不同碳氮源對(duì)紫丁香蘑菌絲生長(zhǎng)的對(duì)比研究

崔婉茹，郭普宇，李冰，張洪雨，朱然，范雨婷，薛春梅,2*

(1. 佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江佳木斯154007；2. 佳木斯大學(xué)應(yīng)用微生物研究所，黑龍江佳木斯154007)

紫丁香蘑[Lepistanuda(Bull.：Fr.)Cooke]，又稱紫晶蘑、裸口蘑，屬傘菌目口蘑科大型食用真菌[1-3]，有香氣，含有豐富的營養(yǎng)價(jià)值，具有藥用價(jià)值。紫丁香蘑對(duì)小鼠艾氏癌和肉瘤、陰性菌、革蘭氏陽性菌具有抑制作用[4-6]。本試驗(yàn)從不同碳源、氮源培養(yǎng)基對(duì)紫丁香蘑母種進(jìn)行試驗(yàn)，以得到適合紫丁香蘑菌絲生長(zhǎng)的母種培養(yǎng)基，為制備紫丁香蘑原種提供參考同時(shí)也為節(jié)約資源奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

由佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供試驗(yàn)中所用的紫丁香蘑母種。

1.2 藥品

白糖、可溶性淀粉、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、硫酸鎂(MgSO4)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、維生素B1、馬鈴薯。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化。配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養(yǎng)基，滅菌后，在母種培養(yǎng)基上接菌種，在恒溫 25℃下暗培養(yǎng)，待紫丁香蘑菌絲長(zhǎng)滿后備用。

1.3.2 不同培養(yǎng)基的配制

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：維生素B110mg、蛋白胨3g、瓊脂20g、硫酸鎂(MgSO4)1.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)3g、定容至1000mL。

碳源母種培養(yǎng)基：取6個(gè)三角瓶，各裝入100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別向三角瓶?jī)?nèi)加入麥芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉、白糖、蔗糖、乳糖，可得到不同碳源的母種培養(yǎng)基，分別為麥芽糖母種、葡萄糖母種、可溶性淀粉母種、白糖母種、蔗糖母種、乳糖母種培養(yǎng)基。

氮源母種培養(yǎng)基：取6個(gè)三角瓶，各裝入100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并分別加入酵母膏、硝酸銨、蛋白胨、黃豆粉、硫酸銨、玉米粉，可得到不同氮源的母種培養(yǎng)基，分別為酵母膏母種、硝酸銨母種、蛋白胨母種、黃豆粉母種、硫酸銨母種、玉米粉母種培養(yǎng)基。

1.3.3 培養(yǎng)方法及指標(biāo)觀察。將已接種好的培養(yǎng)皿倒置放入培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)箱的溫度設(shè)定為適合紫丁香蘑生長(zhǎng)的溫度25℃。觀察培養(yǎng)皿中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)狀況，至菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿，定期測(cè)量不同培養(yǎng)皿中菌絲的長(zhǎng)度以及各培養(yǎng)皿中的比較情況，記錄。每天觀察時(shí)要將不同培養(yǎng)基中紫丁香蘑的長(zhǎng)勢(shì)做比較，如果觀察過程中發(fā)現(xiàn)污染，要及時(shí)拿出，以免污染其他培養(yǎng)皿。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對(duì)紫丁香蘑菌絲體生長(zhǎng)的相關(guān)性

2.1.1 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)狀況。分別培養(yǎng)紫丁香蘑于不同的培養(yǎng)基中,觀察不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌落邊緣整齊度、菌絲的長(zhǎng)勢(shì)、密度及菌絲顏色等方面，比較其生長(zhǎng)狀況，記錄數(shù)據(jù)如表1。在麥芽糖培養(yǎng)基中,紫丁香蘑菌落邊緣整齊、粗壯、菌絲稠密、呈白色、生長(zhǎng)狀況較好，其次是在淀粉，葡萄糖培養(yǎng)基中。

表1 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況對(duì)比

2.1.2 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)速度。在不同的碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)速度各不相同，生長(zhǎng)快慢有差異，如表2。

表2 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度對(duì)比

2.1.3 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)時(shí)間及滿皿時(shí)間。在不同的碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)、滿皿時(shí)間各具有較大差異，如表3。紫丁香蘑菌絲在乳糖、葡萄糖培養(yǎng)基上的萌發(fā)時(shí)間為1d，菌絲在其余4種培養(yǎng)基上的萌發(fā)時(shí)間為2d。紫丁香蘑菌絲在乳糖培養(yǎng)基中滿皿時(shí)間最長(zhǎng)，在蔗糖培養(yǎng)基中時(shí)間最短。

表3 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源培養(yǎng)基中萌發(fā)時(shí)間和滿皿時(shí)間

2.2 不同氮源對(duì)紫丁香蘑菌絲體生長(zhǎng)的相關(guān)性

2.2.1 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)狀況。在6種母種培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)紫丁香蘑，觀察紫丁香蘑菌落的疏密程度、菌絲的生長(zhǎng)速度、菌絲的邊緣整齊程度等方面，并記錄數(shù)據(jù)，見表4。紫丁香蘑菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較好，在玉米粉、酵母膏培養(yǎng)基中次之。

表4 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況對(duì)比

2.2.2 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)速度。紫丁香蘑菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中菌絲的長(zhǎng)速不相同，相差較多。菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度最快為0.487cm/d，在硫酸銨培養(yǎng)基中菌絲的生長(zhǎng)速度最慢為0.112 cm/d。如表5。

表5 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度對(duì)比

2.2.3 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)時(shí)間及滿皿時(shí)間。紫丁香蘑菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中的萌發(fā)時(shí)間及滿皿時(shí)間均有顯著差異，在黃豆粉培養(yǎng)基上菌絲的萌發(fā)時(shí)間為3 d，在其余5種母種培養(yǎng)基上的萌發(fā)時(shí)間均為2 d。紫丁香蘑菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中滿皿時(shí)間最短，在硫酸銨培養(yǎng)基中滿皿時(shí)間最長(zhǎng)。如表6。

表6 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中的萌發(fā)時(shí)間和滿皿時(shí)間

3 討論與結(jié)論

紫丁香蘑是一種稀少的、含有豐富的營養(yǎng)價(jià)值、重要的藥用價(jià)值，用途廣泛，可食用的大型真菌[7]。為了充分開發(fā)紫丁香蘑的應(yīng)用價(jià)值，擴(kuò)大產(chǎn)量，降低成本，選育出優(yōu)良的菌種滿足人們的生活需求。本試驗(yàn)從對(duì)母種培養(yǎng)基進(jìn)行碳氮源的篩選，以找到最適紫丁香蘑的生長(zhǎng)條件，從而使其優(yōu)良性狀得以表現(xiàn)。進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，對(duì)于選擇合適的氮源應(yīng)考慮全面，從有機(jī)氮源和無機(jī)氮源方面下手，設(shè)置均衡，從而擴(kuò)大氮源的選擇范圍，在具體操作時(shí)，應(yīng)多設(shè)置幾組重復(fù)實(shí)驗(yàn)，以免后期染菌重做。

從試驗(yàn)結(jié)果可知：在不同碳源培養(yǎng)基試驗(yàn)中，紫丁香蘑菌絲在淀粉、蔗糖、葡萄糖培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況較好。在氮源和碳源交叉試驗(yàn)中紫丁香蘑菌種在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)速最快。在酵母粉-蔗糖-瓊脂、酵母粉-淀粉-瓊脂、酵母粉-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長(zhǎng)狀況較好，菌絲呈現(xiàn)出濃密、粗壯、均一的特征，得出紫丁香蘑對(duì)酵母粉的利用相對(duì)較好。最后，從長(zhǎng)勢(shì)、生長(zhǎng)速度及菌絲均一情況等方面的綜合考慮，我們將適合紫丁香蘑生長(zhǎng)的培養(yǎng)基選為黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基。

在不同氮源培養(yǎng)基試驗(yàn)中，在玉米粉、黃豆粉、酵母膏培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲長(zhǎng)速較快。在氮源和碳源交叉試驗(yàn)中，紫丁香蘑菌種在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)速最快。在黃豆粉-蔗糖-瓊脂、酵母粉-淀粉-瓊脂培養(yǎng)基中紫丁香菌絲生長(zhǎng)情況較好，菌絲呈現(xiàn)出濃密、粗壯、均一的特征，可得出紫丁香蘑對(duì)黃豆粉的利用相對(duì)較好。試驗(yàn)結(jié)果中，菌絲在酵母膏-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基上的長(zhǎng)速最慢，但菌絲生長(zhǎng)狀況較好，其菌絲稠密、可作為菌種保藏的基質(zhì)。在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上紫丁香蘑菌絲長(zhǎng)速最快，用于制備栽培種，但能否表現(xiàn)出良好的產(chǎn)量?jī)?yōu)勢(shì),還有待進(jìn)一步研究。