T細(xì)胞抗原受體Vβ7陽(yáng)性T細(xì)胞檢測(cè)在乙型肝炎患者中的臨床應(yīng)用

鄒秀利

（廣東省梅州市中醫(yī)醫(yī)院（梅州市田家炳醫(yī)院）檢驗(yàn)科，廣東 梅州 514000）

乙型肝炎是一種感染性疾病，主要由乙型肝炎病毒引起，以肝臟病變?yōu)橹饕卣鳌Ｒ倚透窝着R床患者主要表現(xiàn)為乏力、食欲下降、肝區(qū)疼痛、惡性、腹部不適等，部分患者伴有黃疸、發(fā)熱等癥狀，如果治療不及時(shí)隨著病情發(fā)展會(huì)出現(xiàn)肝硬化，嚴(yán)重的則發(fā)展為肝癌[1]。本次研究通過(guò)對(duì)乙型肝炎患者外周血TCR Vβ7陽(yáng)性T細(xì)胞增殖活性進(jìn)行檢測(cè)，分析其應(yīng)用于乙型肝炎患者中的臨床價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2015年4月至2017年8月我院體檢正常的18例健康體檢者作為正常組，選取同期體檢為急性乙型肝炎患者15例為急性乙型肝炎組，同期體檢為慢性乙型肝炎患者35例作為慢性乙型肝炎組。正常組：男10例，女8例，平均年齡（43.6±2.8）歲；急性乙型肝炎組：男9例，女6例，平均年齡（43.7±2.6）歲；慢性乙型肝炎組：男23例，女13例，平均年齡（43.5±2.4）歲，所有體檢者均自愿參加，醫(yī)學(xué)倫理會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，組間具有比較意義（P＞0.05）。

1.2 方法：①外周單個(gè)核心細(xì)胞處理：采取靜脈血3～4 mL（無(wú)菌）置入含有抗凝劑的食管中，加入Hank液4 mL進(jìn)行稀釋，用Ficoll液對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，并吸取，用RPMI-1640培養(yǎng)液進(jìn)行洗滌，次數(shù)3～4次，然后將其加入濃度為1×105/mL 48孔培養(yǎng)板中，并置濃度為5%CO2培養(yǎng)箱中對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，24 h后，通過(guò)孔適當(dāng)?shù)募尤隤HA、HBsAg重組抗原，24 h后，用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)TCR Vβ7+T細(xì)胞檢測(cè)。②熒光抗體對(duì)細(xì)胞標(biāo)記：將細(xì)胞培養(yǎng)懸液分三組，并標(biāo)記如下：A加免疫球蛋白20 μL。B加入抗CD4-PE10 μL以及抗TCRVβ7-PEcy5，劑量為10 μL。C加入抗CD8-PE10 μL以及TCRVβ7-PEcy5，劑量為10 μL，加入培養(yǎng)后細(xì)胞，保證細(xì)胞數(shù)為1×105，將其置于暗室，時(shí)間約20 min。③流式細(xì)胞儀檢測(cè)：A管對(duì)流式細(xì)胞儀電壓進(jìn)行調(diào)節(jié)，然后對(duì)B管、C管進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果則為CD4+TCR Vβ7+T細(xì)胞、CD8+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量的百分率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為版本為SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析研究中的數(shù)據(jù)結(jié)果，計(jì)量資料采取（±s）表示，t檢驗(yàn)，P＜0.05說(shuō)明兩組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)有差異。

2 結(jié) 果

2.1 CD4+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量結(jié)果：正常組、急性乙型肝炎組與慢性乙型肝炎組之間比較，CD4+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 CD4+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量（%，s）

表1 CD4+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量（%，s）

images/BZ_152_175_1945_1196_1991.png急性乙型肝炎組 15 7.92±0.95 3.65±0.38慢性乙型肝炎組 35 7.14±1.05 1.49±0.15正常組 18 8.14±0.91 3.79±0.19 F-6.716 689.194 P-0.006 0.001

2.2 CD8+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量結(jié)果：正常組、急性乙型肝炎組與慢性乙型肝組CD8+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 CD8+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量（%，）

表2 CD8+TCR Vβ7+T細(xì)胞含量（%，）

images/BZ_152_175_2458_1196_2504.png急性乙型肝炎組 15 10.85±1.61 5.81±0.11慢性乙型肝炎組 35 10.41±1.40 2.13±0.16正常組 18 11.06±0.71 5.71±0.15 F-1.519 4128.453 P-0.087 0.000

3 討 論

TCR是T細(xì)胞識(shí)別抗原的功能性結(jié)構(gòu)，屬于其特有的抗原受體。T細(xì)胞抗原受體共包括4中，分別為T(mén)CRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ，T細(xì)胞抗原受體β是其中之一[2]。外周血T細(xì)胞中TCRαβ型T細(xì)胞占比例約超過(guò)95%，TCRγδ型T細(xì)胞占比例1%～5%，且成熟的αβT細(xì)胞多為CD4+、CD8+單陽(yáng)性細(xì)胞，進(jìn)一步將其分為兩個(gè)亞群，分別為CD4+、CD8+，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)抗感染作用、特異性殺傷靶細(xì)胞作用是其主要的效應(yīng)功能[3]。

Vβ有24個(gè)亞家族，其中Vβ7基因具有較強(qiáng)的識(shí)別抗原，T細(xì)胞激活殺傷等作用。本次研究結(jié)果顯示，在PHA刺激下，TCRVβ7+T細(xì)胞處于增殖狀態(tài)，說(shuō)明研究中應(yīng)用的細(xì)胞具有一定的增殖能力。且在PHA刺激下，CD4+TCRVβ7+T細(xì)胞也處于增殖狀態(tài)，組間陽(yáng)性比例有差異（P＜0.05），HBsAg刺激下，正常組、急性乙型肝炎組CD8+TCRVβ7+T細(xì)胞含量、CD4+TCRVβ7+T細(xì)胞含量均高于慢性乙型肝炎組（P＜0.05），說(shuō)明慢性乙型肝炎組患者的TCR Vβ7+T細(xì)胞增殖對(duì)該刺激物不敏感，對(duì)該結(jié)果分析，可以與TCRVβ7+T細(xì)胞增殖活血低有關(guān)，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體清除功能下降，造成乙型肝炎病毒在體內(nèi)停留時(shí)間較長(zhǎng)。

綜上所述，在乙型肝炎患者的臨床檢測(cè)中，應(yīng)用TCR Vβ7+）T細(xì)胞檢測(cè)，可以對(duì)患者機(jī)體的免疫功能予以動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)乙型肝炎患者的檢測(cè)具有重要的價(jià)值。