ABTS法測(cè)定龍眼葉乙醇提取物抗氧化活性

李培源，鄢宏俊，賈智若，霍麗妮

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，廣西 南寧 530001)

中藥中的抗氧化劑作為預(yù)防各種疾病的主要成分，受到了人們的廣泛關(guān)注。研究表明，攝入高水平的包括多酚類物質(zhì)在內(nèi)的天然抗氧化劑，可能對(duì)人體健康有益[1-3]。本論文研究龍眼葉乙醇提取物的ABTS自由基清除能力和還原能力，用以尋找來自中藥的天然抗氧化劑。

1 實(shí)驗(yàn)儀器

龍眼葉乙醇提取物的ABTS自由基清除能力和還原能力采用UV1901型紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。2,2'-聯(lián)氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(ABTS)購(gòu)自Sigma公司。

2 方法

2.1 龍眼葉乙醇提取物制備[4-8]

稱取20 g龍眼葉粉末，加入200 mL乙醇(95%)，浸泡3 d并重復(fù)操作3次。去除溶劑得到龍眼葉乙醇提取物。

2.2 ABTS·+自由基清除能力測(cè)定[4-8]

采用蒸餾水為溶劑將ABTS配制成2 mmol/L溶液50 mL，加入200 mL濃度為70 mmol/L K2S2O8水溶液混合均勻以制備ABTS·+溶液。將龍眼葉乙醇提取物稀釋為不同濃度藥液，加入1.9 mL吸光度為0.70±0.02(Abs=734 nm處)ABTS·+溶液混勻，在不同作用時(shí)間時(shí)測(cè)其吸光度并計(jì)算ABTS·+自由基清除率。

2.3 還原能力測(cè)定[4-8]

將一定量龍眼葉乙醇提取物溶液加入2.5 mLPBS溶液(pH值=7.4)和2.5 mL KFe(CN)4(1%)溶液中，50℃恒溫20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液(10%)，離心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL FeCl3(1%)并混勻。在700 nm處測(cè)定吸光度，以蒸餾水為參比。

3 結(jié)果

3.1 龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力[4-8]

3.1.1 不同濃度提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力

圖1 不同濃度龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力

如圖1所示，龍眼葉乙醇提取物在較低濃度即表現(xiàn)出一定的ABTS自由基清除能力。濃度為0.2 mg/mL時(shí)，龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除率超過20%。濃度為0.5 mg/mL時(shí)，龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除率為濃度0.2 mg/mL時(shí)數(shù)值的1.4倍；濃度為0.8 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率增加為濃度0.2 mg/mL時(shí)數(shù)值的1.7倍。在最高濃度2.0 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率達(dá)到了64.2%。可見，隨著龍眼葉乙醇提取物濃度增加，其表現(xiàn)出更強(qiáng)的ABTS自由基清除效果。

3.1.2 不同時(shí)間下提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力[4-8]

圖2 不同時(shí)間龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除能力

不同時(shí)間龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除率如圖2所示。龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除率隨作用時(shí)間增加而增大。濃度為1.5 mg/mL的提取物，在1 min時(shí)的ABTS自由基清除率為41.6%；作用時(shí)間為3 min時(shí)，ABTS自由基清除率為作用時(shí)間1 min數(shù)值的1.1倍。作用時(shí)間延長(zhǎng)至10 min時(shí)，ABTS自由基清除率增加至52.6%。

3.2 龍眼葉乙醇提取物的還原能力[4-8]

圖3 龍眼葉乙醇提取物的還原能力

龍眼葉乙醇提取物的還原能力如圖3所示，該提取物的還原能力與藥液濃度有關(guān)。藥液濃度為0.2 mg/mL時(shí)吸光度為0.32，藥液濃度增加時(shí)其還原能力增加。藥液濃度為0.5和0.8 mg/mL時(shí)，吸光度為0.2 mg/mL濃度下數(shù)值的1.14和1.35倍。藥液濃度為1.0和1.2 mg/mL時(shí)，吸光度為0.2 mg/mL濃度下數(shù)值的1.84和1.89倍。藥液濃度為最高濃度2.0 mg/mL時(shí)，吸光度增大至0.2 mg/mL濃度下數(shù)值的2.51倍。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用ABTS法考察龍眼葉乙醇提取物的抗氧化能力，龍眼葉乙醇提取物在較低濃度即表現(xiàn)出一定的ABTS自由基清除能力。龍眼葉乙醇提取物在濃度為0.2 mg/mL對(duì)ABTS自由基的清除率超過20%；在最高濃度2.0 mg/mL時(shí)，ABTS自由基清除率達(dá)到了64.2%。龍眼葉乙醇提取物對(duì)ABTS自由基的清除率隨作用時(shí)間增加而增大。濃度為1.5 mg/mL的提取物，在1 min時(shí)的ABTS自由基清除率為41.6%；10 min時(shí)，ABTS自由基清除率增加至52.6%。此外，采用還原能力體系對(duì)其抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定，該提取物的還原能力與藥液濃度有關(guān)。藥液濃度為最高濃度2.0 mg/mL時(shí)，吸光度增大至0.2 mg/mL濃度下數(shù)值的2.51倍。