藍墨云班課平臺建設之草履蟲活體觀察方法優選

喬征磊 金志民 劉鑄 田新民 李殿偉 趙杰

【摘要】建設藍墨云班課，就要為平臺提供優質的課程材料，《動物學實驗》中的草履蟲觀察，由于草履蟲的活體難于觀察，因此很難提供好的素材，本文通過多種草履蟲觀察方法的篩選實驗，最后確定了體積定量法是觀察效果最好的一種方法，值得推廣應用。

【關鍵詞】草履蟲 ?體積定量法

【基金項目】牡丹江師范學院教學改革項目（18-XJ20059和18-XJ20013）資助。

【中圖分類號】G642 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-3089（2019）13-0157-02

要借助于藍墨云班課改進課程教學方法，就必然需要為平臺提供好的素材，以便使學生能提前充滿興趣，提高預習效果和自主學習的主動性。為此需要對一些效果不是很理想的實驗進行探索，以期改進和提高課程效果。

草履蟲屬原生動物門纖毛綱，是大學實驗課程中最常用的單細胞實驗動物的代表，是觀察研究原生動物和單細胞動物的好材料。活體觀察是研究原生動物的一種重要手段，由于其形體微小，需要利用顯微鏡進行觀察，但由于其在水中運動快速往往導致跑出顯微鏡的視野不能夠對其結構和運動方式進行比較全面和細致的觀察。因此尋找一種好的觀察方法成為《動物學實驗》教學過程中很重要的一項研究內容。

目前所使用的《動物學實驗》指導書上一般都是用棉纖維進行固定觀察的，取單層薄棉絮放在載玻片上，滴上草履蟲培養液，蓋片鏡檢，如果草履蟲還快速游動，可用吸水紙在蓋玻片的一端吸去一些水分。這種方法的不足是，棉纖維的量拿捏不準，另外棉纖維不易分開，造成模糊，嚴重影響草履蟲的活體觀察效果。為此，我們對多種可能的方法進行了試驗，以期對草履蟲的活體觀察方法進行優選，為《動物學實驗》教學提供簡單、結構清楚全面的觀察方法。

1.擦鏡紙纖維阻攔法

把擦鏡紙剪成與蓋玻片等大的小方塊，放在載玻片上，再將草履蟲培養液滴到擦鏡紙上（以正好能濕潤鏡紙為宜），然后鏡檢。也可先將草履蟲培養液滴在玻片中央，再覆蓋擦鏡紙，使其充分濕潤后加蓋玻片。

這種方法的優點是鏡紙本身呈細密網絡狀，質地薄而均勻，能較好地限制草履蟲的運動;不足是所加溶液必須適量，稍微多一點都容易因水分多導致限制不了草履蟲的運動，溶液量過少又容易導致草履蟲數量偏少難以找到阻滯住效果好的蟲體。而且和棉花纖維一樣容易因為纖維的阻擋不能夠詳細觀察蟲體的全部結構和自然的運動方式。

2.膠水稀釋法

擠一滴稀釋過的膠水于載玻片，滴一滴草履蟲培養液于困擾劑中，用解剖針攪勻，再蓋上蓋玻片，然后顯微鏡下觀察。此法操作簡便，蟲體運動極其緩慢甚至停滯不前，不僅能清楚地看清它的內部結構，如伸縮泡和收集管，而且還能較清晰地看見其纖毛有節律的擺動。另外由于膠水使得草履蟲內外滲透壓變化較大所以引起草履蟲較高頻率地滲透壓調節，從而使得刺絲泡和收集管調節滲透壓的觀察效果更好。

此法的不足在于膠水要稀釋，否則極易導致草履蟲失水變形和死亡，另外膠水稀釋程度難把握，因此這種方法需要反復多次嘗試，而且稀釋膠水易變質，不利于后續細胞核染色或刺絲泡釋放實驗。

3.玉米面糊法

將6 g細粒玉米面放入100 ml水中，攪拌均勻，加熱至沸騰后，繼續加熱15 min，加熱過程中必須有人觀察，如發生溢出現象要及時處理;如果水分蒸發過多，玉米糊過稠，要注意添加水分使其始終保持100ml溶液。待混合物冷卻至室溫后，將草履蟲培養液和玉米面糊按1：1—1：2混合均勻，即可進行觀察。

玉米糊粘稠度較大，草履蟲的運動受阻，運動速度明顯減慢。可以觀察到草履蟲的整體外形。玉米面糊中含有大量營養物質，可觀察到草履蟲吞食營養物質顆粒的過程。因此可以容易觀察到草履蟲的攝食，還可以觀察到刺絲泡。由于玉米面顆粒較大 ，還可以觀察到草履蟲通過狹窄縫隙時身體的變形現象。

4.體積定量法

用移液槍加入一定量的草履蟲培養液于載玻片上，然后蓋片鏡檢。這種觀察方法的優點是，由于幾乎沒有人為加入雜質的影響，形態結構觀察特別清楚，但同時由于水量有限，短時間后即容易失水變形甚至致死，尤其顯微鏡電源和光闌開的過大時容易導致快速失水。如果要進行較長時間的觀察，改善的方法是從蓋玻片一側不斷補充草履蟲培養液。由于蓋玻片有不同規格的，因此對應地溶液量也有所不同。常見的18×18mm2、20×20mm2、22×22mm2及24×24mm2等不同規格的蓋玻片的最適草履蟲培養液體積分別為6.5～7.0uL、10～11uL、11～12uL和 14uL。當然溶液越多草履蟲數目越多越便于找到效果更好的，因此建議使用尺寸較大的蓋玻片進行觀察。

綜上所述，棉纖維法作為一種傳統的訓練方法，不能夠使觀察者觀察到清晰完整的草履蟲結構，效果最好的是體積定量法，它具有簡單、方便、準確和迅速的優點，能使觀察者在短時間內觀察到完整的草履蟲結構以及運動方式，但滲透壓的調節不如膠水稀釋法;取食和排泄過程的效果不如玉米面糊法，總體而言體積定量法是最值得推廣應用的一種草履蟲活體觀察法，是目前常用的草履蟲活體觀察法中最優的一種。

作者簡介：

喬征磊（1980.9-），男，漢族，講師，博士，主要從事動物學的教學和科研工作。