酒女貞子配方顆粒質量標準研究

趙淑淑，姚俊霞，李 哲，車夢婷，許豪杰

（浙江佐力藥業股份有限公司，浙江 湖州 313200）

酒女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit.的干燥成熟果實的酒蒸品，具有增強補肝腎功效，用于治療腰膝酸軟、眩暈耳鳴、目暗不明等癥狀[1]。女貞子中主要含有環烯醚萜類、黃酮類、三苯乙醇類、萜類、多糖類等化合物[2]，其質量研究多分別針對其水溶性成分中的裂環環烯醚萜類、苯乙醇類和脂溶性成分三萜類，如特女貞苷、木犀草苷、紅景天苷、木犀草素等[3-5]。酒女貞子較炮制前部分有效成分含量發生了變化，其中紅景天苷、5-羥甲基糠醛等含量顯著增加，但特女貞苷等成分降低[6-10]。近年來，對以女貞子藥材為原料，經過炮制、提取、濃縮、干燥等工序制成的酒女貞子配方顆粒，尚未有完整的質量研究報道。本試驗中針對酒女貞子配方顆粒進行研究，建立薄層色譜定性檢定及高效液相色譜（HPLC）法定量檢測的方法，為更好地控制產品質量提供了試驗依據，現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：安捷倫1260-G205型高效液相色譜儀；SARTORIUS BT 25S型十萬分之一電子天平。

試藥：女貞子對照藥材（批號為121041-201404），特女貞苷對照品（批號為111926-201605），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜純，默克公司）；水為自制超純水，其他試劑均為分析純。酒女貞子配方顆粒（自制，批號分別為 1806001，1806002，1806003）。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

取本品1.0 g，研細，加水50 mL使溶解，用水飽和正丁醇20 mL提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20 mL，蒸干正丁醇液，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取女貞子對照藥材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，濾過，濾液自“用水飽和正丁醇20 mL提取3次”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2015年版《中國藥典（四部）》通則0502]試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱2 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點。結果見圖1。

圖1 酒女貞子配方顆粒薄層鑒別色譜圖

2.2 特女貞苷含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Phenomenex C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水（40 ∶60）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃ ；進樣量：10 μL；檢測波長：224 nm。理論板數按特女貞苷峰計應不低于4 000。

2.2.2 溶液制備

取特女貞苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含特女貞苷0.1 mg的溶液，即得對照品溶液。取本品粉末約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定質量，用50%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：按處方比例稱取輔料，混勻，同法制成陰性樣品，并按照供試品的處理方法制備缺酒女貞子的陰性對照品溶液，依法進樣。結果表明，陰性對照品溶液色譜中，在與特女貞苷相應的保留時間無色譜峰出現，表明輔料對特女貞苷的測定無干擾。

線性關系考察：取質量濃度分別為1 532.9，766.4，459.8，306.5，153.2，122.6，76.6 μg/mL 特女貞苷對照品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件測定峰面積。以峰面積為縱坐標（Y）、進樣量為橫坐標（X，μg）進行線性回歸，得回歸方程為Y=1 154.8X-35.474，r2=0.999 8（n=7）。結果表明，特女貞苷進樣量在 0.766 46～15.329 19 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為CP-180601，含量 5.9 mg/g）0.5 g，精密稱定 6 份。分別加入特女貞苷對照品適量，按供試品溶液制備方法處理并進樣檢測，計算回收率。結果見表1。

表1 特女貞苷加樣回收試驗結果（n=6）

重復性試驗：取同一批（批號為CP-180601）樣品供試液，按擬訂色譜條件進樣。結果平均含量為5.9751mg/g，RSD為0.81%（n=6），表明方法重復性良好。

圖2 高效液相色譜圖

精密度試驗：取同一樣品（批號為CP-180601）供試液，按擬訂色譜條件，重復進樣6次，測定特女貞苷峰面積。結果平均峰面積為1483.6，RSD為0.26%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一樣品（批號為CP-180601）供試液，按擬訂色譜條件，分別于 0，2，4，8，12，18，24 h 時進樣，測定特女貞苷峰面積。結果平均峰面積為1 430.49，RSD為0.66%（n=6），表明供試品溶液在24h內穩定。

耐用性試驗：考察不同柱溫、流速、流動相比例、色譜柱對本色譜條件的耐用性。結果表明，各個條件下測定結果基本一致，RSD%均低于3%，色譜圖中特女貞苷峰形尖銳、對稱，分離度良好，表明方法耐用性良好。

2.2.4 樣品含量測定

采用擬訂色譜方法，取3批樣品，依法測定。結果批號為1806001，1806002，1806003的樣品中特女貞苷含量分別為 13.5，13.7，13.9 mg/g，RSD分別為 0.82%，0.63%，0.58%。

3 討論

供試品制備過程中，曾以甲醇、50%甲醇、稀乙醇、50%乙醇作為溶劑進行超聲提取。結果表明，甲醇及50%甲醇作為溶劑，峰形不佳；相較稀乙醇提取，50%乙醇作為溶劑，供試品液中特女貞苷含量顯著上升，故選擇50%乙醇作為提取溶劑。曾比較了50%乙醇加熱回流30 min、超聲提取30 min，結果表明，兩者含量測定結果無明顯差異，考慮試驗效率等因素，故確定提取方式為超聲處理30 min。

嘗試采用不用柱溫（30，35，40℃）對特女貞苷分離度的影響，結果顯示，在35℃時色譜基線平穩，且分離度較好，故柱溫選擇35℃。

配方顆粒是由藥材經炮制、提取、濃縮、干燥、制粒等系列工序后加工制成的，保留原有藥效外，還具有方便、快捷等特點。本研究中以女貞子對照藥材代替特女貞苷對照品作為對照進行定性鑒別，更能體現和控制配方顆粒對女貞子藥材的信息傳承。供試品溶液色譜斑點清晰、分離度佳，重現性良好。

在質量控制評價方面，現行的中藥配方顆粒質量標準多采用對某有效成分進行含量測定。中藥是多成分的整體作用，由于中藥配方顆粒是經過多工序加工而成，失去原有飲片的形態，在質量控制上缺少飲片性狀等重要指標，因此在質量控制標準制定中必須加強專屬性鑒別和整體性質量控制[10]。

本研究中采用HPLC法建立了酒女貞子中特女貞苷的測定方法，操作簡單，穩定性好，可有效用于酒女貞子配方顆粒產品的質量控制。本方法從整體方面及有效成分檢測方面，具有簡便、有效、快捷等優點，能提升酒女貞子配方顆粒的質量控制水平，保障配方顆粒女貞子藥材信息的傳承。