應(yīng)用高通量測序分析云南昭通不同栽培模式蘋果園根際土壤微生物種群

許姍姍，楊光柱，闞 望，孔寶華*，李 毅，馬 鈞*，李云國，蔡兆翔，譚安超，曹克強

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所，云南 昆明 650205；3.昭通市水果技術(shù)推廣站，云南 昭通 657000；4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/國家蘋果產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系病蟲害防控研究室，河北 保定 071001)

1 材料與方法

1.1 土樣的采集

選取云南魯?shù)榭h文屏鎮(zhèn)硯池山村閘上(N27°08′57.54″、E103°31′48.30″)、魯?shù)榭h桃源鄉(xiāng)大水塘村(N27°11′01.05″、E103°38′01.47″)、昭陽區(qū)蘇家院鎮(zhèn)順山海升公司的蘋果果園(N27°17′32.64″、E103°31′46.81″)。3種不同果園：粗放果園、普通果園、精品果園。

于 2016年7-8月在供試3個果園內(nèi)分別選擇5株蘋果樹采集土壤，采用5點取樣法，去除土壤表層的腐殖質(zhì)，在距樹干基部0.5 m 處分別設(shè)置5個取樣點，每份約300 g，過2 mm 篩后；分裝，液氮中冷凍 3～4 h，然后轉(zhuǎn)移至-80 ℃ 或液氮中長期保存，干冰運輸至百邁克生物公司(BioMarker)進(jìn)行DNA提取與測序，并在云南三標(biāo)農(nóng)林科技有限公司檢測各項理化性質(zhì)。

1.2 土壤理化性質(zhì)測定

高溫外加熱重鉻酸鉀氧化容量法測定土壤有機(jī)質(zhì)，紫外分光光度校正因數(shù)法測定硝態(tài)氮，2 mol/L KCl 浸提-靛酚藍(lán)比色法測定銨態(tài)氮，濾紙條法測定有效磷，乙酸銨浸提-火焰光度計法測定速效鉀，磷鉬酸比色法測定蔗糖酶活性(以24 h后1 g土中含葡萄糖的毫克數(shù)表示)，3、5-二硝基水楊酸比色法測定纖維素酶活性(以24 h后1 g土中含葡萄糖的毫克數(shù)表示)，苯酚鈉-次氯酸鈉比色法測定脲酶活性(以24 h后1 g土中含NH3-N的毫克數(shù)表示)，磷酸苯二鈉比色法測定堿性磷酸酶活性(以24 h后1 g土釋放的酚的毫克數(shù)表示)，高錳酸鉀滴定法測定過氧化氫酶活性(以1 g土消耗0.1 mol/L KMnO4的毫升數(shù)表示)，采用水浸提電位法測定pH，水土比為2.5∶1[8]。……