高血壓病中醫(yī)肝膽濕熱證患者血清蛋白質組學分析

馬麗

（山西醫(yī)科大學晉祠學院，山西 太原 030025）

0 引言

高血壓為臨床常見病，以體循環(huán)動脈壓升高為主要特征，如未及時控制血壓，極易對患者的健康造成威脅。中醫(yī)認為，根據發(fā)病原因的不同，可將高血壓分為肝膽濕熱證等多種證型。有研究指出，高血壓病中醫(yī)肝膽濕熱證患者，蛋白組學具有獨有的特征。本文于本院2016年1月至2017年12月收治的高血壓患者中，隨機選取60例作為樣本，對患者的血清蛋白質組學進行了分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的高血壓患者60例作為樣本，根據中醫(yī)證型的不同，將其分為觀察組與對照組2組。觀察組患者資料：例數：30例。性別：男:女=15:15。年齡39-87歲，平均（58.45±2.15）歲；病程1-5年，平均（3.41±0.87）年。對照組患者資料：例數：30例。性別：男:女=14:16；年齡42-89歲，平均（58.60±2.32）歲；病程1.5-5.5年，平均（3.52±0.99）年。同時選取同時期來本院健康檢查的人群30例作為空白組，資料如下：男:女=15:15；年齡45-87歲，平均（58.50±2.13）歲。3組樣本資料對比，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入標準

①觀察組所選患者均為高血壓病中醫(yī)肝膽濕熱證患者。②對照組所選高血壓患者，證型均非肝膽濕熱證。③空白組均為健康人群。④所有樣本均無嚴重心血管疾病或惡性腫瘤。⑤患者無肝腎系統(tǒng)重大疾病。⑥自愿參與研究。

1.3 方法

所有樣本均采用相同方法檢驗：①晨起空腹采集肘靜脈血3 mL，置于BD真空采血管中。②4℃環(huán)境下靜置1h后，3000 r/min離心10 min，將血清樣本以100 μL的體積劃分，共分為5份，置于-86℃環(huán)境下存儲。③取出樣本，冰浴，3500 r/min離心10 min，取離心后的樣本10 μL，加U9緩沖液20 μL混合。④混合液中加入50 μLWCX磁性微球50 g/L，分離2 min后，棄上清液，以100 mmol/L的劑量，加NaAc共100 μL。⑤將得到的物質活化5 min，后繼續(xù)活化5 min，加100μL血清，孵育1 h。⑥分離2 min后，棄上清液，加NaAc共100μL，洗滌5 min，后繼續(xù)洗滌5min。⑦蛋白洗脫5 min，加飽和SPA共5μL，混勻后，采用PBS-IIc型蛋白質芯片檢測蛋白質譜。采用Proteinchip Software 3.2.0（Ciphergen Inc.USA.）軟件，收集蛋白質質譜數據。采用Biomarker PatternsTMSoftware 5.0（Ciphergen Inc.USA.）軟件，建立模型并生成決策樹，采用SAS 9.12軟件對數據進行統(tǒng)計與整理。采用t檢驗，分析各組之間蛋白質峰之間的關系。采用ANOVA語句以及DUCAN語句，計算方差并進行組間對比。P＜0.05代表數據差異有統(tǒng)計學意義。

1.4 觀察指標

觀察觀察組與對照組及空白組比較表達增高的蛋白質峰。

2 結果

2.1 觀察組與對照組及空白組比較表達增高的蛋白質峰

（1）觀察組與對照組比較表達增高的蛋白質峰。檢測結果提示，觀察組與對照組相比，有統(tǒng)計學意義的蛋白質峰共98個，有差異的蛋白質峰共132個。觀察組蛋白質峰表達增高者，共14個，詳見表1。

表1 觀察組與對照組比較表達增高的蛋白質峰（±s）

表1 觀察組與對照組比較表達增高的蛋白質峰（±s）

M/Z 觀察組 對照組 P 2141.055 1.71±0.14 0.91±0.50 1.1E-06 2036.369 1.04±0.05 0.62±0.08 0.000147 2162.394 1.39±0.18 0.61±0.10 0.009856 2130.365 0.96±0.62 0.40±0.32 0.000131 2276.294 2.38±0.39 1.00±0.04 0.006845 2438.487 0.80±0.74 0.40±0.09 0.001518

（2）觀察組與空白組比較表達增高的蛋白質峰。觀察組與空白組對比，有差異的蛋白質峰，共182個，差異顯著的蛋白質峰，共172個。其中觀察組蛋白質峰表達增高者，共23個，部分結果詳見表2。

3 討論

表2 觀察組與空白組比較表達增高的蛋白質峰（±s）

表2 觀察組與空白組比較表達增高的蛋白質峰（±s）

M/Z 觀察組 空白組 P 2139.064 1.71±0.14 0.41±0.04 0.005471 2143.155 1.04±0.05 0.39±0.60 0.004974 2214.069 1.39±0.18 0.35±0.41 0.000314 2220.641 0.96±0.62 0.23±0.20 0.000691 2325.288 2.38±0.39 0.65±0.31 0.021470 2568.490 0.80±0.74 0.20±0.29 0.031694

祖國醫(yī)學認為，高血壓病發(fā)病，多由人體體質、情志、飲食等因素相互作用所導致。頭痛、頭暈、耳鳴、多夢等，為高血壓病患者的主要癥狀。長期處于緊張的精神狀態(tài)，體質虛弱、飲食不規(guī)律，均容易誘發(fā)該疾病。從病機方面講，高血壓病主要由肝、脾、腎陰陽失調所導致[1]。日久，則脈絡不利、血脈瘀阻，累及其他臟器，既可誘發(fā)中風及暈厥等疾病。可見，作為臨床常見的慢性病，高血壓病已被證實與心血管疾病及腎功能障礙顯著相關[2]。如未及時治療，極容易誘發(fā)其他嚴重疾病，對患者的生命造成威脅。

目前，臨床所采用的蛋白質分析方法，效率極高。且可借助計算機軟件，實現對蛋白質譜特征的分析。繼而找出有差異的、有統(tǒng)計學意義的，以及高表達與低表達的蛋白質譜，最終達到判斷疾病與疾病之間關系的目的[3-4]。本課題所標記的蛋白標記物，具有一定的代表性，可有效反映出證候與證候之間的共性，進而將其與其他證候相互區(qū)分[5]。采用上述方法標記蛋白標記物，可使不同證型患者內在血清蛋白質的變化情況，得以明顯的體現，進而為疾病證型的鑒別提供參考。

綜上所述，高血壓病中醫(yī)肝膽濕熱證患者，多伴隨蛋白質特異表達現象。表明，中醫(yī)關于高血壓病的辨證診治方法，存在確切的生物學依據[6-7]。臨床可將中醫(yī)診治方法，應用到高血壓病的治療中。根據患者的證型，為之制定針對性的治療方案，使血壓控制效果得以改善，使患者的機體健康水平得以提升。