水中涕滅威、克百威和甲萘威的測定柱后衍生—液相色譜法

趙祺平 韓 梅 李慧慧 李 明

（1.淮河流域水資源保護局淮河流域水環境監測中心 蚌埠 233001 2.棗莊市水文局 棗莊 277100）

1 前言

目前氨基甲酸酯類農藥的測定方法主要有酶抑制法、氣相色譜法、液相色譜法、氣質聯用法、液質聯用法和柱后衍生—液相色譜法。食品、農作物中氨基甲酸酯類農藥測定方法較多，但關于水體中氨基甲酸酯類農藥的測定研究較少，只有個別早期文獻有所報道。因此，研究建立一種快速、簡便、可靠的水體中氨基甲酸酯類農藥分析方法，顯得尤為必要。

2 實驗部分

2.1 儀器和試劑

儀器：安捷倫1100液相色譜儀（配置熒光檢測器）；Pickering Pinnacle PCX柱后衍生儀；色譜柱：C18，150mm×4.6mm×5μm。

試劑：甲醇（色譜純）；二氯甲烷（色譜純）；四硼酸鈉溶液：稱取7.6g十水四硼酸鈉溶于800mL水中，用水定容至1000mL；水解試劑：稱取2.0g氫氧化鈉溶于800mL水中，再緩緩加入0.5g聚丙烯酸鈉，輕輕攪拌使其溶解，用水定容至1000mL，該溶液使用前需用微孔濾膜過濾，并用氦氣脫氣或在線脫氣；反應試劑：稱取0.10g鄰苯二甲醛溶于10mL甲醇中，再將其加入1000mL四硼酸鈉溶液中，混合均勻后用微孔濾膜過濾，用氦氣脫氣或在線脫氣，再加入2.0g 2-（二甲胺基）乙硫醇鹽酸鹽，混勻；涕滅威、克百威和甲萘威標準溶液：市售有證標準物質配制。

2.2 儀器條件

流動相：甲醇和水，梯度淋洗條件如表1所示。水解試劑和反應試劑泵速均為0.30mL/min；水解溫度：100℃；水解線圈體積：0.50mL；熒光檢測器激發波長：330nm，發射波長：465nm。

2.3 實驗方案

2.3.1 高濃度水樣——基體改進劑選擇

當水樣濃度較高時，利用熒光檢測器的高靈敏性，可采取直接進樣測定。實驗過程中發現，進樣量超過10μL時，色譜峰峰型變寬或拖尾，甚至影響目標物分離度，主要原因可能是大體積水相進樣造成的基體影響。因此，該實驗采用甲醇對樣品基體進行改進。基體改進方法：用純水配制的標準溶液作為樣品，取一100mL容量瓶，用樣品潤洗三遍，加入15.0mL甲醇，再加樣品至刻度，用濾膜過濾后測定。基體改進后進樣量可增加至100μL。

2.3.2 低濃度水樣——固相萃取法

水樣中待測物濃度較低時，應固相萃取濃縮后進樣。依次用10mL甲醇和10mL水活化固相萃取柱，在活化過程中應確保小柱中填料表面不露出液面。量取100mL水樣，以小于5mL/min的流速（約1～2滴/s）通過固相萃取柱。再用10mL實驗用水淋洗小柱，去除小柱上保留較弱的雜質，用真空泵抽干小柱。用一定體積的洗脫液以約3mL/min（約1滴/s）的流速洗脫富集后的小柱，收集洗脫液于濃縮管中。將上述洗脫液濃縮至1mL以下，用甲醇定容至1mL，轉移入樣品瓶中過濾，待測。

（1）萃取柱選擇

分別選用不同型號的固相萃取小柱Agilent Bond Elut C18柱、Agilent Bond Elut C8柱、CNW Poly-Sery HLB和Waters Oasis HLB柱進行研究，規格均為500mg/6mL。二氯甲烷做洗脫液，洗脫體積為10mL，按上述固相萃取步驟處理水樣，比較目標物的回收率。

（2）洗脫液選擇

使用條件（1）中選擇的最佳萃取柱，分別用二氯甲烷、甲醇以及二氯甲烷/甲醇（1+1，V/V）三種溶劑做洗脫液，洗脫體積為10mL，比較目標物的回收率。

洗脫液體積選擇

選用條件（1）和（2）的萃取柱和洗脫液，改變洗脫液體積分別為：2.00mL、5.00mL、8.00mL、10.0mL、15.0mL，比較目標物的回收率。

2.3.3 方法檢出限測試

在最佳實驗條件下，配制一定濃度的目標物混標溶液，高濃度溶液采用直接進樣法平行測定11次，低濃度溶液采用固相萃取法平行測定11次，分別計算標準偏差，按照MDLi=Si×t(n-1，0.99)計算檢出限。

3 結果與討論

3.1 基體改進劑

對比加入基體改進劑前后色譜圖（圖1和圖2）可以看出，純水配制的標準溶液直接樣100μL時，目標物的色譜峰前拖尾并出現肩峰，峰型變寬，三種物質無法分離；基體改進后，進樣100μL，色譜峰明顯變窄變強，平行測定6次，保留時間偏差在±0.3min，峰面積RSD為3.83%。因此，高濃度溶液直接進樣，加入甲醇改進基體，可增大進樣體積，提高方法靈敏度和檢出限。

3.2 固相萃取條件

3.2.1 萃取柱選擇

涕滅威、克百威和甲萘威在四種不同固相萃取柱下萃取的回收率如圖3所示，結果表明兩種HLB柱對三種目標物的萃取效率較高，而采用C18柱進行萃取，涕滅威保留效果最差，回收率不超過40%，C8柱居于C18柱和HLB柱之間，由于氨基甲酸酯類化合物部分組分有一定極性，C18柱對其保留能力較弱，而HLB柱填料為親水親酯型聚合物，很好地解決了極性有差異的多組分物質的回收率問題。兩種HLB柱對目標物的萃取效率差異較小，該實驗選用CNW Poly-Sery HLB作為固相萃取柱。

3.2.2 洗脫液選擇

用Poly-Sery HLB作為固相萃取柱，目標化合物在不同洗脫液洗脫下，回收率見圖4所示，從圖中可以看出，甲醇作為洗脫溶劑回收率較高。選用甲醇做洗脫液，平行測定6次，相對標準偏差為5.42%，說明甲醇洗脫穩定性好。

表1 流動相梯度淋洗表

圖1 純水配制的標準溶液進樣100μL色譜圖

圖2 基體改進后進樣100μL色譜圖

表2 實際水樣測定表（n=6）

圖3 固相萃取柱的選擇圖

圖4 洗脫劑的選擇圖

圖5 洗脫劑體積的選擇圖

3.2.3 洗脫液體積選擇

改變洗脫液體積，三種目標物的回收率如圖5，從圖中可以看出，三種目標物回收率均隨洗脫劑體積增加而增大，當洗脫劑體積大于10mL時，回收率沒有顯著提高，為縮短濃縮時間，該實驗選擇10mL洗脫液體積洗脫。

3.3 方法檢出限

在最佳實驗條件下，高濃度水樣直接進樣測定，涕滅威、克百威、甲萘威的檢出限分別為0.25μg/L、0.25μg/L、0.11μg/L；低濃度水樣經固相萃取濃縮后進樣測定，涕滅威、克百威、甲萘威的檢出限分別為0.005μg/L、0.005μg/L、0.002μg/L。

3.4 方法精密度

分別配制高濃度、低濃度的混標水溶液各6組，高濃度溶液采用直接進樣法平行測定，涕滅威、克百威和甲萘威的相對標準偏差分別為6.84%、5.03%和4.14%；低濃度溶液經固相萃取濃縮后平行測定，涕滅威、克百威和甲萘威的相對標準偏差分別為12.7%、10.7%和11.2%。

3.5 實際水樣測定

實驗室分別對淮河流域地表水、地下水和飲用水樣品進行低、中、高三種濃度（分別為0.100μg/L、1.00μg/L和10.0μg/L）的加標回收率測定，三種水樣本底濃度均低于檢出限，回收率如表2所示。結果表明，地表水中涕滅威、克百威和甲萘威的加標回收率范圍分別為72.0%～91.1%、91.0%～103.0%、78.0%～109.0%，地下水中涕滅威、克百威和甲萘威的加標回收率范圍分別為76.0%～94.5%、83.0%～96.4%、84.0%～103.0%，飲用水中涕滅威、克百威和甲萘威的加標回收率范圍分別為74.0%～101.0%、79.0%～102.0%、96.0%～111.0%。

4 結論與建議

根據本文建立的方法，高濃度水樣可加入基體改進劑后直接進樣，精密度為4.14%～6.84%，檢出限為0.25μg/L；低濃度水樣采用固相萃取法濃縮后測定，精密度為10.7%～12.7%，檢出限為0.005μg/L。實際水樣的測定，地表水、地下水和飲用水的加標回收率分別為72.0%～109.0%、76.0%～103.0%和74.0%～111.0%。本方法精密度好、準確度高、檢出限低，可用于地表水、地下水和飲用水水體中痕量涕滅威、克百威和甲萘威的測定。

2017年發布的《地下水質量標準》（GB/T 14848-2017）新增了涕滅威和克百威毒理學有機物指標，其Ⅰ類水質標準限值均為0.05μg/L，目前尚無適用于地下水中測定涕滅威的標準方法。本方法用于地下水中涕滅威的測定回收率高，精密度好，檢出限低，滿足《地下水質量標準》對涕滅威的限值要求，且該方法要求的儀器簡單易得，可大規模推廣應用，建議相關部門采納■