內蒙地區罕見cis-AB01/ O01血清學與基因分型研究——附1例報告

王春海，王文梅，黃華亮

(1.內蒙古包鋼醫院輸血科,內蒙古包頭 014010；2.內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院重癥醫學科,內蒙古包頭 014010)

ABO血型系統抗原的基因位于第9條染色體上，基因名為ABO,其DNA鏈長為19.5 kb，是被人類發現的第1個血型系統[1]。而ABO血型亞型是由ABO基因變異形成，A基因變異形成A亞型，B基因變異形成B亞型，O基因變異形成新的O等位基因，ABO亞型包括A3、Ax、Ael、Aw、Am、B3、Bx、Bel、Bw、cisAB、B(A)。通常情況下，AB型個體一條染色體攜帶A基因，另一條染色體攜帶B基因，稱為反式AB型。但順式AB型(cisAB型)是一種獨特的ABO表型，A基因和B基因位于同一條染色體上遺傳給子代[2]。這種特殊遺傳方式常常造成ABO正反定型不符，降低了輸血的有效性和安全性，因此，正確鑒定cisAB血型是保證安全輸血的前提[3]。

現將本院1例cisAB血型患者的血型血清學與基因分析結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，男，61歲，右髖骨疼痛，活動受限2年，擬行擇期手術，既往有輸血史，常規備血，Ortho AutoVuet全自動血型及配血分析系統鑒定結果：正定型AB，反定型A，正反定型不符，進一步作血型血清學檢查，同時重新采集患者樣本，外送江蘇中濟萬泰生物醫藥有限公司諾貝爾獎研究院做ABO基因分型及測序(樣本號W126)。

1.2儀器與試劑 Ortho AutoVuet全自動血型及配血分析儀、臺灣貝索離心機、水浴箱； 抗-A、抗-B、RhD(IgM)血型定型試劑、篩選紅細胞、抗-H試劑、抗-A1試劑，上海血液醫藥生物有限公司；ABO反定型，長春博德生物技術有限責任公司；抗A,B試劑 法國；ABO基因分型試劑盒：人類紅細胞ABO血型基因分型試劑盒(熒光PCR)批號20180226，江蘇中濟萬泰生物醫藥有限公司，以上所有試劑均在效期內使用。

1.3方法

1.3.1ABO血型血清學試驗 ABO血型鑒定、抗-H測定、抗-AB、抗體篩選、唾液試驗等血型血清學檢測,均嚴格按照文獻[4-5]操作。

1.3.2ABO基因分型及測序 由江蘇中濟萬泰生物醫藥有限公司諾貝爾獎研究院鑒定。

2 結 果

2.1ABO血型結果 該例患者正定型AB型(B抗原表達強度較弱，呈混合視野),反定型為A型，正反定型不符，初判定為AB亞型產生了抗-B或B抗原減弱伴同種抗體；同時正定型與抗-A1為0、與抗-AB為++++、與抗-H為+++，反定型與B細胞為+，說明該抗體可能為抗-B抗體，結合病史，疑似cisAB型，需做基因檢測進行確定。結果見表1。

表1 ABO血型血清學鑒定結果

注:mf為混合外觀,0為無反應性

2.2抗體篩選試驗 鹽水試管法結果呈陰性，抗人球蛋白法結果呈陰性；反定型3個獻血者B細胞均為+，3個獻血者O細胞均為陰性。兩個試驗結合起來分析可以看出患者抗體并非ABO以外的同種抗體，而是不規則抗-B。

2.3唾液試驗結果 結果顯示為分泌型，唾液中含有A、H物質和弱分泌B物質。

2.4ABO基因分型結果 該例患者標本(W126)的熒光PCR分型，Type A出現陽性條判斷為A,非A205;Type OT、Type O01出現陽性條判斷為O01(見圖1)。ABO基因分型結果為：A/O01。

注：藍色框框為內參，紅色框框為陽性條

圖1基因分型結果

2.5ABO基因測序結果 該例患者標本(W126)的基因測序結果在外顯子6的297A/A未有突變，261處缺失G，形成261前面連續出現套峰，這兩點屬于O01基因特征性序列。而在外顯子7又出現467C>T、803G>C兩處突變,符合cis-AB01型基因特征。依據測序結果推出該例標本的基因型為cisAB01/O01。ABO基因全測序結果見圖2、3。

圖2 ABO基因全測序結果

圖3 基因突變點截圖

2.6最終判定結果 綜合血清學和基因檢測可以確定為cis-AB，基因分型符合cis-AB01/O01。

3 討 論

cisAB是一種極為罕見的亞型，在人群中出現的概率非常低，大約是1/580 000～1/170 000。有文獻報告，一般在1 000 000例日本人中找到14例，比例為0.0014%，而在112 710例受檢AB型中，比例為0.012%[6]。1965年YAMAGUCHI等[7]報道A2B3血型，該家族成員的A2和B3基因在同一染色體上。當一單倍型的A糖苷轉移酶基因發生一點或多點突變時或者B糖苷轉移酶基因發生一點或多點突變時，造成該基因編碼的糖苷轉移酶同時催化兩種底物分別加到L-巖藻糖上形成A和B抗原，形成的AB型叫cisAB[8]，出現cisAB有2種可能：一是基因的不等交換，使得一條染色體上的A基因與另一條染色體上的B基因組成了新的cisAB基因，并且攜帶正常的遺傳信息；另一種情況是A基因或B基因發生突變，使基因編碼產物同時具有A和B抗原。1990年，ABO基因被克隆和測序后，cisAB血型的分子遺傳模式逐步被人類研究并揭示。造成cisAB表現型的主要原因和A、B基因7號外顯子的點突變有關[2]。

到目前為止，cisAB等位基因一共有8型，分別為01、02、03、04、05、06、07、08型，還有一種cisAB 01var型[9]。cisAB01主要特征是803G>C、467C>T兩點突變[10]。該例患者在外顯子6的297A/A未有突變，261處缺失G，形成261前面連續出現套峰，這兩點屬于O01基因特征性序列。而在外顯子7又出現467C>T、803G>C兩處突變,符合cis-AB01型基因特征[9]。外顯子序列符合cisAB01/O01雜合特征，即cisAB01與O01雜合，基因分型及測序應為cis-AB01/O01。cisAB01/O01基因型占cisAB血型基因型總數的66.7%[1]。cisAB/O基因型，一條是單倍型AB型，另一條是單倍型O型，形成cisAB血型的血清學結果具有一定的特點。當cisAB基因與O基因雜合時，血清學常表現為A2B3：(1)cisAB細胞上A抗原雖然經常被認為是A2,但A抗原強度強于A2B,弱于A1B；(2)cisAB細胞幾乎無例外地表達弱的B抗原性，類同B3表型；與免疫性A型血清反應較強，與自然發生的血清抗B弱凝集或不凝集；(3)cisAB細胞有很強的H抗原性，與O細胞反應強度相當，達到+++的強度；(4)cisAB人血清中總是有弱抗-B存在[5]。血型血清學試驗中：正定型抗-A凝集(++++)，抗-A1不凝集(0)，這是A2抗原的表現；同時抗-B弱反應,并呈混合視野(mf)；反定型中有較弱的抗-B(+)，依據抗體篩選試驗、反定型3個獻血者B細胞和3個獻血者O細胞結果判斷，該抗體并非ABO以外的同種抗體，而是不規則抗-B，抗-H明顯比正常B型增強,這是B3抗原的表現。該患者標本的血清學特征具有A2B3的特征[5]。

cisAB血清學特征A2B3必須與下列2種情況相區別，(1)與ABx或AxB區別[11]：ABx或AxB常常是因cisAB等位基因與另一正常A或B等位基因雜合時，有抗原劑量效應，而抗-H不增強或較弱，與抗-H反應凝集強度一般弱于O細胞與抗-H的反應程度[12-13]；(2)與獲得性B區別：獲得性B與疾病有關，只表現在A型紅細胞上，在血型鑒定時，出現類似于AB型的反應格局。獲得性B抗原的個體血液中只含有抗-B抗體，但不與獲得性B細胞反應，獲得性B抗原可能減弱A型抗原的抗原性，因此，獲得性B消失后，紅細胞A抗原性增強[5]。

由于各種因素的影響，根據血清學表現，cisAB血型很難被確定，因為弱抗B的存在會導致ABO正反定型不符，極易導致血型錯判。在臨床檢測過程中往往表現為血型定型和交叉配血困難，輸血時，配血不相合，可引起溶血性輸血反應，對于該例患者，其血清中有抗-B抗體，故不能輸注B型紅細胞，以輸注O型洗滌紅細胞和AB型血漿為佳，或自體輸血。考慮到該例患者輸血適應癥完全符合貯存式自體輸血，與手術前3天采集自體血400 mL,術中進行回輸，術后無不良反應。

據不完全統計，該例患者cis-AB01/O01亞型屬內蒙地區首次報道。鑒于該患者因家庭原因未同意調查其遺傳情況，故未做家系調查。

綜上所述，依據cisAB的血清學反應格局并不能正確確定cisAB亞型，必須靠分子生物學技術(如ABO基因分型)才能區別，條件允許情況下可以做家系調查，只有準確無誤地鑒定cisAB血型，才能做到安全輸血，防治輸血不良反應的發生。