胸腹水細胞塊石蠟包埋聯(lián)合免疫組織化學技術在病理學診斷中的應用價值

杜桂清 王秋紅 鄧桂霞 喬婷婷 聶艷絨 馬丹琪 賈芮

【摘 要】目的：探討細胞塊石蠟包埋及免疫組織化學染色技術在胸腹水細胞病理診斷中的意義。方法：收集有異型細胞的漿膜腔積液71 例， 進行離心涂片、細胞塊切片HE 染色， 并進行CK7、CK20、CDX-2、MOC-31、Calretinin、WT-1、B72.3、ER、PR、Ber-EP4、TTF-1、CA125 等免疫組織化學染色，進行選擇性標記。結果：常規(guī)細胞涂片厚，背景不清晰;離心沉渣包埋切片細胞多而集中，背景清晰，染色鮮艷，并有一定的組織結構，免疫組織化學染色效果較好，陽性定位準確，可靠性高。結論：細胞塊石蠟包埋及免疫組織化學染色技術，能提高胸腹水腫瘤細胞的檢出率，對腫瘤的診斷、鑒別診斷及細胞來源有重要的價值。

【關鍵詞】胸腹水;細胞塊;石蠟包埋;免疫化學染色

【中圖分類號】R730.4【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0019（2019）11-0-02

胸腹水是腫瘤性疾病的常見體征，胸腹水細胞學檢查是臨床最常用的方法，具有簡便、快捷、痛苦小、創(chuàng)傷小等優(yōu)點。通過觀察細胞的大小、形態(tài)及結構變化，可進行定性診斷[1]。對臨床送檢的胸腹水， 國內大部分醫(yī)院采用直接離心涂片法來做出診斷。但在實際應用中，我們發(fā)現(xiàn)直接涂片法存在涂片厚，細胞重疊，結構不清，細胞量少而陽性檢出率低等缺點[2，3]，很難鑒別腫瘤細胞及增生的間皮細胞，并且不能判斷瘤細胞的起源。胸腹水細胞塊可以作為一種相對無創(chuàng)的標本收集方式，切片可以做到背景清晰、細胞結構完整、厚薄均勻，細胞塊可以長久保存、反復切片，并且可以進行免疫組化染色，進一步確定腫瘤細胞的類型和來源，為臨床診療提供客觀依據(jù)[4、5]。

1 材料與方法

1.1 樣本 收集我院臨床科室送檢的胸腹水共71例。其中胸水47 例，腹水24 例。男性33例，女性38例。年齡在45-81歲。臨床明確有器官占位20例，胸腹水原因待查51例。

1.2 試劑 所有的免疫組化試劑、即用型試劑盒及DAB 顯色劑均為美國DaKO試劑，使用DaKO全制動免疫組化儀進行實驗步驟操作。

1.3 方法 （1）收集患者胸腹水，依據(jù)胸腹水的濃度取30-90ml 進行離心（2000r/min，5min）; （2）離心后棄去上清液，取少量沉淀做細胞涂片;（3） 在其余的沉淀中加入95%的乙醇至30ml，震蕩2min 后離心（2000r/min，5min）;（4）離心后棄去上清液，加入10%福爾馬林液體10ml固定;（5）靜置2-3h，棄去福爾馬林液體，將沉淀用紙包裹同其他組織塊一起使用全制動脫水機進行常規(guī)處理。

2 結果

對71例疑為惡性胸腹水標本進行離心沉渣包埋及借助免疫組織化學染色，診斷結果：71例疑為惡性胸腹水中病變來源于肺癌為10例，來源于卵巢及輸卵管的腺癌為6例，來源于消化道的腺癌為7例，來源于乳腺癌為1例，未明確原發(fā)灶的惡性腫瘤為4例，反應性間皮細胞增生為40例。細胞塊切片常規(guī)HE 染色，切片中細胞豐富密集，染色分明，細胞結構清晰，具有一定的組織結構。免疫組織化學染色陽性信號定位準確，對比度好，背景干凈。

討論

胸腹水是臨床上常見的一種體征，臨床常需要在胸腹水中找脫落的癌細胞以確定有無腫瘤性病變及明確腫瘤性質[6]。常規(guī)細胞涂片所收集的細胞數(shù)量少，常有大量紅細胞，炎性滲出物及黏液混在一起，造成背景不清晰、細胞多層重疊，給診斷造成非常大的困難。而胸腹水沉渣經(jīng)福爾馬林固定后，能像組織塊一樣進行脫水，包埋切片[7、8]。具備以下優(yōu)點：操作簡單，不需要過多的儀器。②可以收集所有的細胞，包埋在同一平面上，從而使碎小組織能完整切出，利于讀片。③胸腹水制成的蠟塊可以反復切片，便于會診，長期保存[2]。④可以進行免疫細胞化學染色，對腫瘤的類型及來源進行準確的診斷與鑒別診斷。⑤通過分子標記物的標記，可以指導臨床治療方案的調整，對腫瘤的預后進行評估。⑥隨著腫瘤個體化時代的到來，細胞塊還可以進行分子檢測，從而實施分子靶向治療以及耐藥基因的檢測。

同時，用細胞塊做免疫細胞化學染色，能做連續(xù)切片，可以多種抗體組合運用或對某一特定細胞的比較觀察， 以滿足診斷的需要及對其組織來源進行判別; 如Calretinin、WT-1陽性多提示為增生的間皮細胞， MOC-31、B72.3、Ber-EP4陽性多提示胸腹水中見轉移癌，在此基礎上，結合臨床病史選擇性做免疫組化，如CK7、TTF-1陽性多提示腫瘤細胞來源于肺，CK7、CA125 陽性多提示腫瘤細胞來源于卵巢，CDX2、CK20 陽性提示腫瘤細胞來源于胃腸道;但要說明的是，抗體的組織特異性并非絕對， 多種抗體聯(lián)合進行免疫細胞化學染色并設立對照有助于克服某些抗體表達意義不明確造成的困惑。

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