魚油中21種脂肪酸的檢測

聶法慧

青島菲優(yōu)特檢測有限公司 山東青島 266000

深海魚油富含不飽和脂肪酸，主要有效成分為歐米伽3不飽和脂肪酸。歐米伽3不飽和脂肪酸的主要成分為EPA（二十碳五稀酸）、DHA（二十二碳六稀酸）具有增強記憶、改善動脈硬化[1]、促進嬰幼兒大腦發(fā)育等重要功效。因此，對其有效組分進行測定具有重要意義。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器與分析條件。島津GC2010plus氣相色譜儀。

色譜柱：SP-2560，100m×0.25mm×0.20μm；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID）。

載氣：高純氮氣99.999%；色譜柱流量：1.67mL/min；進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：260℃；溫度程序：初始溫度140℃保留5min，140-152℃升溫速度2℃/min；152-175℃升溫速度3℃/min；175-205℃，升溫速度4℃/min；205-230℃,升溫速度10℃/min，保留20min；230-240℃，升溫速度5℃/min，保留5min；進樣量：1μL；分流比：40：1。

1.2 試劑和溶液

實驗用水為GB/T6682規(guī)定的一級用水。

（1）氫氧化鈉：優(yōu)級純。

（2）甲醇：色譜純。

（3）無水硫酸鈉：分析純。

（4）氯化鈉：分析純。

（5）三氟化硼-甲醇溶液：14%。

（6）異辛烷：色譜純。

（7）0.5M氫氧化鈉–甲醇溶液：2g氫氧化鈉溶于100mL甲醇中。該溶液放置較長時間，可能會產(chǎn)生少量白色碳酸鈉沉淀，不影響甲酯的制備。

（8）飽和氯化鈉溶液：36g氯化鈉溶于100mL水。

1.3 標準曲線

將32種脂肪酸甲酯混合標準品（上海安譜GLC-461）配成標準系列，濃度分別為3，10，50，100，150μg/mL，以30μg/mL二十三烷酸甲酯為內標，以脂肪酸甲酯與內標物濃度比為橫坐標，響應峰面積比為縱坐標，作標準曲線[2]。

1.4 樣品制備

樣品前處理。準確稱取樣品0.02g于已準確加入0.9mg二十三烷酸甲酯的50mL玻璃離心管中，加入1.5mL氫氧化鈉-甲醇溶液，蓋緊蓋子，渦旋混合，沸水浴5min，通風櫥冷卻，加2mL三氟化硼-甲醇溶液，蓋緊蓋子，渦旋混合，沸水浴30min，冷卻，加5mL異辛烷，充氮氣20s，蓋緊蓋子，渦旋混合。加5mL飽和氯化鈉溶液，充氮氣20s，蓋緊蓋子，渦旋混合，離心機2500r/min離心10min。取上清液加入盛有0.5g無水硫酸鈉的帶蓋試管中，混勻，上清液稀釋6倍過有機過濾器（0.22μm），氣相色譜儀檢測。

2 結果與討論

2.1 定性與定量

（1）定性。由于脂肪酸屬于同系物，出峰順序與碳鏈長度有一定的關系，對照標準圖譜，判斷21種脂肪酸甲酯的出峰順序，見圖。

（2）定量。以二十三烷酸甲酯為內標，以脂肪酸甲酯與內標物濃度比為橫坐標，響應峰面積比為縱坐標，作標準曲線。將處理好的待測液注入氣相色譜儀中，以保留時間定性，以目標峰與內標峰面積比與標準曲線比較確定待測液中脂肪酸甲酯的濃度[3]。

樣品中脂肪酸含量（%）計算如下式：

式中：

X——樣品中脂肪酸的質量分數(shù)；

C——待測液中脂肪酸甲酯濃度，單位：μg/mL；

V——定容體積，單位：mL；

f——稀釋倍數(shù)；

m——樣品質量，單位：g；

FFAMEi-FAi——脂肪酸甲酯i轉化成脂肪酸的系數(shù)。

2.2 標準曲線

在實驗條件下，21種脂肪酸甲酯響應具有良好的線性關系，R2大于0.999。

2.3 方法的精密度和準確性

（1）方法精密度。選取兩個魚油作為樣品，每個樣品測定10次，分別計算21種脂肪酸含量，相對標準偏差在1.8%-4.8%之間，符合檢測要求。

（2）方法準確度。在魚油樣品種做脂肪酸甲酯的添加回收，平行測定10次，平均回收率在97-105%之間。購買有證標準物質（FapasT14152）進行測定，結果都在允許誤差范圍內。該方法準確度符合檢測要求[4]。

3 結語

通過測定結果可以看出，本方法能夠對魚油中的脂肪酸進行較好的分離定性和定量檢測，具有較好的穩(wěn)定性和準確性。能夠較為準確的檢測魚油中脂肪酸的含量。