多發性骨髓瘤患者骨髓細胞中CD269、CD317的表達及其意義

黃亞麗 馬占忠 黃剛

[摘要] 目的 研究多發性骨髓瘤（MM）患者骨髓細胞中CD269、CD317的表達及其意義。 方法 選擇2016年1月～2018年5月在廣東省粵北人民醫院接受治療的86例MM患者作為觀察組，另選同期診治的缺鐵性貧血患者80例作為對照組。比較兩組骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量、血紅蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脫氫酶（LDH）水平；分析觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對表達量，并分析患者骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量與Hb、β2-MG及LDH水平的相關性。 結果 觀察組骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）。觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05），但兩組LDH水平比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對表達量比較，差異無統計學意義（均P > 0.05）。根據Pearson相關性分析，結果顯示患者骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量分別與Hb、β2-MG呈負相關（P < 0.05），而與LDH無明顯相關性（P > 0.05）。 結論 MM患者骨髓細胞中CD269、CD317水平的表達明顯升高，Hb、β2-MG水平明顯降低，且CD269、CD317相對表達量分別與Hb、β2-MG呈負相關。臨床上可進一步監測上述四種指標的表達情況，從而更加全面地反映MM患者的實際病情。

[關鍵詞] 多發性骨髓瘤；骨髓細胞；CD269；CD317

[中圖分類號] R733.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）05（a）-0103-04

[Abstract] Objective To study the expression and significance of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with multiple myeloma（MM）. Methods A total of 86 patients with MM who were treated in Yuebei People′s Hospital of Guangdong province from January 2016 to May 2018 were selected as the observation group， another 80 patients with iron deficiency anemia during the same period were selected as the control group. The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells， the levels of hemoglobin （HB）， β2-microglobulin （β2-MG） and lactate dehydrogenase （LDH） were compared between the two groups， the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group were compared too. The correlations between the relative expressions of CD269， CD317 and the levels of HB， β2-MG and LDH were analyzed. Results The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells in the observation group were significantly higher than that of the control group （P < 0.05）. The levels of HB and β2-MG in the observation group were significantly lower than that in the control group （P < 0.05）， but there was no significant difference in the level of LDH between the two groups （P > 0.05）. There was no significant difference in the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group （all P > 0.05）. According to Pearson correlation analysis， the results indicated that the relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells were negatively correlated with HB， β2-MG （P < 0.05）， but there was no significant correlation with LDH （P > 0.05）. Conclusion The expressions of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with MM are significantly elevated， while the levels of HB and β2-MG are significantly decreased. The relative expression of CD269 and CD317 are negatively correlated with HB and β2-MG respectively. Clinically， the expression of these four indicators can be further monitored to provide more comprehensive feedback on the actual condition of MM patients.

[Key words] Multiple myeloma； Bone marrow cell； CD269； CD317

多發性骨髓瘤（MM）作為源自漿細胞的一類惡性腫瘤，患者的中位生存期通常是3～5年，且發病率在全體惡性腫瘤中大約占1%，但在造血系統腫瘤中約占10%，且已呈現出逐年增高的進展趨勢[1-2]。MM的治療通常依賴免疫應答反應，這主要是免疫反轉性抑制能夠強化內源型抗骨髓瘤的活性[3-4]。尋找新型免疫監測指標對MM患者的治療具有十分重要的意義。CD269屬于B細胞成熟性抗原，其也是B細胞表面分子，與B細胞活化因子結合后對腫瘤細胞的增殖具有促進作用。分化抗原簇317（CD317），其又可稱作骨髓基質細胞性抗原2，也可作為終末分化型B細胞的一個特異性標志物[5-6]。為此，本研究分析了MM患者骨髓細胞中CD269、CD317的表達及其意義，旨在為臨床診治提供豐富的數據基礎和參考依據，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月～2018年5月在粵北人民醫院（以下簡稱“我院”）接受治療的86例MM患者作為觀察組。納入標準：①患者均符合中國多發性骨髓瘤診治指南（2015年修訂）中關于MM的診斷標準[7]；②年齡>30歲；③患者或其家屬已對本研究充分知情，并已簽署同意書。排除標準：①其他類別的血液疾病者；②有感染性疾病或免疫類疾病者；③有其他種類的惡性腫瘤者；④研究期間死亡者。觀察組男62例，女24例；年齡31～79歲，平均（61.34±1.04）歲；病程1～15個月，平均（7.35±0.82）個月。另選同期在我院診治的缺鐵性貧血患者80例作為對照組，其中男60例，女20例；年齡32～76歲，平均（61.28±1.21）歲；病程2～14個月，平均（7.40±0.77）個月。兩組性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經我院醫學倫理委員會審核批準。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 FACSCalibur型流式細胞儀（美國BD公司）；單克隆抗體、同型對照物、熒光微球、溶血素相關試劑盒均購自美國的BD公司。

1.2.2 標本采集 所有患者入院當日的晨間于無菌操作條件下抽取2 mL骨髓，并給予肝素抗凝，以及4 mL的血液標本。其中，血液標本采用3000 r/min常規離心15 min，離心半徑12 cm，分離血清，待用。

1.2.3 CD269、CD317相對表達量測定 制備并收集其骨髓細胞懸液，并將細胞數調節到（0.5～1.0）×106個/mL，通過四色流式分析法測定胞膜抗原，將100 μL樣本分別添加不同組合的抗體20 μL，另制備同型對照管，混勻，避光條件下放置20 min，待溶血后，采用流式細胞儀測定，應用CellQuest Pro軟件選擇10 000個細胞進行分析，應用CD45/SSC及CD138聯合設門統計細胞群中CD269、CD317陽性率及表達強度，其中膜抗原陽性率>20%記為陽性。

1.2.4 血紅蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脫氫酶（LDH）水平的測定 采用日本希森美康公司的XE2100型血液分析儀測定血清中Hb水平；采用6700型全自動生化分析儀測定β2-MG及LDH水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性采用Pearson相關性分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量比較

觀察組骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 兩組Hb、β2-MG及LDH水平比較

觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）；兩組LDH水平比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表2。

2.3 觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對表達量比較

觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對表達量比較，差異無統計學意義（均P > 0.05）。見表3。

2.4 患者骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量與Hb、β2-MG及LDH水平的相關性分析

Pearson相關性分析發現，患者骨髓細胞中CD269、CD317的相對表達量分別與Hb、β2-MG呈負相關（P < 0.05），且與LDH無明顯的相關性（P > 0.05）。見表4。

3 討論

MM屬于惡性漿細胞類疾病，我國此病的年發病率高達1.3/10萬～5.0/10萬，也是發病率位居前列的血液型惡性腫瘤[8-9]。有報道[10]指出，MM患者群體中，男性占比較女性高，且發病年齡以老年為主，隨著我國老齡化程度的加劇，MM的發病率可能會迎來更加快速的增長。在病理學機制中，MM主要是因患者骨髓內存在的漿細胞發生異常性增殖，使球蛋白出現異常性分泌的一類B淋巴細胞不斷克隆性增殖的惡性腫瘤。當前治療MM的方式較多，比如化療和自體骨髓抑制，以及造血干細胞的移植和生物學療法等，但其產生的整體療效卻不令人滿意[11]。為更好地尋找治療MM的臨床方案，對此病進行分子學層面的深入研究十分必要。CD269是與B淋巴細胞有關刺激因子的一種受體，CD317屬于Ⅱ型跨膜蛋白，以往二者在炎癥性疾病或免疫性疾病中存在較多的研究報道。但近年來有報道[12-13]指出，二者在機體中的表達與惡性腫瘤的發病具有密切的關系。

本研究發現，觀察組骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量均明顯高于對照組（P < 0.05），提示MM患者骨髓細胞中CD269、CD317表達明顯升高。CD269作為B細胞刺激因子的重要受體，其參與了此種刺激因子調控機體中惡性B細胞的主要增殖過程，同時參與了MM細胞的分化和增殖，最終在MM的一系列病理生理反應中產生了重要的作用[14-15]。因此，機體骨髓細胞中的CD269水平明顯升高。CD317是終末B細胞的自身限制型抗原，其在腫瘤細胞亦或是可分泌免疫球蛋白的已成熟B細胞中表達，可作為晚期B細胞已成熟的重要特異性標記[16]。同時，CD317能夠調控機體中免疫應答反應而產生抗炎和抗病毒等作用，進而參與腫瘤細胞的免疫反應，其在MM患者骨髓細胞中的表達水平明顯升高。本研究結果還發現，觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對照組（P < 0.05），但兩組LDH水平比較，差異無統計學意義（P > 0.05），提示MM患者機體中Hb、β2-MG水平明顯下降，且LDH水平無明顯變化。其中β2-MG是一類相對分子質量比較低的蛋白，也是細胞膜的完整組織相容型抗原，其因在電泳時處在β2區帶而得名。在機體血清中的β2-MG能經過腎小球的毛細血管壁，自由濾過，且幾乎全部被人體的近端腎小管進行重吸收和分解[17-18]。但對MM患者而言，隨著瘤細胞的不斷增生和細胞周轉的加速，最終可致使β2-MG水平下降。MM患者大都合并貧血癥狀，這主要是由骨髓瘤細胞的浸潤和其自身的生物學特性而引起，Hb作為患者機體是否貧血的重要判斷指標，其在MM患者機體中的水平明顯下降。LDH作為一類糖酵解酶，其通常在心肌和骨骼肌及肝腎等細胞中具有廣泛的存在，特別是在紅細胞中的含量十分豐富。本研究兩組患者LDH水平差異不大，原因可能是MM患者的腫瘤細胞量顯著升高，而機體的紅系造血功能受到抑制，最終使得LDH水平變化不大[19-20]。同時，本研究觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對表達量比較，差異無統計學意義（均P > 0.05），提示性別、年齡的差異與MM患者CD269、CD317表達無明顯關系。筆者考慮原因主要可能是CD269、CD317的表達主要與患者的病情及癥狀有關，而性別、年齡的差異并不會直接影響到患者的病情及癥狀，故其差異并不十分明顯。此外，Pearson相關性分析發現，患者骨髓細胞中CD269、CD317相對表達量分別與Hb、β2-MG呈負相關（P < 0.05），且與LDH無明顯相關性（P > 0.05），這也再次證實了MM患者骨髓細胞中CD269、CD317的表達與Hb、β2-MG密切相關，但與LDH無明顯關系。分析原因，主要是因為MM患者機體內的病理變化致使瘤細胞不斷增生，細胞周轉隨之加速，且細胞功能發生變化，最終通過一系列的信號傳導途徑干擾了CD269、CD317的表達及Hb、β2-MG的水平[21]。

綜上所述，MM患者骨髓細胞中CD269、CD317的表達明顯升高，Hb、β2-MG水平明顯降低，且CD269、CD317相對表達量分別與Hb、β2-MG呈負相關，臨床上進一步監測上述四種指標的表達情況，從而更加全面地反映MM患者的實際病情。

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（收稿日期：2018-08-29 本文編輯：王 蕾）