誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎的治療作用

何繼晨，嚴(yán)君逸，程琢玉，程潤(rùn)，趙英杰，魏偉，嚴(yán)尚學(xué)

骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)是一種通常發(fā)生在中老年人身上的慢性關(guān)節(jié)疾病，表現(xiàn)為關(guān)節(jié)僵硬、持續(xù)性疼痛甚至殘疾，并伴隨不同程度的炎癥和軟骨缺損[1]。隨著人口老齡化的加劇，OA的發(fā)病率逐年增高，已經(jīng)發(fā)展成為突出的社會(huì)問(wèn)題。OA是一種退行性疾病，目前尚無(wú)有效的治療措施。臨床上主要通過(guò)關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射潤(rùn)滑補(bǔ)充劑[2]或使用非甾體類藥物、類固醇等緩解癥狀，減輕疼痛并控制炎癥，以及在OA晚期運(yùn)用關(guān)節(jié)置換等外科手術(shù)治療方法[3]。然而這些方法只能暫時(shí)緩解病人疼痛和病情，并不能逆轉(zhuǎn)軟骨損傷和炎癥進(jìn)程[4]。采用細(xì)胞療法修復(fù)和再生關(guān)節(jié)組織的結(jié)構(gòu)和功能成為一種新的治療選擇。

間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有多向分化潛能，能夠分化成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)等多種成體細(xì)胞，而且還具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)特性，現(xiàn)已被應(yīng)用于免疫和炎癥性疾病[5-6]。骨髓源MSCs是最早研究的MSCs，但因其取材侵襲性強(qiáng)，體內(nèi)數(shù)量有限等，已經(jīng)逐漸被其他來(lái)源的MSCs所取代。人臍帶來(lái)源的MSCs(human umbilical cord derived MSCs，hUC-MSCs)是MSCs的另一種重要細(xì)胞來(lái)源，因?yàn)槠淙菀追蛛x培養(yǎng)、低免疫原性和強(qiáng)大的體外擴(kuò)增能力而被廣泛運(yùn)用。有研究發(fā)現(xiàn)，hUC-MSCs可抑制IL(白細(xì)胞介素)-1β誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，并通過(guò)向軟骨分化從而修復(fù)損傷的軟骨組織[7]。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來(lái)源MSCs(induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells，iPSC-MSCs)是將成熟體細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液后加入特定轉(zhuǎn)錄因子重編程回到胚胎狀態(tài)，然后在MSCs培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)增并誘導(dǎo)分化成MSCs。iPSC-MSCs作為一種新型干細(xì)胞，比傳統(tǒng)干細(xì)胞具有更有效、更可靠的再生能力，更容易從成人組織中通過(guò)重編程獲得，并顯示出更大的增殖潛能，可產(chǎn)生大量功能均一的MSCs[8]。有研究表明，iPSC-MSCs可誘導(dǎo)成骨分化，iPSC-MSCs來(lái)源的外泌體可促進(jìn)血管生成，防止股骨頭壞死等[9-10]；iPSC-MSCs移植可促進(jìn)新西蘭兔關(guān)節(jié)表面缺損處生成新的透明軟骨[11]，也可通過(guò)旁分泌途徑分泌一些因子抑制半胱氨天冬氨酸蛋白酶的裂解從而參與炎癥調(diào)節(jié)過(guò)程[12]。iPSC-MSCs已經(jīng)成為骨髓源、臍帶源等MSCs和再生藥物治療OA的一種很有前途的替代細(xì)胞來(lái)源。盡管關(guān)于iPSC-MSCs治療OA的研究很多，但是iPSC-MSCs的療效、副作用及其作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步確認(rèn)和深入研究。

基于iPSC-MSCs的優(yōu)良特性和在軟骨損傷方面的修復(fù)能力，本研究通過(guò)建立大鼠實(shí)驗(yàn)性骨關(guān)節(jié)動(dòng)物模型，觀察關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠的治療作用并探討其軟骨保護(hù)作用機(jī)制。

本研究起止時(shí)間為2017年11月至2018年10月。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠50只，每只180～200 g，雌雄各半，由安徽醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SYXK(皖)2017-006；合格證號(hào)No.34000200000978,2017-10]，自由飲食飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理號(hào)LLSC20170382)。

1.2 藥品與試劑 iPSC-MSCs(批號(hào)NCIMP2018013101，4×108個(gè)細(xì)胞/毫升)和hUC-MSCs(批號(hào)NCMP2018013101，4×108個(gè)細(xì)胞/毫升)由安徽中盛溯源生物科技有限公司提供，給藥前均經(jīng)表型鑒定、計(jì)數(shù)和活力檢查，細(xì)胞代次均為第3代。玻璃酸鈉注射液(hyaluronate，HA)，25 mg∶2.5 mL，上海景峰制藥有限公司產(chǎn)品(批號(hào)20171013)。抗MMP-13多克隆抗體(ab39012)、抗CollagenⅡ(ab34712)多克隆抗體、抗ADAMTS-5多克隆抗體(ab41037)為Abcam公司產(chǎn)品。

1.3 OA模型的建立 采用Hulth法建立大鼠OA模型，造模前大鼠禁食12 h。用3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位置于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)備皮消毒右側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)，從髕骨旁內(nèi)側(cè)切開(kāi)暴露膝關(guān)節(jié)，然后切斷內(nèi)側(cè)副韌帶，打開(kāi)關(guān)節(jié)腔；隨后，切除前交叉韌帶和后交叉韌帶，行抽屜實(shí)驗(yàn)確定前后交叉韌帶是否被切斷；切除內(nèi)側(cè)半月板。術(shù)中確保關(guān)節(jié)面無(wú)損傷。最后，徹底止血后縫合切口，假手術(shù)組除了不切斷前交叉韌帶、后交叉韌帶和內(nèi)側(cè)副韌帶、半月板外，其余處理均同模型大鼠。術(shù)后不予固定手術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)，同時(shí)，所有大鼠每天肌內(nèi)注射20萬(wàn)單位青霉素預(yù)防感染，持續(xù)3 d。術(shù)后1周以后，每天用小動(dòng)物轉(zhuǎn)棒儀對(duì)各組大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，以加重OA大鼠患肢負(fù)重[13]。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組和給藥方案 術(shù)后第12周，編號(hào)后，運(yùn)用Excel表格隨機(jī)分組功能，將模型大鼠隨機(jī)分為4組：模型組、iPSC-MSCs組(2.0×106個(gè)細(xì)胞/只)、hUC-MSCs組(2.0×106個(gè)細(xì)胞/只) 和HA組(10 mg/mL)。另設(shè)假手術(shù)組作為對(duì)照。每組10只。iPSC-MSCs組和hUC-MSCs組每只大鼠一次性在術(shù)側(cè)關(guān)節(jié)腔注射50 μL細(xì)胞；HA組大鼠每周一次關(guān)節(jié)腔注射50 μL HA，共5次；假手術(shù)組大鼠同法注射50 μL磷酸鹽緩沖液。所有大鼠于給藥5周后處死。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 關(guān)節(jié)直徑差值檢測(cè) 術(shù)后每天觀察大鼠的飲食和活動(dòng)情況，并觀察傷口愈合情況。每周測(cè)量和記錄動(dòng)物體質(zhì)量，處死動(dòng)物后用游標(biāo)卡尺測(cè)量每只動(dòng)物手術(shù)側(cè)和對(duì)側(cè)膝關(guān)節(jié)的直徑，并計(jì)算兩側(cè)膝關(guān)節(jié)直徑的差值。

1.5.2 X線檢查 給藥結(jié)束后1周，每組取4只大鼠以3%戊巴比妥鈉麻醉，行X線檢查大鼠手術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)，并從膝關(guān)節(jié)腔大小、骨質(zhì)硬化、骨贅形成等方面變化按凱爾格倫-勞倫斯(Kellgren-Lawrence)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[14]進(jìn)行評(píng)分。

1.5.3 大鼠膝關(guān)節(jié)Pelletier評(píng)分 給藥結(jié)束處死大鼠后，留取膝關(guān)節(jié)標(biāo)本，在手術(shù)顯微鏡下暴露關(guān)節(jié)腔，觀察股骨髁和脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)面是否平整，并根據(jù)股骨內(nèi)、外髁及脛骨平臺(tái)等軟骨表面退變情況按照Pelletier大體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[15]進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分越高表示關(guān)節(jié)面軟骨損傷越嚴(yán)重。

1.5.4 大鼠膝關(guān)節(jié)病理學(xué)檢查 處死大鼠后，取股骨內(nèi)髁關(guān)節(jié)面，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%的甲醛溶液室溫固定48 h，脫鈣，石蠟縱向包埋，切片后HE染色。由獨(dú)立觀察者根據(jù)Mankin評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[16]對(duì)每只動(dòng)物的軟骨結(jié)構(gòu)、軟骨細(xì)胞數(shù)量及潮線完整度進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分，評(píng)分越高表示軟骨結(jié)構(gòu)破壞越嚴(yán)重。

1.5.5 膝關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-13、Ⅱ型膠原(CollagenⅡ)、解聚蛋白樣金屬蛋白酶(ADAMTS)-5的檢測(cè) 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)MMP-13、CollagenⅡ、ADAMTS-5在大鼠膝關(guān)節(jié)中的表達(dá)。大鼠膝關(guān)節(jié)經(jīng)脫鈣、石蠟縱向包埋切片后，分別用乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復(fù)液和3%過(guò)氧化氫進(jìn)行抗原修復(fù)并阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物的干擾，一抗孵育4 ℃過(guò)夜，3遍磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌后滴加生物素二抗室溫孵育25 min，染色、封片后在光鏡下觀察。染色結(jié)果用Image J軟件分析量化。

2 結(jié)果

2.1 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)直徑差值的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，與假手術(shù)組大鼠相比，模型組大鼠膝關(guān)節(jié)直徑差值顯著增大，提示手術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)直徑顯著增大、關(guān)節(jié)變形，OA模型誘導(dǎo)成功；與模型組相比，iPSC-MSCs、hUC-MSCs給藥均可顯著降低大鼠膝關(guān)節(jié)直徑差值[(1.00±0.40)比(2.34±0.44),P<0.01]、[(1.33±0.41)比(2.34±0.44),P<0.020]，HA給藥也有類似作用[(1.48±0.21)比(2.34±0.44),P<0.049]。

2.2 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)X線評(píng)分的影響 X線檢查結(jié)果如表1所示。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠出現(xiàn)明顯的關(guān)節(jié)腔狹窄，部分形成可見(jiàn)的骨贅和骨質(zhì)硬化，提示OA模型誘導(dǎo)成功；與模型組相比，iPSC-MSCs給藥可降低大鼠膝關(guān)節(jié)X線評(píng)分等級(jí)和重度(3、4級(jí))OA動(dòng)物數(shù)量，改善關(guān)節(jié)腔結(jié)構(gòu)、減少骨贅形成和骨質(zhì)硬化作用。

表1 OA大鼠膝關(guān)節(jié)X線評(píng)分與模型組的比較/只

注：與模型組比較，aZ=2.381,P=0.029;bZ=2.205,P=0.029;cZ=1.517,P=0.200;dZ=0.168,P=0.114

2.3 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)Pelletier評(píng)分的影響 解剖動(dòng)物膝關(guān)節(jié)可見(jiàn)，假手術(shù)組大鼠關(guān)節(jié)面光滑平整，形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，關(guān)節(jié)腔內(nèi)未見(jiàn)明顯的關(guān)節(jié)積液及滑膜增生。模型組大鼠關(guān)節(jié)磨損嚴(yán)重，軟骨面粗糙，關(guān)節(jié)面色澤暗淡，部分動(dòng)物出現(xiàn)軟骨剝落，軟骨下骨質(zhì)暴露。圖2結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠Pelletier評(píng)分顯著增高；與模型組相比，給予iPSC-MSCs和hUC-MSCs均能顯著降低Pelletier評(píng)分[(1.22±0.67)比(3.22±0.83),P<0.01]、[(2.00±0.71)比(3.22±0.83),P<0.01]，改善軟骨損傷，且iPSC-MSCs降低Pelletier評(píng)分較hUC-MSCs[(1.22±0.67)比(2.00±0.71),P=0.021]和HA[(1.22±0.67)比(1.89±0.60),P=0.045]給藥差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)病理的影響 病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果及評(píng)分如圖1所示，假手術(shù)組大鼠關(guān)節(jié)骨組織正常，軟骨細(xì)胞分布均勻，排列規(guī)律整齊，4層結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)，潮線完整平滑。模型組大鼠軟骨邊緣部分缺損，軟骨細(xì)胞排列紊亂，成簇分布，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和不規(guī)則裂隙深達(dá)輻射層，潮線漂移中斷或出現(xiàn)多重潮線。相比于模型組，iPSC-MSCs給藥可顯著減輕關(guān)節(jié)軟骨退變狀況，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，改善關(guān)節(jié)病理[(5.50±1.29)比(1.75±0.50),P<0.01]。與hUC-MSCs組和陽(yáng)性藥HA組比較，iPSC-MSCs對(duì)軟骨結(jié)構(gòu)的改善和降低病理Mankin評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(3.25±1.26)比(1.75±0.50),P=0.041]、[(4.00±0.82)比(1.75±0.50),P=0.004]。

2.5 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)中CollagenⅡ、MMP-13、ADAMTS-5表達(dá)的影響 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨中CollagenⅡ、MMP-13、ADAMTS-5含量，陽(yáng)性結(jié)果為軟骨細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色染粒。結(jié)果如圖2～4所示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中CollagenⅡ降解嚴(yán)重，表達(dá)顯著減少[(66.97±2.82)比(35.87±8.52),P<0.01]；與模型組相比，iPSC-MSCs和hUC-MSCs給藥組能顯著增加軟骨基質(zhì)中CollagenⅡ表達(dá)[(35.87±8.52)比(69.90±7.65),P<0.01]、[(35.87±8.52)比(61.00±5.52),P<0.01]，陽(yáng)性藥HA組CollagenⅡ表達(dá)水平低于iPSC-MSCs組[(49.31±12.32)比(69.90±7.65),P=0.010]，提示iPSC-MSCs可減少OA軟骨基質(zhì)的破壞，保護(hù)軟骨基質(zhì)。檢測(cè)MMP-13和ADAMTS-5結(jié)果顯示，模型組大鼠關(guān)節(jié)軟骨中MMP-13和ADAMTS-5表達(dá)顯著高于假手術(shù)組[(59.25±5.56)比(21.50±4.51),P<0.01]、[(52.25±10.47)比(14.50±4.20),P<0.01]；各組給藥均可顯著降低模型大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨MMP-13和ADAMTS-5表達(dá)水平，其中iPSC-MSCs組MMP-13和ADAMTS-5的表達(dá)水平明顯低于hUC-MSCs組[(33.75±5.85)比(43.25±6.02),P=0.028]、[(22.25±6.13)比(36.50±4.65),P=0.011]和HA組[(33.75±5.85)比(51.75±5.56),P<0.01]、[(22.25±6.13)比(40.75±5.56),P=0.001]，提示iPSC-MSCs可以下調(diào)關(guān)節(jié)軟骨中MMP-13和ADAMTS-5表達(dá)，降低軟骨基質(zhì)降解酶的水平。

3 討論

Hulth模型是研究OA的一種經(jīng)典造模方法，通過(guò)切除內(nèi)側(cè)副韌帶暴露大鼠關(guān)節(jié)腔，再切除內(nèi)側(cè)半月板和前后交叉韌帶，破壞關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致關(guān)節(jié)應(yīng)力失衡，增加關(guān)節(jié)間的摩擦，從而達(dá)到類似與人OA的病理改變。但由于動(dòng)物術(shù)后的活動(dòng)情況不一致等原因，模型成型率及OA嚴(yán)重度均不甚理想。為了提高模型的成型率，我們?cè)趧?dòng)物手術(shù)1周后每天用小動(dòng)物轉(zhuǎn)棒儀對(duì)模型大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練10 min，轉(zhuǎn)速?gòu)穆娇欤铀佟⒓又鼗贾呢?fù)擔(dān)，顯著提高了OA大鼠模型的成型率和嚴(yán)重度。造模12周后，大鼠手術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)增粗、硬骨變形，X線檢查結(jié)果顯示手術(shù)側(cè)關(guān)節(jié)腔變窄，骨贅形成，出現(xiàn)骨質(zhì)硬化，提示OA大鼠造模成功，總體成模率達(dá)90%。

iPSCs是類似于胚胎干細(xì)胞的一種新型多能干細(xì)胞，可由病人自身的特定體細(xì)胞誘導(dǎo)，細(xì)胞質(zhì)量可控，來(lái)源廣泛，可以克服hUC-MSCs存在的倫理學(xué)、來(lái)源受限等問(wèn)題，被認(rèn)為是治療各種組織損傷有希望的療法[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，iPSC-MSCs可顯著降低大鼠手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)直徑差值，降低大鼠膝關(guān)節(jié)面Pelletier評(píng)分和X線評(píng)分，改善關(guān)節(jié)腔結(jié)構(gòu)，減輕骨質(zhì)硬化程度和骨贅等形成，提示iPSC-MSCs可緩解由于手術(shù)造成的關(guān)節(jié)不穩(wěn)，對(duì)膝關(guān)節(jié)面之間摩擦而引起的骨質(zhì)增生和硬化具有保護(hù)作用；iPSC-MSCs關(guān)節(jié)腔注射可減少軟骨層缺損，改善潮線完整度并降低病理學(xué)評(píng)分，修復(fù)后的軟骨具有與正常軟骨相似的典型透明特征，提示iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠具有明顯的治療作用，且在降低Pelletier評(píng)分、改善關(guān)節(jié)病理和軟骨基質(zhì)退變方面較上市制劑HA以及臍帶源MSCs具有一定的優(yōu)勢(shì)。

細(xì)胞外基質(zhì)及軟骨下骨合成和降解的失衡是OA發(fā)生的重要機(jī)制。關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)中硫酸軟骨素蛋白多糖(aggrecan)與糖胺多糖透明質(zhì)酸形成巨大的聚集體，吸水后膨脹的聚集體受另一種軟骨成分CollagenⅡ網(wǎng)的束縛，這種復(fù)合結(jié)構(gòu)賦予軟骨基質(zhì)抗壓強(qiáng)度及減震性能[19]。基質(zhì)金屬蛋白酶家族MMP-13是降解軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶系，可以通過(guò)過(guò)度切割軟骨基質(zhì)中含量最多的CollagenⅡ，促進(jìn)CollagenⅡ三螺旋結(jié)構(gòu)的裂解膨脹[20]，在OA病人關(guān)節(jié)軟骨中，MMP-13含量升高引起軟骨基質(zhì)網(wǎng)狀Ⅱ型膠原結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨缺損。Aggrecan是構(gòu)成軟骨基質(zhì)的另一重要組成部分，可以保持軟骨的彈性、含水量和結(jié)構(gòu)完整性。解聚蛋白樣金屬蛋白酶家族中ADAMTS-5可以通過(guò)降解aggrecan，導(dǎo)致軟骨結(jié)構(gòu)完整性喪失和關(guān)節(jié)功能受損，其含量與OA疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[21]。iPSC-MSCs關(guān)節(jié)腔注射可抑制基質(zhì)降解酶MMP-13和ADAMTS-5的表達(dá)，并增加基質(zhì)中CollagenⅡ的表達(dá)，提示iPSC-MSCs關(guān)節(jié)腔注射可以抑制軟骨降解、促進(jìn)Ⅱ型膠原形成，發(fā)揮軟骨保護(hù)作用。

綜上，iPSC-MSCs關(guān)節(jié)腔注射對(duì)大鼠OA具有明顯的治療作用，其機(jī)制與恢復(fù)軟骨基質(zhì)合成與降解的失衡有關(guān)。

注：a表示潮線，b表示軟骨面缺損或平整性，c表示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，d表示軟骨細(xì)胞；與假手術(shù)組相比，eP<0.01；與模型組相比，fP<0.05，gP<0.01；與iPSC-MSCs組相比，hP<0.05，iP<0.01圖1 iPSC-MSCs對(duì)大鼠膝關(guān)節(jié)病理的影響：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為iPSC-MSCs(2.0×106)組，D為hUC-MSCs(2.0×106)組，E為HA(10 mg/mL)組，A～E圖均HE染色×100；F為各組大鼠膝關(guān)節(jié)病理Mankin評(píng)分

注：與假手術(shù)組相比，aP<0.01；與模型組相比，bP<0.05,cP<0.01；與iPSC-MSCs組相比，dP<0.05 圖2 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)CollagenⅡ表達(dá)的影響：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為iPSC-MSCs(2.0×106)組，D為hUC-MSCs(2.0×106)組，E為HA(10 mg/mL)組，A～E圖均免疫組織化學(xué)染色×100；F為各組大鼠膝關(guān)節(jié)CollagenⅡ表達(dá)

注：與假手術(shù)組相比，aP<0.01；與模型組相比，bP<0.01；與iPSC-MSCs組相比，cP<0.05，dP<0.01圖3 iPSC-MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)MMP-13表達(dá)的影響：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為iPSC-MSCs(2.0×106)組，D為hUC-MSCs(2.0×106)組，E為HA(10 mg/mL)組，A～E圖均免疫組織化學(xué)染色×1 000；F為各組大鼠膝關(guān)節(jié)MMP-13表達(dá)

注：與假手術(shù)組相比，aP<0.01；與模型組相比，bP<0.01；與iPSC-MSCs組相比，cP<0.05，dP<0.01圖4 MSCs對(duì)OA大鼠膝關(guān)節(jié)ADAMTS-5表達(dá)的影響：A為假手術(shù)組，B為模型組，C為iPSC-MSCs(2.0×106)組，D為hUC-MSCs(2.0×106)組，E為HA(10 mg/mL)組，A～E圖均免疫組織化學(xué)染色×1 000；F為各組大鼠膝關(guān)節(jié)ADAMTS-5表達(dá)