杧果葉素膠囊的制備工藝研究

1.大理大學，云南 大理 671000；2.昆藥集團股份有限公司，云南 昆明 650100

杧果(MangiferaindicaL.)為漆樹科杧果屬熱帶常綠大喬木，種植區域主要分布在海南、廣西、廣東、云南、四川和福建等地[1]。杧果葉含有酚酸類、黃酮類、萜類、甾體皂苷類、揮發油類等。黃酮類如芒果苷、槲皮素、金絲桃苷等。杧果葉在傣醫臨床應用已有悠久歷史，主要用于痛風性關節炎等。杧果葉中主要活性成分為芒果苷[2]。現代藥理學研究表明芒果苷對高尿酸血癥導致的痛風有明顯療效[3-5]。

本實驗在前期實驗研究確定的杧果葉素(杧果葉提取物)制劑處方基礎上，擬將其研制成治療痛風臨床新藥。以芒果苷溶出度、顆粒得率、含水量等為指標，進行制劑工藝關鍵參數研究，為杧果葉素制劑成型提供簡單、可行、穩定的制備方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 JA51001電子天平(上海精密儀器廠)，XSE205DU電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，MQP01實驗室型超微氣流粉碎機(青島德瑞特粉體技術設備有限公司)，HLSHZ-6A高效濕法混合制粒機(北京航空制造工程研究院)，702-4電熱鼓風箱(大連實驗設備廠)，WBF-2多功能流化床(重慶英格造粒包衣技術公司)，MA35水分測定儀(德國賽多利斯公司)，BT-1001智能粉體特性測定儀(丹東百特儀器有限公司)；PT WS1210智能溶出儀(德國PHARMATEST公司)，UV-2450紫外可見光分光光度計(日本島津公司)。

1.2 材料 芒果苷對照品(批號：111607-200402，中國食品藥品檢定院)，杧果葉素(批號：170301，昆藥集團自制)，糊精(批號：160706，安徽山河藥用輔料股份有限公司)，羧甲基淀粉鈉(批號：161110，安徽山河藥用輔料有限公司)，硬脂酸鎂(批號：160317，安徽山河藥用輔料股份有限公司)，其它所用試劑均為分析純。

1.3 處方 杧果葉素110 g，羧甲基淀粉鈉19 g，糊精 60 g，硬脂酸鎂1 g ，50%乙醇適量，制成硬膠囊1000粒。

2 方法與結果

2.1 溶出度方法的建立 依據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》，選擇籃法，溶出介質為900 mL pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液，轉速為100 r/min。

2.2 含量檢測方法的建立 參照紫外-可見分光光度法(2015年版《中國藥典》四部通則0401)與參考文獻[6]，建立紫外-可見分光光度法測定杧果葉素膠囊中芒果苷的方法。

2.2.1 對照品溶液的制備 取芒果苷對照品適量，精密稱定，加pH 6.8的磷酸鹽緩沖液制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 稱取提取物適量，精密稱定，加pH 6.8的磷酸鹽緩沖液，超聲30 min，制成每1 mL中含0.1 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 檢測波長的確定 取對照品及供試品溶液，在200～900 nm進行全波長掃描，確定紫外最大吸收波長為258 nm。

2.2.4 樣品酸濃度的考察 因為活性成分芒果苷顯弱酸性，在酸性條件下不易電離。所以加入少量酸抑制其電離。取配制好的對照品溶液0.5 mL，共18份，置5 mL量瓶中，加pH 6.8磷酸鹽緩沖液至刻度，分別加入0、10、20、40、60、80 μL 10%鹽酸，搖勻，即得。在258 nm處測定吸光度(A)。由表1可知，隨著酸用量增加其吸光度增加，當加入60 μL時樣品吸光度基本保持不變，因此，溶出時考慮樣品中加入60 μL 10%鹽酸。

表1 酸濃度的考察結果

2.3 方法學考察

2.3.1 線性考察 取對照品溶液0.1、0.2、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加入60 μL 10%鹽酸，搖勻。以pH 6.8緩沖液(加入等量10%鹽酸)作為空白，在258 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=56.02X+0.199(R2=0.9997)。表明樣品在0.002～0.024 mg/ mL范圍內呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗 取對照品溶液0.5 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸搖勻。在258 nm下測定吸光度，連續測定6次。6次測定的RSD為0.18%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗 取供試品溶液1 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻。平行制備6份，測定吸光度，計算含量，測得含量RSD為1.09%，表明方法重復性良好。

2.3.4 穩定性試驗 取供試品溶液0.5 mL，置于5 mL容量瓶，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻。分別在于0、30、60、120、180、240 min測定吸光度。6次測定吸光度的RSD為0.54%，說明供試品溶液在pH 6.8緩沖液240 min內穩定。

2.3.5 加樣回收率試驗 取杧果葉素樣品6份，置100 mL量瓶中，分別加入芒果苷對照品溶液20 mL，加pH 6.8緩沖液按樣品制備方法超聲溶解后定容至刻度，備用。取上述溶液各0.5 mL，置于5 mL容量瓶中，加pH 6.8緩沖液稀釋至刻度，加60 μL 10%鹽酸，搖勻，即得。分別測定吸光度，計算回收率。平均回收率為99.07%，RSD為0.96%，說明該方法回收率良好。

2.4 制備工藝選擇 硬膠囊目前常用的制備方式有粉末直接混合填充和濕法制粒填充等。杧果葉提取物水溶性差，流動性差，粉末直接混合填充裝量差異大，含量均勻度差。因此選擇濕法制粒填充。

2.5 粉碎工藝考察 根據現有設備和后續工業化生產可行性，采用氣流式粉碎機對杧果葉素進行粉碎。根據氣流式粉碎機的影響因素，對振動進料壓力、進料壓力與粉碎壓力的參數進行考察，研究不同條件對杧果葉提取物得率和粒徑大小的影響，由表2可知，杧果葉素粉碎前D90約為103 μm，經氣流式粉碎后其粒徑D90約為5 μm，說明杧果葉素容易粉碎。當工藝參數振動進料壓力為0.2 MPa，進料壓力為0.5 MPa，粉碎壓力為0.4 MPa時粉碎粒徑滿足要求且得率最高。

表2 杧果葉提取物粉碎工藝的研究

2.3 制粒工藝參數研究 根據制備工藝選擇高速剪切濕法制粒的方式進行制粒，因此主要對高剪切制粒影響因素進行考察。按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，總重189 g，共3份，置于濕法制粒機，混合均勻(混合3 min)，以50%乙醇為粘合劑(加量為100 g)，考察不同攪拌速度、切碎速度、制粒時間對制粒的影響，置烘箱干燥(60 ℃)，控制顆粒水分小于9%，整粒(20目篩網)。取部分顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入2號膠囊中，測定藥物的溶出。從表3和圖1可知，加入同樣量的粘合劑，不同的攪拌速度、切碎速度以及制粒時間對顆粒得率沒有顯著性影響。但是對顆粒松散程度有影響，顆粒松散程度影響了藥物的溶出。為了確保藥物的溶出效果，確定制粒工藝為攪拌速度700 r/min、切碎速度1000 r/min、制粒時間5 min。

表3 制粒工藝參數考察

2.4 干燥工藝考察 藥物的含水量對產品的穩定性會產生一定影響，所以對顆粒干燥方式進行考察。按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，總重378 g，置濕法制粒機中，混合均勻(混合3 min)，加入200 g 50%乙醇為粘合劑，設定上述制粒工藝參數，濕顆粒分成兩份，分別采用不同干燥方式，控制顆粒水分小于9%，整粒(20目篩網)。取部分顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入2號膠囊中，測定藥物的溶出。由表4可知不同干燥方式均可以使顆粒含水量控制在5%左右，且不同干燥方式對藥物的溶出不會產生較大的影響。

綜上所述，制備工藝如下：按處方比例稱取杧果葉提取物、糊精和羧甲基淀粉鈉，置濕法制粒機中，混合均勻(混合3 min)，加入50%乙醇，設定制粒工藝參數(攪拌速度為700 r/min、切碎速度1000為r/min、制粒時間5 min)，干燥，控制顆粒水分在5%左右，整粒(20目篩網)，取顆粒加入適量硬酯酸鎂，混勻，裝入膠囊，即得。

2.5 制備工藝驗證 按上述確定的工藝參數按表5進行3批小試，從表5可知不同小試批量工藝較穩定。

表4 干燥工藝的考察

表5 不同批量小試工藝考察

3 討論

目前，杧果葉有效部位及其制劑并未在國內上市，實驗對杧果葉提取物膠囊劑的制備工藝進行研究，通過對物制備工藝、粉碎工藝、制粒工藝及干燥工藝的考察，選定最佳制備工藝并使其滿足《中國藥典》膠囊劑要求，為以后杧果葉提取物膠囊劑的進一步研究及工業化生產提供了有力的實驗依據。