薈生源兩種組方對(duì)小鼠經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)

姚淮育 吳虹諺 何昊

摘要：目的? 評(píng)價(jià)薈生源兩種組方的安全性，評(píng)估其臨床使用安全性，為功能性食品開發(fā)和臨床安全用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法? 將26只SPF級(jí)昆明小鼠采用隨機(jī)數(shù)目表法隨機(jī)分為3組，其中實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2各10只，空白組6只，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組1以薈生源0.96 g+生理鹽水0.17 ml（按配方1最大溶解度進(jìn)行配置，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、實(shí)驗(yàn)組2以薈生源0.4 g+生理鹽水0.63 ml（按配方2最大溶解度進(jìn)行配置，有效量接近于于成人每日標(biāo)準(zhǔn)服用量200倍），兩組實(shí)際灌胃量均為0.8 ml;空白組以生理鹽水0.8 ml灌胃，灌胃后連續(xù)觀察7 d。比較3組一般情況、死亡情況、大體解剖及鏡下特點(diǎn)。結(jié)果? 3組小鼠體重、飲水量、活動(dòng)度均正常，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;實(shí)驗(yàn)過程中各組均無小鼠死亡，大體解剖肉眼觀察小鼠各臟器均無變性、充血、水腫、壞死等異常現(xiàn)象;鏡下對(duì)照組小鼠肝臟、腎臟細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小均正常，無壞死、無病理性改變。實(shí)驗(yàn)組1小鼠肝細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)、大小均正常，肝小葉組織結(jié)構(gòu)正常;實(shí)驗(yàn)組2中出現(xiàn)1例肝細(xì)胞胞漿疏松化。各組所有動(dòng)物腎組織結(jié)構(gòu)腎小管結(jié)構(gòu)正常，皮質(zhì)與髓質(zhì)分界線清楚，無淋巴細(xì)胞浸潤。結(jié)論? 薈生源兩種組方對(duì)小鼠無急性毒性作用，具有較好的安全性。

關(guān)鍵詞：薈生源;經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn);小鼠

中圖分類號(hào)：R285.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.020

文章編號(hào)：1006-1959（2019）11-0072-04

Abstract：Objective? To evaluate the safety of Huishengyuan and its clinical safety， so as to provide experimental basis for the development of functional food and the safe use of drugs in clinic.Methods? 26 SPF Kunming mice were randomly divided into three groups： experimental group 1 （n =10）， experimental group （n=10） and blank group （n=6）.Both male and female. In the experimental group 1， 0.96 g + normal saline 0.17 ml （configured according to the maximum solubility of the formula 1 and the effective amount is close to 200 times the daily dosage of the adult） was administered to the experimental group 1 and the experimental group 2 was 0.4 g+0.63 ml（of physiological saline. The maximum solubility of Formulation 2 was configured，and the effective amount was close to 200 times of the daily standard dose of adults.） The actual gastric perfusion volume was 0.8 ml; the blank group was intragastrically administered with 0.8 ml of normal saline， and was continuously observed for 7 d after gavage.Compare the general conditions， death， gross anatomy and microscopic features of the 3 groups.Results? The body weight， water consumption and activity of the three groups were normal， the difference was not statistically significant （P>0.05）. There was no mouse death in each group during the experiment.Gross dissection observed the mice without degeneration and congestion. Abnormal phenomena such as edema and necrosis; the morphology， structure and size of liver and kidney cells of the mice in the control group were normal， no necrosis and no pathological changes. The morphology， structure and size of hepatocytes in experimental group 1 were normal， and the structure of hepatic lobule was normal. In experimental group 2， 1 case of hepatocyte cytoplasmic loosening occurred. The renal tubular structure of all animals in each group was normal， the boundary between cortex and medulla was clear， and there was no lymphocytic infiltration.Conclusion? Huishengyuan two kinds of prescription have no acute toxicity to mice， and have good safety.

Key words：Huishengyuan;Oral acute toxicity test;Mouse

根據(jù)國家衛(wèi)生計(jì)生委《中國癌癥防治三年行動(dòng)計(jì)劃（2015～2017年）》統(tǒng)計(jì)顯示，每年我國新發(fā)癌癥病例約為310萬。化療是治療腫瘤主要手段之一，對(duì)腫瘤患者的治療有著明顯效果，化療所帶來的不良反應(yīng)常讓患者的依從性降低，盡管患者的生存時(shí)間得到延長(zhǎng)，但化療相關(guān)不良反應(yīng)卻影響著患者的生活質(zhì)量[1]，化療所導(dǎo)致化療相關(guān)性嘔吐（chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV）是最常見的胃腸道反應(yīng)。其發(fā)生率為65%～85%，順鉑致吐率幾乎達(dá)100%[2，3]。西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室自主研制的“薈生源”產(chǎn)品，是依據(jù)中醫(yī)“藥食同源”特性，結(jié)合現(xiàn)代微生態(tài)研究進(jìn)展而研制的產(chǎn)品，其根據(jù)化療患者體質(zhì)的不同，有兩種不同的組方供患者使用。本實(shí)驗(yàn)主要通過小鼠對(duì)薈生源兩種組方耐受性來驗(yàn)證其毒性作用，以進(jìn)一步了解其生物學(xué)活性，為更好的應(yīng)用于制藥業(yè)和臨床治療提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組? SPF級(jí)昆明種小白鼠（Kunming mice，KM小鼠）38只（預(yù)實(shí)驗(yàn)12只，正式急性毒性實(shí)驗(yàn)26只），周齡為6～8周，體重18～22 g，由西南醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)：SCXK（川）2013-17]。動(dòng)物分組：將26只小鼠，隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，其中實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2，各10只，空白組6只，均雌雄各半，編號(hào)分籠飼養(yǎng)。本研究通過西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查，遵照動(dòng)物福利進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，飼養(yǎng)溫度20～25℃，濕度40%～70%。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。

1.2實(shí)驗(yàn)用藥? 薈生源配方1（生姜、黨參、藿香等），褐色水煎劑提取液，由西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室提供;薈生源配方2（生姜、低聚甘露糖、竹茹等），白色粉末，由西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室提供。根據(jù)薈生源的兩種組方，配制兩種藥劑，供實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2使用。生理鹽水，四川美大康佳樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器? 電子秤、1 ml注射器、灌胃針、手術(shù)器械、眼科鑷、刀片、乳膠手套、薄膜手套、棉簽、口罩、濾紙、酒精、安爾碘、甲醛溶液、無毒小鼠籠。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1預(yù)實(shí)驗(yàn)? 參照《化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[4]進(jìn)行，取體重18～22 g的小鼠12只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和空白組，每組6只，雌雄各半。第1次灌胃前禁食（不禁水）12 h，實(shí)驗(yàn)組1灌胃給藥濃度為1.2 g/ml，實(shí)驗(yàn)組2灌胃給藥濃度為1 g/ml，給藥容積均為40 ml/kg，空白組灌入等量的生理鹽水，給藥后觀察小鼠7 d內(nèi)毒性反應(yīng)和死亡情況。根據(jù)動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目（表1）記錄各組動(dòng)物的一般生理狀況、行為活動(dòng)、進(jìn)食、有無中毒狀和有無動(dòng)物死亡，試驗(yàn)結(jié)束后將小鼠用頸椎脫臼致死法處死進(jìn)行解剖學(xué)檢查。結(jié)果未見中毒表現(xiàn)，亦無小鼠死亡。因1.2 g/ml濃度和1 g/ml濃度已經(jīng)分別達(dá)到兩種組方化學(xué)藥物最大給藥濃度（20 g/kg和48 g/kg），受小鼠胃容量限制，未測(cè)定出半數(shù)致死量LD50，因此需做最大給藥量測(cè)定。

1.4.2急性毒性實(shí)驗(yàn)（最大給藥量測(cè)定）? 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)測(cè)不到LD50，另取剩余KM小鼠26只，其中實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2各10只，空白組6只，雌雄各半。與預(yù)試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟一致，試驗(yàn)前禁食（不禁水） 12 h，實(shí)驗(yàn)組1以薈生源0.96 g+生理鹽水0.17 ml（按配方1最大溶解度進(jìn)行配置，給藥濃度為1.2 g/ml，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、實(shí)驗(yàn)組2以薈生源0.4 g+生理鹽水0.63 ml（按配方2最大溶解度進(jìn)行配置，給藥濃度為1 g/ml，有效量接近成人每日標(biāo)準(zhǔn)服用量200倍），兩組實(shí)際灌胃量均為0.8 ml;空白組以生理鹽水0.8 ml灌胃，三組給藥容積均為40 ml/kg。灌胃次日后每日上、下午各觀察1次，實(shí)驗(yàn)條件同前，連續(xù)觀察7 d。第8天將小鼠用頸椎脫臼致死法處死，取出各組小鼠肝、腎臟，隨后在生理鹽水中輕輕震蕩除去內(nèi)容物，用10%甲醛固定液固定24 h以上，將組織包埋、切片、HE染色。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1一般情況? 根據(jù)動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目記錄動(dòng)物的外觀、飲食、行為、活動(dòng)度[5]、體重、有否死亡等情況。

1.5.2肝、腎臟? ①肉眼觀察有無腫脹、囊腫、萎縮、出血、水腫、顏色異常、粘連、硬化等異常改變;②鏡下觀察各組小鼠體重以及肝臟、腎臟病理學(xué)變化。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理? 采用SPSS 20.0，對(duì)3組小鼠體重、飲水量、進(jìn)食量進(jìn)行單因素方差分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況及體重變化趨勢(shì)? 給藥后小鼠活動(dòng)減少， 1 d后活動(dòng)恢復(fù)正常。試驗(yàn)期內(nèi)無動(dòng)物死亡，各給藥組動(dòng)物均未出現(xiàn)動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目中列舉的急性中毒癥狀和表現(xiàn)，并且毛皮光滑，進(jìn)食、體重增長(zhǎng)及大小便正常，眼、鼻無異常分泌物，粘膜無充血、水腫，呼吸正常。在觀察期間，實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2與空白組小鼠體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），3組相比較體重增長(zhǎng)量無顯著差異，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），實(shí)驗(yàn)操作對(duì)小鼠體重?zé)o影響，見表2。

2.2小鼠肝、腎臟功能觀察

2.2.1肉眼觀察? 未發(fā)現(xiàn)器官有腫脹、囊腫、萎縮、出血、水腫、顏色異常、粘連、硬化等異常改變，與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.2.2 鏡下觀察? 病理切片結(jié)果（圖1）除實(shí)驗(yàn)組2中有1例肝臟有輕微改變外（主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞胞漿疏松化較為明顯，但未見肝細(xì)胞壞死及肝小葉結(jié)構(gòu)的改變）（圖2），其余所有小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)正常，肝細(xì)胞未見明確變性、壞死改變，間質(zhì)無明顯充血，也未見炎性細(xì)胞浸潤;所有小鼠雙側(cè)腎臟腎小球、腎小管均未見明確形態(tài)、結(jié)構(gòu)的改變，未見細(xì)胞變性、壞死和脫落，腎小管內(nèi)無管壁，間質(zhì)無炎性細(xì)胞浸潤。