植物激素對麗格海棠組織培養快繁的影響

于非，王禹

(黑龍江省農科院園藝分院，哈爾濱150069)

麗格海棠又名玫瑰海棠，為秋海棠科秋海棠屬的多年生草本花卉[1]，當今世界著名的盆栽花卉之一，具有極高的觀賞及經濟價值。其花色鮮艷，花色品種多,不但是優質園林綠化用花，還是優良的家庭用花。據調查僅黑龍江省海棠每年園林綠化用花在2000萬盆以上,家庭用盆花每年在50萬盆左右。具有較高的觀賞和經濟價值的室內花卉，開發前景極其廣闊[2]。

麗格海棠目前的傳統繁育方式是有性繁殖和無性繁殖。有性繁殖即種子播種，由于麗格海棠是雜交的產物，胚胎發育不完全，所以不宜發芽，開花后結籽少，種子發芽率很低,不能保持母本的優良特性等缺點,一般種子播種不作為商業化生產的繁育手段；無性繁育即莖段扦插，麗格海棠對環境條件要求高，分蘗力弱，莖段扦插成活率與繁殖系數低, 種質退化嚴重[3]，并且長期無性繁殖還會造成病毒在植物體內傳遞累積，嚴重影響花卉產品的質量和產量，很難滿足當前花卉產業發展的要求。本試驗通過植物激素對麗格海棠組織培養快繁體系的研究，篩選出適合麗格海棠組織培養快繁的培養基，為建立麗格海棠再生體系奠定基礎，提高麗格海棠商品化生產效率提供技術支持[4]。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗采用麗格海棠品種巴克斯(Barkos)，采集地點為黑龍江省農業科學院園藝分院智能化溫室。將采集成熟的鮮嫩葉片在自來水下流沖洗20min，置于超凈工作臺中，酒精消毒20s，蒸餾水沖洗兩次，0.1%的升汞消毒5min，蒸餾水沖洗2次，沿著主葉脈方向切成1cm×1cm大小的葉片組織，接種到不定芽分生培養基上。

1.2 培養基試驗

1.2.1 植物激素對麗格海棠不定芽分生的影響。誘導不定芽分生的基礎培養基為MS培養基，附加不同濃度的6-BA、TDZ和2.4-D，共組成9種培養基，MS+1mg/L 6-BA;MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ;MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L TDZ;MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L TDZ; MS+2mg/L 6-BA; MS+3mg/L 6-BA; MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D; MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L 2.4-D; MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L 2.4-D。每種培養基接種40個葉片，4個葉片接種在一瓶內，共計10瓶，4周后觀察其不定芽分生情況。

1.2.2 植物激素對麗格海棠不定芽繼代增殖的影響。將誘導培養基中已分生的不定芽切下接種到繼代增殖培養基中，繼代增殖培養基為MS附加6-BA和NAA，共組成9種培養基，MS+1mg/L 6-BA;MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+1mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA;MS+2mg/L 6-BA;MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA;MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA;MS+mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA; MS+3mg/L 6-BA。4周繼代1次，觀察高度大于2.5cm 的不定芽增殖情況。

1.2.3 植物激素對麗格海棠生根的影響。將高度大于2.5cm的組培苗切下接種到生根培養基中，生根培養基為MS附加IBA和NAA,共組成9種培養基，MS+0.1mg/L IBA; MS+0.1mg/L IBA+0.1mg/L NAA; MS+0.1mg/L IBA+0.3mg/L NAA；MS+0.3mg/L IBA；MS+0.3mg/L IBA+0.1mg/L NAA;MS+0.3mg/L IBA+0.3mg/L NAA;MS+0.5mg/L IBA;MS+0.5mg/L IBA+0.1mg/L NAA; MS+0.5mg/L IBA+0.3mg/L NAA。4周后觀察其生根情況。

1.3 培養條件

試驗采用的培養基均為含30g/L蔗糖，7g/L瓊脂，pH=5.7，培養室溫度26±2℃，光照 1200 lx 左右,每天光照10～12h，4周后調查分生倍數和平均株高。生根培養2周后調查生根率等。

2 結果與分析

2.1 適合不定芽分生的植物

本試驗以植物激素6-BA、TDZ和2.4-D作為供試因子，研究了三者對麗格海棠不定芽分生的結合效應。從表1得出,外植體在大部分培養基上7～10天均分生出不定芽，隨著6-BA濃度的升高，不定芽產生速度加快，再生比率也增高，但當6-BA濃度達到3mg/L時，不定芽出現褐化現象，且隨著濃度升高,越來越嚴重；6-BA和TDZ、2.4-D同時使用，TDZ和2.4-D濃度達到0.3mg/L時，不定芽出現褐化現象；隨著TDZ和2.4-D濃度的升高，葉片產生的愈傷越來越多，且不易分化出不定芽。綜合以上因素，最佳不定芽分生的培養基為MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ或MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D。

表1 植物激素對不定芽分生的影響

2.2 適合不定芽繼代增殖的植物激素

本實驗以植物激素6-BA和NAA作為供試因子，研究了二者對麗格海棠不定芽繼代增殖的結合效應。從表2得出,隨著6-BA濃度的增高,不定芽分化速度加快和增殖倍數提高，但當6-BA濃度達到3mg/L時，芽生長勢減弱；隨著NAA濃度的提高易生成根，根生成后不定芽增殖速度減慢，因此，麗格海棠不定芽增殖的最佳培養基為MS+2mg/L 6-BA + 0～0.1mg/L NAA，增殖系數可達5.8。

表2 植物激素對不定芽繼代增殖響

2.3 適合組培苗生根的植物激素

本實驗以植物激素IBA和NAA作為供試因子，研究了二者對麗格海棠組培苗生根的結合效應。從表3得出，IBA濃度的升高對麗格海棠組培苗生根有促進作用，但IBA濃度達到0.3mg/L以上，對組培苗生長有抑制作用，添加0.1mg/L NAA可以促進組培苗生長，但當NAA濃度達到0.3mg/L以上，出現葉片枯萎現象，因此，組培苗生根可選用0.1～0.3mg/L IBA，可添加0.1mg/L NAA促進組培苗生長。

表3 植物激素對組培苗生根的影響

3 結論與討論

麗格海棠組織培養快繁體系最佳的不定芽再生培養基植物激素組合為MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ或MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L 2.4-D，培養4周后再生率可達87.3%；4周后將再生的不定芽從葉片切下，接種到繼代增殖培養基上，最佳的不定芽繼代增殖培養基激素組合為MS+2mg/L 6-BA + 0～0.1 mg/L NAA，增殖系數可達5.8，根據具體需求可繼續進行增殖，每4周繼代一次；將高度為2.5cm以上的組培苗轉接到生根培養基上，最佳的生根培養基激素組合為MS+0.1～0.3mg/L IBA，組培苗生根后且長度達到5cm以上可移栽馴化。

從實驗得出，隨著細胞分裂素濃度的增加，對不定芽再生和增殖均有促進作用，但當濃度超出一定范圍時，對不定芽再生和增殖起到了抑制的作用；高濃度的IBA對麗格海棠組培苗的生根和生長有促進作用，但是濃度越高在促進生根的同時也影響了組培苗的生長，出現黃葉枯萎現象。因此，在生產中應結合不定芽和組培苗生長勢而調節激素濃度。麗格海棠組培苗葉片和莖較脆，在生根時建議切成叢狀，利于生根和馴化。

圖1麗格海棠葉片不定芽再生 圖2麗格海棠不定芽增殖

圖3麗格海棠組培苗生根 圖4麗格海棠組培苗