山東栒子基因組DNA的提取和SRAP分子標記引物篩選

步俊彥 臧德奎

摘要 根據山東栒子葉片多糖多酚多毛的理化性質，研究適合山東栒子便捷高效的基因組DNA提取方法。結果獲得了純度高、質量符合后續分子標記和遺傳多樣性分析要求的基因組DNA。采用6個不同種群的樣品，利用150對SRAP引物組合進行篩選，確定了最佳反應體系為2×EsTaqMasterMix（含染料）12.5? μL，40 ng/μL DNA模板1 μL，10 pmol/μL引物0.5? μL，dd H2O 10.5? μL，共篩選出11對多態性相對良好、條帶較為清晰的引物組合。該研究為以后SRAP分子標記在栒子屬植物遺傳多樣性方面的研究奠定了基礎。

關鍵詞 DNA提取;山東栒子;SRAP;引物篩選

中圖分類號 S188+.1文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）10-0097-04

Abstract According to the physicochemical properties of polysaccharide polyphenols and hypertrichiasis from Cotoneaster schantungensis，a convenient and efficient genomic DNA extraction method suitable for C.schantungensis was studied.The obtained genomic DNA was of high purity and the quality was sufficient to satisfy the requirements of subsequent molecular marker experiments.For 6 plant samples from different populations，150 pairs of SRAP primer combinations were used to screen，and 2×EsTaqMasterMix （containing dye） 12.5? μL，40 ng/μL DNA template 1? μL，10 pmol/μL primer 0.5? μL，dd H2O 10 .5? μL of good system and 11 pairs of wellcharacterized bands with clear primer combinations were determined.This series of experiments laid the foundation for the experimental study of genetic diversity of SRAP molecular markers for the C.schantungensis and Cotoneaster genus species.

Key words DNA extraction;Cotoneaster schantungensis;SRAP;Primer screening

山東栒子（Cotoneaster schantungensis）隸屬薔薇科栒子屬，是山東特有樹種[1]，已列入山東珍稀瀕危保護樹種名錄。過去僅生長于濟南南部山區，種群數量少，屈素青[2]對16份野生種質進行遺傳多樣性分析，但樣品數過少。近年來在泰山、徂徠山、魯山等地發現了與山東栒子表型極為相似的栒子屬種群，需要通過分子標記技術進一步鑒定其分類歸屬。分子標記技術因其方法相對簡便、多態性高、成本低且滿足多種遺傳分析等優點，成為目前種質資源鑒定的高效技術手段之一[3-5]。迄今為止，遺傳基因檢測中常用的DNA分子標記技術主要包括RFLP、RAPD、AFLP、CDDP、SSR等，各種分子標記技術的復雜程度、穩定性及產生遺傳信息的能力不同，各自具有優點和缺點。而SRAP作為功能序列擴增的分子標記技術[6]，因其操作簡便、結果穩定、中等產率和相對較易得到選擇條帶序列的特點而被廣泛應用于棉花[7]、西瓜[8]、黃瓜[9]、菊花[10]等植物的遺傳多樣性研究。……