HPLC法測(cè)定婦炎安康膠囊中綠原酸的含量

牟明芳，方慧祥

（1.云南省執(zhí)業(yè)藥師注冊(cè)中心，云南 昆明 650101；2.曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南 曲靖 655000）

婦炎安康膠囊沒(méi)有對(duì)處方中任何一味中藥進(jìn)行含量測(cè)定。本文參照中國(guó)藥典[1]及有關(guān)文獻(xiàn)[2]，建立了HPLC法測(cè)定婦炎安康膠囊中綠原酸的含量的方法,為婦炎安康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津LC-20A型高效液相色譜儀（配有四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，VCD檢測(cè)器，柱溫箱，真空在線脫氣機(jī)，Chemstation化學(xué)工作站）（日本島津公司），METTLER AE240型電子天平（瑞士梅特勒公司）。

1.2 材料

婦炎安康膠囊（云南省曲靖市第一人民醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20170302，20170501，20170802，規(guī)格：0.4 g/粒）。綠原酸對(duì)照品（購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-201716，含量：99.3%）。乙腈（德國(guó)默克公司）為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量，用50%甲醇制成每1 mL含綠原酸503.781 μg的對(duì)照品溶液儲(chǔ)備液，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 ml，置10 ml容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得對(duì)照品使用液(質(zhì)量濃度為50.3781 μg/mL) 。

2.1.2 供試品溶液：取婦炎安康膠囊10粒，混勻，稱(chēng)取約0.6 g（相當(dāng)于1.5粒的樣品），精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲（300 W，40 Hz）提取30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液：按處方比例及工藝制法，制得不含金銀花的陰性樣品。按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：依利特C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫為30℃；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(17:83)；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2、0.5、1.0、2.5、5.0 mL分別置10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得標(biāo)準(zhǔn)系列。分別取10 μl進(jìn)樣，記錄峰面積。以綠原酸的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y=24942x+1396，r=1.0000(n=5)。結(jié)果表明，綠原酸的質(zhì)量濃度在10.0756～251.8905μg/mL的范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系。綠原酸對(duì)照品、供試品及陰性樣品的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 精密度考察

精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下的對(duì)照品使用液，在“2.2”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，峰面積RSD為0.16%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.5 專(zhuān)屬性考察

吸取“2.1.3”項(xiàng)下的陰性樣品溶液，在“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性樣品在與對(duì)照品保留時(shí)間相應(yīng)位置上，沒(méi)有相應(yīng)的色譜峰，表明陰性樣品不干擾測(cè)定。

2.6 重復(fù)性考察

取同一批樣品（批號(hào)：20170302）6份，按“2.1.2”項(xiàng)下制備，在“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定綠原酸的含量，其含量的RSD為0.97%。

2.7 穩(wěn)定性考察

取“2.1.2”項(xiàng)下制備的同一樣品，室溫下放置，分別以0,2,4,8,16,24 h時(shí)，在“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，RSD為1.09%（n=6）。表明樣品24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率考察

取已測(cè)定含量的婦炎安康膠囊(批號(hào)：20170302)6份，每份約0.3 g，精密稱(chēng)定，精密加入綠原酸對(duì)照品儲(chǔ)備液1.25 ml，再精密加入50%甲醇23.75 mL，按“2.1.2”項(xiàng)下操作。在“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，測(cè)得綠原酸的加樣回收率見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果

取3批婦炎安康膠囊，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

3 討 論

3.1 樣品提取方法的選擇

對(duì)用不同濃度的甲醇（50%、75%、100%）作為提取溶劑，超聲和回流兩種提取方法，以及在以上基礎(chǔ)上提取時(shí)間（15、30、45、60分鐘）上進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)當(dāng)濃度和提取時(shí)間均相同時(shí)，超聲和回流提取效率差異不大，但回流方式雜質(zhì)偏多，當(dāng)用50%的甲醇超聲提取30分鐘時(shí)，提取效果較好且雜質(zhì)少，給分離帶來(lái)方便。從而確定為本試驗(yàn)的提取方法為50%的甲醇超聲提取30分鐘。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取綠原酸對(duì)照品的50%甲醇溶液在200 nm～550 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，綠原酸在327 nm處有最大吸收。將檢測(cè)波長(zhǎng)定為327 nm。

3.3 流動(dòng)相的選擇

把流動(dòng)相初步定為甲醇-0.1%磷酸溶液系統(tǒng)，經(jīng)過(guò)對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行反復(fù)調(diào)整，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動(dòng)相比例為甲醇-0.1%磷酸溶液(17:83)時(shí)，分離良好，最終確定為甲醇-0.1%磷酸溶液(17:83)為本實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相。

4 結(jié) 論

本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、分離度好，可用于測(cè)定婦炎安康膠囊中綠原酸的含量。