羊免疫布魯菌病疫苗(S2株)免疫抗體長期監(jiān)測結(jié)果的試驗(yàn)

蘇勝杰,馬立峰,戴曉光,申 捷,薩茹拉,郭少平,趙心力

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古阿拉善盟動物疫病預(yù)防控制中心,內(nèi)蒙古 阿拉善 750306)

布魯菌病,是由布魯菌引起人、家畜和多種野生動物共患的一種慢性細(xì)菌性傳染病,簡稱布病。本病呈全球流行具有重要的公共衛(wèi)生意義,給世界經(jīng)濟(jì)造成巨大損失[1]。布魯菌是該病病原,該病主要經(jīng)過消化道、皮膚黏膜和呼吸道等途徑侵入機(jī)體而發(fā)生感染和發(fā)病,該病主要對動物生殖系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害,也會對神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)造成損害。布魯菌主要寄生于網(wǎng)狀淋巴組織,造成免疫系統(tǒng)病理進(jìn)程。對于布病流行嚴(yán)重地區(qū),疫苗接種是控制該病的重要手段,目前,國內(nèi)主要用布魯菌活疫苗S2、A19、M5對易感動物進(jìn)行免疫[2]。其中使用最為廣泛的是S2疫苗。但這些疫苗免疫均存在一個(gè)共同弊端,均不能通過血清學(xué)方法區(qū)分自然感染和疫苗免疫抗體,從而影響對該病的診斷和防控。為探究布病S2疫苗免疫綿羊和山羊抗體長期消長規(guī)律,我中心對S2疫苗免疫羊監(jiān)測一年的基礎(chǔ)上,又進(jìn)行了兩年的免疫抗體監(jiān)測結(jié)果研究,為布病疫苗臨床應(yīng)用、布病實(shí)驗(yàn)室檢測和科學(xué)防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)疫苗 布魯菌病活疫苗(S2株),購自中牧實(shí)業(yè)股份有限公司。

1.2 檢測試劑 布魯菌虎紅平板凝集抗原、布魯菌試管凝集抗原及布魯菌陰、陽性血清,均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 選取非免疫區(qū)阿拉善盟阿拉善左旗經(jīng)布魯菌虎紅平板凝集試驗(yàn)、布魯菌試管凝集試驗(yàn)檢測均為陰性試驗(yàn)羊,分組情況見表1。

表1 試驗(yàn)羊分組

1.4 免疫方法 灌服免疫,免疫劑量100億CFU組綿羊、山羊在一免后360 d、720 d分別進(jìn)行1次加強(qiáng)免疫,口服免疫劑量200億CFU組綿羊、山羊只免疫1次。

1.5 免疫抗體檢測 在免疫前、一免、二免、三免后對所有試驗(yàn)羊進(jìn)行采血分離血清,采用虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)檢測免疫抗體水平。實(shí)驗(yàn)操作按照GB/T18646-2002進(jìn)行。

1.6 選取試驗(yàn)過程中抗體 一直陽性或抗體轉(zhuǎn)陽后轉(zhuǎn)陰又轉(zhuǎn)陽持續(xù)2個(gè)月以上羊只進(jìn)行剖檢,觀察病理變化,并進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。

2 結(jié)果

2.1 100 億CFU免疫劑量組綿羊、山羊檢測結(jié)果

100 億CFU免疫劑量組綿羊一免后20 d時(shí)血清抗體陽性率達(dá)到最高峰,之后呈下降趨勢,一免后150 d血清抗體陽性率降至0%,一免后180 d～360 d抗體陽性率處在較低水平(0% ～4%);二免后30 d血清抗體陽性率達(dá)到最高峰,之后呈下降趨勢,二免后150 d血清抗體陽性率降至2.8%,二免后180 d～330 d抗體陽性率有高有低,二免后360 d抗體陽性率降至2.5%;三免后60 d血清抗體陽性率又達(dá)到最高峰,之后一直呈現(xiàn)下降趨勢,三免后360 d抗體陽性率降至2.6%,空白對照組抗體檢測均為陰性;100億CFU免疫劑量組山羊一免后20 d時(shí)血清抗體陽性率達(dá)到最高峰,之后呈下降趨勢,一免后90 d～三免后360 d抗體陽性率時(shí)高時(shí)低,規(guī)律不明顯,空白對照組抗體檢測均為陰性,檢測結(jié)果見圖1。

圖1 100億CFU免疫劑量組綿羊、山羊抗體消長曲線

2.2 200 億CFU免疫劑量組綿羊、山羊檢測結(jié)果200億CFU免疫劑量組綿羊免疫后20 d時(shí)血清抗體陽性率達(dá)到最高峰,之后呈下降趨勢,免疫后150 d血清抗體陽性率降至0%,免疫后180 d～1 080 d抗體陽性率有高有低。空白對照組抗體檢測均為陰性;200億CFU免疫劑量組山羊一免后20 d時(shí)血清抗體陽性率達(dá)到最高峰,之后呈下降趨勢,免疫后90 d～免疫后360 d抗體陽性率時(shí)高時(shí)低,規(guī)律不明顯,空白對照組抗體檢測均為陰性,檢測結(jié)果見圖2。

圖2 200億CFU免疫劑量組綿羊、山羊抗體消長曲線

3 討論

3.1 100 億CFU免疫劑量組綿羊在一免后20 d時(shí),血清抗體陽性率達(dá)到最高峰為82%,之后呈下降趨勢,免疫后150 d,抗體陽性率降至0%,此后,直到免疫360 d抗體陽性率維持在0% ～4%之間;二免疫后30 d血清抗體陽性率達(dá)到最高峰為47.5%,直到二免后150 d血清抗體陽性率降至3%,二免后180 d～330 d血清抗體陽性率時(shí)高時(shí)低,陽性率維持在14%～30%之間,二免后360 d抗體陽性率又降至3%;三免后60 d血清抗體陽性率又達(dá)到最高峰為87.2%,三免后90 d～360 d抗體陽性率呈現(xiàn)下降趨勢;100億CFU免疫劑量組山羊在免疫后20 d時(shí),抗體陽性率達(dá)到最高峰為100%,免疫后90 d～330 d抗體陽陽性率時(shí)高時(shí)低,處于10% ～25%之間,免疫后360 d抗體陽性率降至5%,二免后和三免后抗體消長規(guī)律基本與一免后抗體消長規(guī)律一致;200億CFU免疫劑量組綿羊在免疫后20 d時(shí),血清抗體陽性率達(dá)到最高峰為92%,免疫后150 d,抗體陽性率降至0%,免疫180 d～360 d抗體陽性率處于0%～8%之間;200億CFU免疫劑量組山羊在免疫后20 d時(shí),抗體陽性率達(dá)到最高峰為100%,免疫后90 d～360 d抗體陽陽性率時(shí)高時(shí)低,處于18% ～35%之間。田素梅研究表明,綿羊經(jīng)S2疫苗免疫,免疫15 d抗體達(dá)到最高值,至9個(gè)月仍然可以檢測到凝集抗體[3],高紅霞研究表明,羊經(jīng)S2疫苗免疫后,一個(gè)月時(shí)凝集抗體達(dá)到最高峰[4],黨富德研究表明,奶山羊經(jīng)S2疫苗免疫后25 d,抗體陽性率達(dá)到最高峰,在以后不同時(shí)間段抗體陽性率也出現(xiàn)時(shí)高時(shí)低現(xiàn)象[5],通過本研究證實(shí),無論是多次免疫或一次免疫綿羊組和山羊組,在免疫后30 d左右,抗體陽性率均達(dá)到最高峰,之后在不同時(shí)間段均出現(xiàn)抗體陽性率時(shí)高時(shí)低的現(xiàn)象。

3.2 通過100億CFU、200億CFU免疫劑量組試驗(yàn)羊抗體陽性率來看,兩組試驗(yàn)羊陽性率并無明顯差異,所以對疫苗免疫后的檢測進(jìn)行評價(jià)時(shí),無需考慮免疫劑量大小的影響。

3.3 通過試驗(yàn)羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,山羊組免疫抗體陽性率較同時(shí)期綿羊抗體陽性率普遍偏高,且升降幅度較大,這可能與山羊?qū)σ呙缑庖呙舾行暂^高有關(guān),有待于進(jìn)一步研究。

3.4 通過多次免疫試驗(yàn)羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,無論綿羊組和山羊組,在首次免疫、二免和三免后30 d左右抗體陽性率均達(dá)到最高峰,但綿羊二免后、山羊二免和三免后試驗(yàn)羊抗體陽性率最高值較首次免疫低,可能與多次免疫造成試驗(yàn)羊?qū)σ呙缑舾行越档陀嘘P(guān),有待于進(jìn)一步研究。

3.5 通過100億CFU、200億CFU免疫劑量組綿羊抗體轉(zhuǎn)陽率看,在免疫后150 d,抗體陽性率已降至0%,但后期有出現(xiàn)個(gè)別試驗(yàn)羊抗體轉(zhuǎn)陽現(xiàn)象,選取4只抗體陰轉(zhuǎn)陽的試驗(yàn)羊進(jìn)行剖檢,并未發(fā)現(xiàn)剖檢羊臟器出現(xiàn)病理變化,同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),未見布魯菌菌落,說明抗體轉(zhuǎn)陽的羊不是布魯菌自然感染,可能與疫苗免疫有一定關(guān)系,也可能由其他因素引起,需進(jìn)一步研究。

3.6 通過綿羊組抗體轉(zhuǎn)陽率發(fā)現(xiàn),在一免后150 d和二免后150 d虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測抗體轉(zhuǎn)陽率為0%,初步摸索了羊經(jīng)3次免疫布魯菌S2株疫苗后血清抗體規(guī)律,為鑒別綿羊自然感染和疫苗免疫抗體消長規(guī)律提供參考。

3.7 通過一次免疫試驗(yàn)羊抗體陽性率發(fā)現(xiàn),在免疫后390 d和740 d抗體陽性率均出現(xiàn)較小幅度升高,可能與多次免疫羊混群飼養(yǎng),羊群互相舔舐及吸入環(huán)境中疫苗有關(guān),同時(shí)一次免疫組試驗(yàn)羊在免疫較長時(shí)間后,仍然能夠檢測到陽性動物。

3.8 通過虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試樣兩種檢測方法對所采集樣品的檢測結(jié)果看,虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測樣品陽性率較試管凝集試驗(yàn)高,也證實(shí)虎紅平板凝集試驗(yàn)敏感性較高,而試管凝集試驗(yàn)特異性較高。在日常布病監(jiān)測工作中,先進(jìn)行虎紅平板凝集試驗(yàn)篩選,同時(shí)對檢測陽性樣品進(jìn)行試管凝集試驗(yàn),有助于更準(zhǔn)確判定羊的感染狀況。