紫外分光光度法測定半枝蓮中總黃酮的不確定度評定

李運(yùn)華 王曉彬

【摘 要】目的：以野黃芩苷對照品，以甲醇為空白，用紫外分光光度法，在335mn的波長處分別測定半枝蓮中總黃酮含量。通過對操作各環(huán)節(jié)不確定度分量進(jìn)行分析量化，評定半枝蓮中總黃酮的不確定度[1]。

【關(guān)鍵詞】紫外分光光度法;總黃酮;不確定度評定

【中圖分類號】R282.2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）11-0-01

1 儀器與試劑

1.1 儀器：紫外-可見光分光光度計(jì)，珀金埃爾默儀器公司 Lambda850型

1.2 黃芩苷對照品：中國食品藥品檢定研究院，編號：110842-201508.

2 實(shí)驗(yàn)方法和條件

2.1 實(shí)驗(yàn)操作

2.1.1 供試品溶液的制備：取約lg的半枝蓮粉末（過三號篩）精密稱定，放在索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）提取至無色，棄去醚液，葯渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 對照品溶液制備：取適量野黃芩苷精密稱定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml分別置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾。以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法，在335mn的波長處分別測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2 實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室溫度（20±5℃）;采用分度為0.0001g天平稱量。

3 結(jié)果與分析

3.1 被測量的數(shù)學(xué)模型Xi=

式中：Xi為供試品中總黃酮的含量/（%）; 為測定用樣液中總黃酮的質(zhì)量/mg，m為供試品質(zhì)量/g;V1為測定用樣液體積，V0為供試品處理液總體積/mL.

3.2 不確定度來源 從測量過程和被測量的數(shù)學(xué)模型分析，半枝蓮中總黃酮含量測定的不確定度主要來源于測量用樣液中總黃酮的含量、對照品的純度、對照品、供試品的稱量，測定用樣液移取體積、溫度效應(yīng)和重復(fù)性等因素。其中測量用樣液中總黃酮質(zhì)量的不確定度包括兩個(gè)方面：一標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的不確定度;二是配置對照品溶液產(chǎn)生的不確定度，這其中又包括由對照品引入的不確定度、稱量產(chǎn)生的不確定度、對照品溶液配制過程中量器校準(zhǔn)產(chǎn)生的不確定度。

3.3 分析和量化不確定度

3.3.1 測量用樣液中總黃酮質(zhì)量的不確定度

3.3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的標(biāo)準(zhǔn)不確定度是通過對標(biāo)準(zhǔn)系列重復(fù)兩次測量獲得的。

根據(jù)結(jié)果，用最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=0.0253x-0.0038，相關(guān)系數(shù)r=0.9994，其中設(shè)曲線斜率為0.0253，截距A=0.0038，對供試品樣液中總黃酮含量進(jìn)行2次測定，結(jié)果分別為12.2g/100g和12.4g/100g，平均值為12.3g/100g。測定樣液質(zhì)量濃度C的不確定度：

3.3.2對照品溶液的配制不確定度

3.3.2.1對照品稱量的Ws（mg）的不確定度分量u（Ws）

野黃芩苷對照品稱量為Ws10.00mg，試驗(yàn)用天平由校準(zhǔn)證書查到其最大允差為±0.2%，則稱量最大差值為0.2mg，換算成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為=0.1155（mg）;因?yàn)榉Q重2次，1次為皮重，1次為總重，則u（Ws）=（2×0.11552）=0.1633（mg），其相對不確定度為=1.63×10-2

3.3.2.2 對照品純度Ps（%）的不確定度分量u（Ps）%

野黃芩苷對照品純度P=100.0%±1.0%計(jì)算。按矩形分布計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)不確定度u（Ps）為：u（Ps）==0.005774

3.3.2.3 對照品溶液及取液體積的不確定度u（Vs）

對照品溶液配制需要用1個(gè)容量瓶（25ml），根據(jù)JJG196-2006常用的玻璃容量25ml容量瓶的容量允許誤差為±0.03ml，按矩形分布k=，0.03/=0.017ml，溫度變化引入的不確定度：溫差為5℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml。兩項(xiàng)分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到25ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V25）=9.1×10-4.

對照品溶液系列配制，需要用到5個(gè)25ml容量瓶，它們的容量允許誤差為±0.03ml，按照矩形分布，0.03/=0.017ml。溫度變化引入的不確定度：體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml兩項(xiàng)分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到25ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V25）=9.1×10-4.

移液器引入的不確定度

用0.2-1.0ml移液器移取對照品溶液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，它的容量允許誤差為±0.010ml，按照矩形分布0.010/=0.0058ml（k=3）.溫度變化引入的不確定度=V（2.110-4℃-1×5/ ），其中V為吸取對照品溶液的體積。

移液器引入的合成不確定度為各個(gè)體積分量引入的相對不確定度的平方和的平方根，結(jié)果為urelV=1.76×10-2

3.3.2.4 由對照品稱量、配置曲線等引入的合成不確定度為=0.0247

3.3.3 由供試品引入的合成不確定度

3.3.3.1 由供試品稱量引入的不確定度

供試品稱量為Ws1.0g，試驗(yàn)用天平由校準(zhǔn)證書查到其最大允差為±0.2%，則稱量最大差值為0.2mg，換算成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為=0.1155（mg）;因?yàn)榉Q重2次，1次為皮重，1次為總重，則u（Ws）=（2 0.11552） =0.1633（mg），其相對不確定度為=1.63 10-2

3.3.3.2 供試品制備引入的不確定度

供試品溶液配制需要用到1個(gè)100ml的容量瓶和1個(gè)50ml，根據(jù)JJG196-2006常用的玻璃容量中查到，100ml，50ml容量瓶的容量允許誤差為±0.10ml、±0.05m，按矩形分布k=，0.10/=0.058ml、0.05/=0.029ml，溫度變化引入的不確定度：溫差為5℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1體積變化為25×2.1×10-4℃-1×5=0.0263ml，按矩形分布，0.0263/=0.0152ml。兩項(xiàng)分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到100ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V100）=6.0×10-3，兩項(xiàng)分量不確定度平方和的平方根除以容量瓶體積，得到50ml容量瓶引入的相對不確定度為urel（V100）=6.5×10-4。

由供試品制備引入的相對不確定度=6.0×10-3

3.3.3.3 供試品引入的合成不確定度=0.01

3.4 合成不確定度 在整個(gè)測試過程中，不確定度來自測量重復(fù)性，工作曲線擬合，對照品溶液的配制，溶液定容、移取體積以及供試品稱量等的不確定度。測定結(jié)果的不確定度應(yīng)利用以上各分量的相對不確定度來進(jìn)行合成。

3.5 擴(kuò)展不確定度：取包含因子k=2，擴(kuò)展不確定度=0.054×2×12.3=1.33g/100g

3.6 不確定的報(bào)告：半枝蓮中總黃酮的測定含量為（12.3±1.33）g/100g ，k=2

參考文獻(xiàn)

范菊娣，覃容貴，張玨，等.主成分和聚類分析法對不同產(chǎn)地半枝蓮的綜合質(zhì)量評價(jià)[J].2016，（23）：40-44.doi：10.13422/j.cnki.syfjx.2016230040.