HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67在肝細胞肝癌中的表達及相關性

吳暢　劉海玲　劉薇薇　王俊普　文繼舫

【摘要】 目的：探討HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白在原發性肝細胞肝癌中的表達及與臨床病理特征的關系。方法：應用免疫組化Envision法檢測，79例HCC組織分別進行HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67的表達;進一步分析其表達特點及與臨床病理特征的相關性。結果：患者HepPar-1、GPC3、AFP表達陽性率分別為68.3%（54/79）、86.0%（68/79）、31.6%（25/79）;Ki-67增殖指數為（33±25）%。HepPar-1陽性率在低分化腫瘤中最低，GPC3、AFP和Ki-67陽性率在低分化腫瘤中最高。HepPar1的表達在分化程度、是否合并肝硬化等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。AFP的表達在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、衛星結節等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。Ki-67的表達在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛星結節、腫瘤性壞死和性別等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05）。結論：HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67在肝細胞肝癌的臨床病理診斷中有重要參考價值。GPC3、AFP及Ki-67與肝細胞肝癌的臨床病理特征關系密切，對該疾病的預測及惡性程度的評估具有重要的參考價值。

【關鍵詞】 肝細胞肝癌; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; 免疫組織化學

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.09.002 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2019）09-000-05

Cliniccopathological Significance and Correlation of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 Levels in Human Hepatocellular Carcinoma/WU Chang，LIU Hailing，LIU Weiwei，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（9）：-7

【Abstract】 Objective：To analyze the expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 proteins in primary hepatocellular carcinoma and the clinicopathological characteristics.Method：Immunohistochemical study（Envision method） for HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 was carried out in 79 cases of HCC tissues.The relationship between expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 and clinicopathologic features in HCC were also analyzed.Result：The positive expression rates of HepPar-1，GPC3 and AFP were 68.3%（54/79），86.0%（68/79） and 31.6%（25/79），respectively，and the proliferation index of Ki-67 was （33±25）%.The positive rate of HepPar-1 was the lowest in poorly differentiated tumors，and the positive rates of GPC3，AFP and Ki-67 were the highest in poorly differentiated tumors.There were differences in the expression of HepPar1 in the degree of differentiation，whether HepPar1 was associated with liver cirrhosis（P<0.05）.There were differences in the expression of AFP in tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），satellite nodules（P<0.05）.The expression of Ki-67 showed differences in the degree of tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），hepatic capsule invasion，satellite nodules，tumor necrosis，gender（P<0.05）.Conclusion：HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 have important reference value in the clinicopathological diagnosis of hepatocellular carcinoma.GPC3，AFP and Ki-67 are closely related to the clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma，which has important reference value for the prediction of this disease and the evaluation of the degree of malignancy.

【Key words】 Hepatocellular carcinoma; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; Immunohistochemistry

First-authors address：Shenzhen Sixth Peoples Hospital，Shenzhen 518052，China

肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第六大常見的癌癥，也是高居癌癥相關死亡率的第三大原因，據統計全球每年新發肝癌病例超過50萬例[1]。HCC的發病率和死亡率最高的是中國，全球50%以上的肝癌發生在中國[2-3]。隨著HCC患病率的逐年增加，為全社會帶來重大經濟和醫療保健負擔。HCC的主要治療方法是手術切除、移植、放療、化療和射頻。但早期肝癌的癥狀不明顯，診斷率較低，且肝癌病情進展較快，確診時多數進展至中晚期，已經發生遠處的擴散和轉移。近幾十年來，全球對肝癌的臨床和基礎研究都取得了不小的進步。但其診療效果仍有待于進一步提高。本研究采用免疫組化Envision法檢測HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白表達情況，探討其與肝細胞肝癌的臨床病理特征的關系，為肝細胞肝癌的侵襲轉移及預后判斷提供客觀指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究中的所有標本取自2017年1月-2018年12月在中南大學附屬湘雅醫院確診并進行手術治療的肝細胞肝癌患者，總例數79例。納入標準：按照2010版WHO標準經病理檢查確診為原發性肝細胞肝癌，均經病理檢查確診;術前未進行放化療。排除標準：活檢標本;免疫組化的資料不完整者。其中男58例，女21例;年齡26～74歲，平均50歲;≥45歲58例，<45歲21例;肝癌直徑<5 cm 36例;≥5 cm 43例;組織學分化程度：高分化13例，中分化36例，低分化30例;微血管侵犯（MVI）的分組：M0：未發現MVI;M1（低危組）：≤5個MVI，且發生于近癌旁肝組織區域（≤1 cm）;M2（高危組）：>5個MVI，或MVI發生于遠癌旁肝組織區域（>1 cm）。M0組33例，M1組42例，M2組4例。合并肝硬化70例，無肝硬化9例。有肝被膜侵犯36例，無肝被膜侵犯43例。有衛星結節23例，無衛星結節56例。有腫瘤性壞死31例，無腫瘤性壞死48例。該研究已經倫理學委員會批準，患者知情同意。

1.2 方法

送檢組織經4%中性甲醛液固定，常規脫水，石蠟包埋，

3 μm厚度切片，HE染色，光鏡觀察。選取腫瘤與正常組織同時存在的蠟塊，4 μm厚度切片行免疫組化，采用Envision法，一抗為HepPar-1、GPC3、AFP及Ki67，抗體及所用免疫組化試劑均購于福州邁新生物技術開發有限公司，操作步驟按照試劑說明書進行。以上操作均用已知陽性片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，每例都有HE切片作對照觀察。

1.3 結果判定

陽性結果明確，陽性信號的位置正確且染色特征正確。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP均明確定位于細胞質，陽性為出現均勻棕黃色顆粒。Ki67定位于細胞核。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP先根據染色強度進行評分：無染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分，棕褐色為4分;然后根據陽性細胞所占百分比進行判斷，當陽性細胞<10%為局灶（+），≥10%為彌漫（+）。只有當染色強度≥2分且為彌漫陽性時才判斷為陽性。計算腫瘤細胞中Ki-67增殖指數，即Ki-67陽性的百分比，<10%為陰性（-），10%～50%為低表達（+）;>50%為高表達（++）[4]。

1.4 統計學處理

采用統計學SPSS 24.0軟件進行數據分析，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HepPar1表達與肝細胞肝癌臨床病理特征的關系

（1）HepPar1在HCC中的陽性率68.3%。（2）HepPar1陽性率在低分化腫瘤中最低。（3）HepPar1的表達在分化程度、是否合并肝硬化等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在性別、年齡、腫瘤直徑、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛星結節和腫瘤性壞死等方面均無明顯差異（P>0.05），見表1。

2.2 GPC3表達與肝細胞肝癌臨床病理特征的關系

（1）GPC3在HCC中的陽性率86.0%。（2）GPC3陽性率在低分化腫瘤中最高。（3）GPC3的表達在性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、是否合并肝硬化、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛星結節和腫瘤性壞死等方面均無明顯差異（P>0.05），見表2。

2.3 AFP表達與肝細胞肝癌臨床病理特征的關系

（1）AFP在HCC中的陽性率31.6%。（2）AFP陽性率在低分化腫瘤中最高。（3）AFP的表達在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、衛星結節等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在性別、年齡、腫瘤直徑、是否合并肝硬化、肝被膜侵犯和腫瘤性壞死等方面均無明顯差異（P>0.05），見表3。

2.4 Ki-67表達與肝細胞肝癌臨床病理特征的關系

Ki-67增殖指數為（33±25）%（最低值3%，最高值90%）。Ki-67的表達在組織分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、衛星結節、腫瘤性壞死和性別等臨床病理特征方面存在差異（P<0.05），而在年齡、腫瘤直徑、是否合并肝硬化等方面均無明顯差異（P>0.05），見表4。