紫外分光光度法測定半枝蓮中總黃酮的不確定度評定

李運華 王曉彬

【摘 要】目的：以野黃芩苷對照品，以甲醇為空白，用紫外分光光度法，在335mn的波長處分別測定半枝蓮中總黃酮含量。通過對操作各環節不確定度分量進行分析量化，評定半枝蓮中總黃酮的不確定度[1]。

【關鍵詞】紫外分光光度法;總黃酮;不確定度評定

【中圖分類號】R282.2【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）11-0-01

1 儀器與試劑

1.1 儀器：紫外-可見光分光光度計，珀金埃爾默儀器公司 Lambda850型

1.2 黃芩苷對照品：中國食品藥品檢定研究院，編號：110842-201508.

2 實驗方法和條件

2.1 實驗操作

2.1.1 供試品溶液的制備：取約lg的半枝蓮粉末（過三號篩）精密稱定，放在索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）提取至無色，棄去醚液，葯渣揮去石油醚，加甲醇繼續提取至無色，轉移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 對照品溶液制備：取適量野黃芩苷精密稱定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。

2.1.3 標準曲線的制備：精密量取對照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾。以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法，在335mn的波長處分別測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2.2 實驗條件：實驗室溫度（20±5℃）;采用分度為0.0001g天平稱量。

3 結果與分析

3.1 被測量的數學模型Xi=

式中：Xi為供試品中總黃酮的含量/（%）; 為測定用樣液中總黃酮的質量/mg，m為供試品質量/g;V1為測定用樣液體積，V0為供試品處理液總體積/mL.

3.2 不確定度來源 從測量過程和被測量的數學模型分析，半枝蓮中總黃酮含量測定的不確定度主要來源于測量用樣液中總黃酮的含量、對照品的純度、對照品、供試品的稱量，測定用樣液移取體積、溫度效應和重復性等因素。其中測量用樣液中總黃酮質量的不確定度包括兩個方面：一標準曲線擬合的不確定度;二是配置對照品溶液產生的不確定度，這其中又包括由對照品引入的不確定度、稱量產生的不確定度、對照品溶液配制過程中量器校準產生的不確定度。

3.3 分析和量化不確定度

3.3.1 測量用樣液中總黃酮質量的不確定度

3.3.1.1 標準曲線擬合的不確定度

標準曲線擬合的標準不確定度是通過對標準系列重復兩次測量獲得的。

根據結果，用最小二乘法擬合標準曲線，得回歸方程y=0.0253x-0.0038，相關系數r=0.9994，其中設曲線斜率為0.0253，截距A=0.0038，對供試品樣液中總黃酮含量進行2次測定，結果分別為12.2g/100g和12.4g/100g，平均值為12.3g/100g。測定樣液質量濃度C的不確定度：

3.3.2對照品溶液的配制不確定度

3.3.2.1對照品稱量的Ws（mg）的不確定度分量u（Ws）

野黃芩苷對照品稱量為Ws10.00mg，試驗用天平由校準證書查到其最大允差為±0.2%，則稱量最大差值為0.2mg，換算成標準不確定度為=0.1155（mg）;因為稱重2次，1次為皮重，1次為總重，則u（Ws）=（2×0.11552）=0.1633（mg），其相對不確定度為=1.63×10-2

3.3.2.2 對照品純度Ps（%）的不確定度分量u（Ps）%

野黃芩苷對照品純度P=100.0%±1.0%計算。按矩形分布計算標準不確定度u（Ps）為：u（Ps）==0.005774

3.3.2.3 對照品溶液及取液體積的不確定度u（Vs）

對照品溶液配制需要用1個容量瓶（25ml），根據JJG196-2006常用的玻璃容量25ml容量瓶的容量允許誤差為±0.03ml，按矩形分布k=，0.03/=0.017ml，溫度變化引入的不確定度：溫差為5℃，水的膨脹系數為2.1×10-4℃-1體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml。兩項分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到25ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V25）=9.1×10-4.

對照品溶液系列配制，需要用到5個25ml容量瓶，它們的容量允許誤差為±0.03ml，按照矩形分布，0.03/=0.017ml。溫度變化引入的不確定度：體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml兩項分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到25ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V25）=9.1×10-4.

移液器引入的不確定度

用0.2-1.0ml移液器移取對照品溶液進行標準溶液的制備，它的容量允許誤差為±0.010ml，按照矩形分布0.010/=0.0058ml（k=3）.溫度變化引入的不確定度=V（2.110-4℃-1×5/ ），其中V為吸取對照品溶液的體積。

移液器引入的合成不確定度為各個體積分量引入的相對不確定度的平方和的平方根，結果為urelV=1.76×10-2

3.3.2.4 由對照品稱量、配置曲線等引入的合成不確定度為=0.0247

3.3.3 由供試品引入的合成不確定度

3.3.3.1 由供試品稱量引入的不確定度

供試品稱量為Ws1.0g，試驗用天平由校準證書查到其最大允差為±0.2%，則稱量最大差值為0.2mg，換算成標準不確定度為=0.1155（mg）;因為稱重2次，1次為皮重，1次為總重，則u（Ws）=（2 0.11552） =0.1633（mg），其相對不確定度為=1.63 10-2

3.3.3.2 供試品制備引入的不確定度

供試品溶液配制需要用到1個100ml的容量瓶和1個50ml，根據JJG196-2006常用的玻璃容量中查到，100ml，50ml容量瓶的容量允許誤差為±0.10ml、±0.05m，按矩形分布k=，0.10/=0.058ml、0.05/=0.029ml，溫度變化引入的不確定度：溫差為5℃，水的膨脹系數為2.1×10-4℃-1體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml。兩項分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到100ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V100）=6.0×10-3，兩項分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到50ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V100）=6.5×10-4。

由供試品制備引入的相對不確定度=6.0×10-3

3.3.3.3 供試品引入的合成不確定度=0.01

3.4 合成不確定度 在整個測試過程中，不確定度來自測量重復性，工作曲線擬合，對照品溶液的配制，溶液定容、移取體積以及供試品稱量等的不確定度。測定結果的不確定度應利用以上各分量的相對不確定度來進行合成。

3.5 擴展不確定度：取包含因子k=2，擴展不確定度=0.054×2×12.3=1.33g/100g

3.6 不確定的報告：半枝蓮中總黃酮的測定含量為（12.3±1.33）g/100g ，k=2

參考文獻

范菊娣，覃容貴，張玨，等.主成分和聚類分析法對不同產地半枝蓮的綜合質量評價[J].2016，（23）：40-44.doi：10.13422/j.cnki.syfjx.2016230040.