高效液相色譜法測定板山崗顆粒中（R，S）-告依春含量*

陳 路 ，吳無畏 ，劉 鈺 ，藍曉步 ，何曉惠 ，藍鳴生 △

（1.廣西壯族自治區藥用植物園，廣西 南寧 530023； 2.廣西壯族自治區南寧市第一人民醫院，廣西 南寧 530012； 3.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001）

中醫治療各類感染性疾病主要根據祛邪扶正的理論，并貫徹中醫整體觀和辨證論治思想[1-2]。正是基于該思想，20世紀80年代，廣西南寧市第一人民醫院結合該自治區特有的各類中藥民族藥材，反復實踐，自主研發出了中藥制劑板山崗顆粒，其由板藍根、山芝麻、白點秤（崗梅）3味藥材組方，具有清熱解毒、涼血等多種功效，臨床主要用于治療外感、咽喉炎、扁桃體炎、腮腺炎等感染性疾病。該中藥制劑一經進入臨床，就以其獨特的臨床療效、顯著的預防保健作用和相對較低的治療費用，深受患者歡迎，在維護和增進健康方面有巨大優勢。同時，由于制劑服用方便，中藥成分毒性較小，不良反應較少，特別適用于兒童、老年人等特殊群體。為進一步控制該制劑質量，本研究中建立了測定板山崗顆粒中（R，S）-告依春含量的方法?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

VARIAN 210型高效液相色譜儀（美國Varian公司）；BSA124S型萬分之一電子分析天平（德國Sartorius公司）；UV-1240型紫外-可見光光度計（日本Shimadzu公司）；SB-5200D型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試藥

（R，S）-告依春對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為11753-201505，供含量測定用）；板山崗顆粒（南寧市第一人民醫院自制，批號分別為181101，181102，181103，規格為每袋 12 g）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水（12 ∶88，V／V）；流速：1.0mL ／min；檢測波長：244nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

稱?。≧，S）-告依春對照品 0.002 0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并定容，制成質量濃度為40 μg／mL的對照品貯備液；再精密吸取4 mL，置10 mL容量瓶中，用水定容，搖勻，制成質量濃度為16 μg／mL的對照品溶液。稱取樣品5 g，精密稱定，置具塞三角錐形瓶中，精密加水25 mL，稱定質量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，放冷至室溫，再稱定質量，用水補足減失的質量，搖勻，經微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。稱取不含板藍根的陰性樣品3 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密量取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結果陰性對照品溶液在與對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性好。

線性關系考察：分別精密吸取對照品貯備液1，2，3，4，5，6，7，8 mL，置 10 mL 容量瓶中，用水定容，搖勻，經微孔濾膜濾過，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=120.047X+0.159，R2=0.999 6（n=8）。結果表明，（R，S）-告依春進樣量在0.04～0.32 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：取（R，S）-告依春對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖。結果的RSD為0.79%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密稱取樣品（批號為181101）5 g，同法制備供試品溶液，于室溫放置 0，1，2，4，8，12，24 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果的RSD為1.57%（n=7），表明供試品溶液室溫放置24h基本穩定。

重復性試驗：精密稱取樣品（批號為181101）6份，每份5 g，同法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖并計算含量。結果，（R，S）-告依春平均含量為 0.065 1 mg／g，RSD為 1.10% （n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的樣品[批號為181101，含（R，S）-告依春 0.065 1 mg／g]適量，依法制備供試品溶液，分別精密加入對照品貯備液2，4，6 mL，各3份，按擬訂色譜條件進樣測定。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

圖1 高效液相色譜圖

分別取不同批號的板山崗顆粒3批，同法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖并計算（R，S）-告依春的含量。結果批號為181101，181102，181103的樣品的平均含量分別為 0.0651，0.0654，0.0662mg／g。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

3 討論

3.1 質量評價指標選擇

參考文獻[3-5]及廣西壯族自治區食品藥品監督管理局發布的相關壯藥質量標準，對樣品中3味中藥（板藍根、山芝麻、崗梅）進行分析，以建立最佳質量評價標準。山芝麻含有葫蘆素，崗梅含有去氫烏索酸等，但山芝麻和崗梅在2015年版《中國藥典（一部）》及其他文獻中均無含量測定標準方法，經研究，無法確定兩味藥材的有效成分或代表性成分的含量測定方法，故暫時不作為本處方的質量評價標準。參考文獻[6-11]，探索得到的板藍根中（R，S）-告依春色譜圖中無陰性干擾，同時板藍根在處方中為君藥，性寒味苦，有清熱解毒、涼血利咽功效，可用于治療瘟疫時毒、發熱咽痛、溫毒發斑、痄腮、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒、癰腫等病癥。其主要含（R，S）-告依春等多種成分，具有明顯的抗流感病毒作用，且化學性質穩定，故以（R，S）-告依春作為板山崗顆粒的質量評價指標。

3.2 樣品處理

樣品的制備方法考察了甲醇超聲溶解、50%甲醇超聲溶解、水超聲溶解、水回流提取等處理方法，對照品的制備方法探討了甲醇溶解、50%甲醇溶解、水溶解等處理方法，結果表明，水超聲溶解，其溶解度大，色譜圖峰形較好，且該方法操作簡易，又無陰性干擾[12]。

3.3 流動相選擇

參考2015年版《中國藥典（一部）》板藍根藥材項下測定（R，S）-告依春的方法，曾選用甲醇-水（15∶85，V／V）為流動相，發現（R，S）-告依春與樣品中其他峰分離度小，且峰形不好。還采用不同比例的甲醇-水系統，比較樣品的出峰時間、理論板數、分離度和峰形（對稱性）[13-14]。最終選擇了甲醇 -水（12 ∶88，V／V），其保留時間合適，且分離度好、柱效高，理論板數按（R，S）-告依春計應不低于5 000。

3.4 色譜條件選擇

曾采用 Dikma Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Kromasil 100-5 C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）、Agilent XDB C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）等進行樣品溶液的測定。以Agilent XDB C18柱測得樣品溶液色譜圖中保留時間雖較好，但其峰形不好，因而不被采用；而Dikma Diamomsil C18柱測得樣品溶液色譜圖中峰形較差，故不予選擇；Kromasil 100-5 C18柱測得樣品溶液中的（R，S）-告依春色譜圖中保留時間合適，且與前后雜質峰的分離度均大于1.5，峰形和分離度均良好，符合《中國藥典》的規定。

3.5 方法評價

本研究中建立的方法操作簡便、準確，精密度、穩定性、重復性均良好，可用于板山崗顆粒中（R，S）-告依春含量的測定。