莫沙必利用于小鼠試驗最佳劑量篩選

陳匯鑫 ,侯權書 ,梁文斌 ,呂元龍 ,唐建華

(1.重慶市梁平區畜牧漁業發展中心,重慶榮昌405200 ;2.西南大學動物科學學院,重慶榮昌 402460)

莫沙必利是一種高效選擇性5-HT4受體激動劑,目前研究顯示,該藥物促胃腸動力作用明顯且安全性較高[1],在小鼠胃腸道動力比較試驗中常作為陽性對照組使用,然而目前在各個試驗中的使用劑量不盡相同,而常見的使用劑量有20 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、1.875 mg/kg·bw,本次試驗旨在通過常用促胃腸道動力藥物試驗方法來篩選莫沙必利的最佳使用劑量,為對比研究其他促胃腸動力藥物作用大小及今后研發新型促胃腸動力藥物后探究其作用大小提供一個可參考的莫沙必利使用劑量。

1 試驗材料

1.1 藥品 枸櫞酸莫沙必利(新絡納,成都康弘藥業集團股份有限公司,國藥準字H20031110,規格:5 mg×20 片);復方地芬諾酯片(常州康普藥業有限公司,國藥準字H32022716,規格:2.5 mg 鹽酸地芬諾酯/片);阿拉伯樹脂粉(成都市科龍化工試劑廠);活性炭粉末(成都市科龍化工試劑廠)。

1.2 動物 清潔級昆明系小鼠(由西南大學動物科學學院實驗動物中心提供),體重18～25 g,雌雄各半。

1.3 試劑配制 所有試劑現配現用。枸櫞酸莫沙必利混懸液:枸櫞酸莫沙必利片碾碎后精密稱量,置于容量瓶中,用水稀釋后超聲10 min,待溶液冷卻后用檸檬酸調pH 值至3.0～4.5,配制為相當于2 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw、20 mg/kg·bw 對小鼠進行灌胃,灌胃體積為20 mL/kg·bw;復方地芬諾酯混懸液:復方地芬諾酯片置于容量瓶中,用水稀釋后超聲10 min,配制為相當于20 mg/kg·bw 對小鼠進行灌胃,灌胃體積為20 mL/kg·bw;活性炭混懸液:將100 g 阿拉伯樹脂粉溶于400 mL 蒸餾水,配制25%的透明溶液,添加活性炭25 g 后邊攪拌邊煮沸3 次,室溫后定容到500 mL,4 ℃冷藏,臨用前混勻,相當于30 mg/kg·bw 對小鼠進行灌胃。

2 試驗分組及方法

2.1 分組

2.1.1 小鼠糞便試驗 60 只小鼠隨機分為6 組,模型空白組(I),藥物空白組(II),試驗組分為2 mg/kg·bw 莫沙必利組(III),5 mg/kg·bw 莫沙必利組(IV),10 mg/kg·bw 莫沙必利組(V),20 mg/kg·bw 莫沙必利組(VI)。

2.1.2 小腸推進試驗 60 只小鼠隨機分為6 組,空白組(A),陽性對照組(B),試驗組分為2 mg/kg·bw莫沙必利組(C),5 mg/kg·bw 莫沙必利組(D),10 mg/kg·bw莫沙必利組(E),20 mg/kg·bw 莫沙必利組(F)。

2.2 方法

2.2.1 小鼠糞便試驗 60 只小鼠試驗前16 h 禁食不禁水,均單籠飼喂,每天定時稱量小鼠體重,試驗組及藥物空白組用復方地芬諾酯混懸液灌胃,空白組給予20 mL/kg·bw 的蒸餾水灌胃,30 min 后各組用活性炭混懸液灌胃,活性炭混懸液灌胃后正常飼喂。記錄首粒黑便時間、6 h 排便數及重量。6 h糞便情況記錄后用復方地芬諾酯混懸液及蒸餾水進行第2 次灌胃,灌胃后禁食不禁水,并于24 h 后記錄排便量及重量。重復以上試驗步驟,連續3 d。第4 天試驗組灌服不同濃度的莫沙必利混懸液,藥物空白組及模型空白組灌服蒸餾水,灌胃30 min 后試驗組及藥物空白組灌服地芬諾酯混懸液,模型空白組灌服蒸餾水,再間隔30 min 全組灌服活性炭混懸液,此后正常飼喂6 h,并記錄首粒黑便時間,6 h排便量及重量,6 h糞便情況記錄后進行第2 次灌胃,試驗組灌服不同濃度莫沙必利,藥物空白組及模型空白組灌服蒸餾水,灌胃30 min 后試驗組及藥物空白組用復方地芬諾酯混懸液灌胃,模型空白組灌服蒸餾水,灌胃后禁食不禁水,并于24 h 后記錄排便量及重量。以上步驟重復2 d。

2.2.2 小腸推進試驗 60 只小鼠試驗前24 h 禁食不禁水,試驗時空白組灌服蒸餾水,陽性對照組灌服20 mg/kg·bw 地芬諾酯混懸液,試驗組灌服不同濃度的莫沙必利混懸液。灌胃30 min 后各組灌服活性炭混懸液,灌胃20 min 后剖檢。記錄小腸全長及墨汁推進長度,計算出墨汁推進率(墨汁推進率=推進長度/小腸全長×100%)。

3 統計學分析

本文所有數據均采用SPSS 公司開發的SPSS 20.0 統計分析軟件進行分析處理,計量資料以()表示,采用單因素方差分析,顯著水平F=0.05。

4 結果

4.1 糞便試驗

4.1.1 建造便秘模型 結果見表1。

4.1.2 不同濃度莫沙必利灌胃 結果見表2。

表1 建造便秘模型小鼠糞便情況

表2 莫沙必利灌胃后小鼠糞便情況

3.3 小腸推進試驗 結果見表3。

表3 小腸推進率

4 分析

從以上數據可以看出,2 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw 莫沙必利對小鼠腸道動力作用明顯,均表現為促進作用,而地芬諾酯對腸道動力也有著明顯的抑制作用。試驗中,20 mg/kg·bw 莫沙必利組無論是糞便試驗還是小腸推進試驗都表現為對腸道作用不明顯,其具體機制暫不明確。2 mg/kg·bw 及5 mg/kg·bw 莫沙必利在糞便試驗中與模型空白組相比較,小鼠首粒黑便時間以及排便量均有影響,但其作用效果與10 mg/kg·bw 莫沙必利組相比卻不明顯,而且在小腸推進試驗中與空白組差異均表現為不顯著,故這兩個劑量不適用于胃腸道動力比較試驗。

小腸推進率試驗中10 mg/kg·bw 莫沙必利組與空白組比較有顯著差異(P<0.05);糞便試驗中,10 mg/kg·bw 莫沙必利組與藥物空白組相比各項指標差異均為極顯著(P<0.01),而且與模型空白組相比較除首粒黑便時間表現出極顯著外(P<0.01),其余指標均表現為不顯著,說明莫沙必利對腸道動力功能作用良好,同時,此結果與其余劑量組相比都較有著明顯優勢。

綜上所述,小鼠試驗用莫沙必利劑量宜選用10 mg/kg·bw。

5 討論

莫沙必利是日本Dainippon 公司開發的第4 代胃動力藥,1998 年12 月在日本上市,該藥物是一種高效選擇性5-HT4 受體激動劑,通過對腸肌層5-HT4 受體的激活,加速神經末梢對乙酰膽堿的釋放,從而促進胃腸道生理機能[2]。在療效方面,莫沙必利的治療作用明顯優于其他幾種促胃腸動力藥物[3],且患者出現不良反應以及復發的概率也顯著較低[4],其安全性得到廣泛認可。

由于大眾生活方式的轉變,胃腸動力不足已經成為一類常見的消化道功能性疾病,然而由于機體調控方式的多樣性,目前對于引起胃腸動力不足的機理還有待進一步研究。而此次試驗也為今后機制的進一步研究打下基礎。