NIPT技術在胎兒染色體非整倍體檢測中的應用意義

鐘志文

廣東省廣州市番禺區中心醫院婦產科 511400

統計數據顯示我國每年缺陷兒出生率高達4%～6%，每年新增出生缺陷約90萬例，每年因為出生缺陷兒引起的經濟負擔超200億[1]，患兒家屬承擔著巨大的經濟負擔及心理負擔，因此近年來國家加大了產前篩查的推廣力度。血清學篩查法，通過結合孕婦血液生化指標、體質量、孕婦預產期、孕周、年齡等計算出唐氏病患兒的危險系數，在胎兒染色體疾病中應用廣泛，然而其準確性較低，易出現誤診、漏診等，因此探討準確性更高的診斷價值有著積極的臨床意義。羊水穿刺、臍血穿刺、絨毛活檢等準確度高，然而作為有創技術，其可以對胎兒、母體造成較大不良影響，引起流產、感染等，孕婦接受度不高[2]。近年來無創胎兒染色體整倍體基因檢測逐漸興起，并在產前篩查中廣泛使用。為進一步明確NIPT技術在胎兒染色體非整倍體檢測中的應用價值，筆者選取在我院接受產前檢查的300名孕婦臨床資料進行研究分析，現具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取自2016年6月—2018年6月在我院接受產前檢查的300名孕婦(均為單胎活檢)作為觀察對象，均為單胎妊娠。納入標準：(1)年齡≥35歲；(2)B超顯示胎兒存在異常或者唐氏篩查結果為臨界風險、高風險；(3)孕婦知情并簽署知情同意書。研究經醫院倫理委員會審核通過。年齡20～48歲，平均年齡(31.17±3.09)歲；初產婦156例，經產婦144例；孕次1～4次，平均孕次(2.53±0.44)次；孕周15～34周，平均孕周(21.87±3.02)周。其中年齡≥35歲者56例，唐氏篩查臨界風險165例，高風險49例，胎兒異常30例。

1.2 方法 孕婦簽署《無創產前基因檢測知情同意書》后取外周靜脈血5ml，置于EDTA抗凝管內抗凝，輕微搖晃后放置于4℃溫度下待測。雙重離心，轉速1 600r/min，離心10min；離心完成后取上清液，再次離心，轉速1 600r/min，時間10min。離心完成后去除殘留細胞碎片及白細胞。將無細胞血漿放置于離心管內，置于-80℃下。選取無開蓋、滲漏、裂管及外溢樣本，血漿量≥2ml、無溶血、污染為合格樣本，送至深圳華大臨床檢驗中心進行胎兒游離DN篩查，并提取游離DNA行大規模并行測序，獲取每條染色體上分布的真實核算片段數量，經文庫構建后利用高通量測序技術、生物學信息，推算出胎兒染色體疾病的風險。對于NIPT檢測出高風險孕婦進行健康教育，建議其進行羊水穿刺等進一步檢查。在獲取孕婦同意后簽署知情同意書，并行介入性產前診斷，B超介導下，于羊水或者臍帶血中取材20ml，經細胞培養G顯帶染色體核型分析,確診胎兒是否出現染色體非整倍體疾病。若羊水穿刺或臍血穿刺染色體核型分析為高風險，則建議孕婦引產，對于產前基因檢查低風險者則做隨訪、復查處理，直至分娩。引產胎兒進行尸檢，分娩嬰兒在出生后3個月時行再次檢查。

2 結果

2.1 NIPT檢測結果 300名胎兒經NIPT技術檢測，高風險21例，低風險279例，陽性檢出率為7%，具體見表1。

表1 NIPT檢測結果分布情況[n(%)]

2.2 羊水穿刺或者臍血穿刺結果 NIPT檢出高風險的21例胎兒均接受羊水或者臍血穿刺檢查，其中確診高風險20例，1例為低風險，陽性檢出率為6.67%。其中13-三體綜合征8例(2.67%)，21-三體綜合征11例(3.67%)，18-三體綜合征1例(0.33%)。

2.3 NIPT檢測價值 以羊水穿刺或者臍血穿刺結果為金標準，NIPT檢測真陽性20例，假陽性1例，真陰性277例，假陰性2例。NIPT檢測靈敏度、特異度及準確度分別為90.90%、99.64%、99%。

2.4 胎兒隨訪結果 羊水穿刺或者臍血穿刺確診為高風險患者20例，均行引產處理，尸檢結果證實存在染色體疾病；1例NIPT確診而羊水穿刺檢查陰性者，胎兒出生后未見染色體疾病。其余279名胎兒隨訪至出生，未見染色體疾病發生。

3 討論

近年來隨著國家優生優育政策的推廣，孕前檢查、產前檢查等廣泛開展，通過早期產前篩查不僅能夠在胎兒出生前發現異常以及時終止妊娠，同時能夠幫助臨床醫生明確胎兒疾病，把握適當時機給予新生兒藥物或者手術治療，為新生兒的健康成長提供保障[1]。臨床產前檢查主要通過超聲篩查，對于檢查結果為高危至畸的孕婦進行進一步檢查，明確胎兒染色體疾病及單基因疾病等。

我國自20世紀90年代引進孕中期唐氏篩查，能夠檢出70%～80%胎兒染色體非整倍體，近年來通過與B超聯合，假陽性率控制在5%以下，90%左右的非整倍體胎兒可以被檢出，然而其仍有較高的假陽性率，需進一步明確診斷[3]。絨毛活檢、臍血穿刺及羊水穿刺等雖然準確性高，然而作為有創技術，臨床操作導致宮腔感染、流產及死胎風險增加，易引起醫療糾紛；此外染色體核型分析所需時間較長，因此臨床接受度不高。上世紀，臨床學者發現胎兒游離DNA可在母體外周血漿內存在，孕婦外周血游離DNA中有5%～10%來源于胎兒的凋亡細胞，且在孕早期即可被檢測[4]；而隨著孕周的增加，胎兒游離DNA含量相應增加。鑒于此，臨床嘗試對孕婦外周血內游離DNA進行高通量測序，以實現早期篩查胎兒染色體非整倍體疾病。近年來隨著高通量測序技術的快速發展，NIPT在胎兒染色體非整倍體疾病的檢測中靈敏度、特異度達到99%左右。本文中，300名胎兒接受NIPT檢測，其靈敏度、特異度及準確度分別為90.90%、99.64%、99%，靈敏度相對低于國內類似研究[5]，分析認為與本次納入樣本數較少有關。通過對結果2.1進行觀察分析，可以發現高齡產婦、唐氏篩查高危以及胎兒異常為胎兒染色體非整倍體疾病的高危人群，且21-三體綜合征、13-三體綜合征占據較大比例，因此對于高齡孕婦、B超診斷異常者，需進一步完善NIPT診斷，以避免唐氏兒的出生。

雖然無創產前基因檢測技術具有快捷、安全、準確等優勢，然而該技術無法篩查染色體結構異常，在嵌合體染色體檢測、染色體平衡結構異常的檢測中，易出現假陰性、假陽性，同時在多胎妊娠診斷中無法使用，無法取代傳統的染色體核型分析技術[6]，因此在臨床使用時需嚴格把握適應證:(1)產前高危或者臨界風險孕婦；(2)發熱、感染未愈、先兆流產等存在接入性產前診斷禁忌證者；(3)確診時孕周較大、超出產前篩查范圍孕婦；(4)高齡孕婦，以更好的服務于孕婦及胎兒。

總之，NIPT在胎兒染色體非整倍體基因檢測中具有敏感度、特異度及準確度高等特點，同時具有無創、便捷等優勢,可作為產前缺陷兒篩查的有效手段推廣。