1? IBV-QX株的EID50測定與胚胎發育情況? 通過將IBV-QX株接種雞胚，測定其EID50，該過程發現雞胚發育明顯受到病毒抑制，出現死胚、侏儒胚等現象。144h后統一收胚，經相關公式計算得出IBV-QX株半數感染量為1.0×106.25EID50/0.1ml。圖1展示的是雞胚接毒144h后空白對照組與感染病毒組的雞胚發育情況。

2.2? 發病雞的臨床癥狀與剖檢變化? 人工感染IBV-QX株發病，試驗組發病雞出現IBV感染后的典型臨床癥狀，羽毛蓬亂，精神狀態不佳（圖2-A）;剖檢時可見腹腔有大量泡沫性積液（圖2-B）;腎臟腫大充血，呈現典型“花斑腎”（圖2-C）;病死雞的腎臟病變嚴重，壞死（圖2-D）。試驗過程中攻毒組在7d時死亡1只，8d時死亡3只，10d時死亡1只，對照組無上述臨床癥狀，也無死亡。

2.3? 相關器官病理變化? 采集臨床癥狀明顯期（9d）試驗雞的心、肝、脾、胰、十二指腸、腺胃、腦、法氏囊制作病理切片，在200倍電鏡下觀察。結果顯示，心臟血管充血，心肌細胞顆粒變性;肝細胞輕度脂肪變性;脾臟少量淋巴細胞壞死，并且有少量異嗜性粒細胞浸潤;腦膜充血;胰腺細胞顆粒變性、壞死;腺胃上皮細胞變性壞死，固有層炎性細胞浸潤;十二指腸未見明顯病變;法氏囊大部分淋巴濾泡呈現空泡化，殘留濾泡淋巴細胞極度減少;胸腺皮質部壞死，淋巴細胞核濃縮深染。而對照組各器官無明顯病理變化。

[10]? BENYEDA Z，SZEREDI L，MATO T，et al. Comparative histopathology and immunohistochemistry of QX-like， Massachusetts and 793/B serotypes of infectious bronchitis virus infection in chickens[J].J Comp Pathol， 2010，143（4）：276-283.

[11]? Z B，T M，T S，et al.Comparison of the pathogenicity of QX-like，M41 bronchitis strains from different pathological conditions[J]. Avian pathology ： journal of the W.V.P.A， 2009， 38（6）：449-456.

[12]? JAKHESARA S J，NATH B，PAL J K，et al. Emergence of a genotype I variant of avian infectious bronchitis virus from Northern part of India[J].Acta Trop， 2018， 183：57-60.

[13]? ZHAO F， ZOU N， WANG F， et al. Analysis of a QX-like avian infectious bronchitis virus genome identified recombination in the region containing the ORF 5a，ORF 5b，and nucleocapsid protein gene sequences[J].Virus Genes，2013， 46（3）：454-464.

[14]? 朱國強，王永坤，孫龍生，等.腺胃病變型雞傳染性支氣管炎毒株H_（95）的研究[J].揚州大學學報（農業與生命科學版），1996，17（4）： 55-59.

[15]? 王玉東，王永玲，張子春，等.雞腺胃型傳染性支氣管炎病毒（QX IBV）的分離和鑒定[J].中國動物檢疫，1998，（01）：3-5.

[16]? 楊麗媛.IBV山西分離株人工感染雛雞的臨床病理學研究及病毒在體內分布的檢測[D].太原：山西農業大學，2013.

Abstract：At present，Avian Infectious Bronchitis Virus （IBV） QX genotype is one of the most epidemic IBV in China. In order to understand the pathological damage of this genotypic strain to the related organs of the host，IBV-QX strain was artificially infected.The heart，liver，spleen，brain，pancreas，proventriculus， duodenum，bursa of Fabricius and thymus of the chickens were collected for pathological analysis during the clinical obvious period （9 dpi）.The results showed that the clinical symptoms were obvious and typical "spotted kidney"appeared in the chickens.Pathological analysis showed that the granulosa degeneration of cardiac muscle cells was observed.Mild steatosis of liver cells.There was a small amount of lymphocytic necrosis in the spleen and a small amount of xenotropic infiltration.Meningeal congestion.Granulosa degeneration and necrosis of pancreatic cells.The epithelial cells of proventriculus were degeneration and necrosis，and the inflammatory cells of lamina propria were infiltrated.No obvious lesion was observed in duodenum.Most of the follicles of bursa of Fabricius showed vacuolation，and the lymphocytes of residual follicles decreased extremely.This was a hyperchromatic concentration of necrotic lymphoid nuclei in the thymic cortex.This study briefly described the pathological damage of IBV-QX strain on traditional non-target organs，which was helpful to further reveal the pathogenesis of IBV.

Key Words： Avian Infectious Bronchitis Virus; QX genotype; Pathological changes□