高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定逐痰丸中4種成分的含量*

魏曉銳，周文禮，劉艷霞，潘彥榮

(許昌市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 許昌 461000)

逐痰丸為禹州中醫(yī)院制劑室的中藥制劑，批準(zhǔn)文號(hào)為Z20121407(許)，由金礞石(煅)、大黃、黃芩、茯苓、枳實(shí)、陳皮、檳榔七味中藥材組成，具有降火逐痰之功效，用于實(shí)熱老痰發(fā)為癲狂、驚悸、咳喘、痰稠、痰多、眩暈、大便秘結(jié)等癥的治療。大黃是逐痰丸的主藥，主要成分為蒽醌類化合物。為了全面、客觀地評(píng)價(jià)逐痰丸的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)逐痰丸中的大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚進(jìn)行了研究，建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定此4種成分含量的方法[1-4]，作為逐痰丸的質(zhì)量控制方法。

1 藥品、試劑與儀器

逐痰丸(批號(hào)180601，180701，180802)與缺大黃陰性樣品均由禹州中醫(yī)院制劑室制備。對(duì)照品大黃酸(批號(hào)110757-201607)、大黃素(批號(hào)110756-201512)、大黃酚(批號(hào)110796-201621)和大黃素甲醚(批號(hào)110758-201415)均購自由中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，德國(guó)默克公司產(chǎn)品；水為自制超純水；其余試劑均為分析純。Waters e2695高效液相色譜儀，美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；MSA225S-000-DU電子天平，德國(guó)賽多利斯公司產(chǎn)品；BK-360C超聲波清洗儀，濟(jì)南巴克超聲波科技(集團(tuán))有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：XSelect CSH C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-1 ml/L磷酸溶液(83∶17)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，進(jìn)樣量10 μL。理論板數(shù)均不低于4 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含大黃酸17.32 μg、大黃素17.02 μg、大黃酚18.21 μg、大黃素甲醚8.46 μg的混合對(duì)照溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取逐痰丸細(xì)粉0.5 g，精密稱定，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，揮去溶劑，加80 mL/L鹽酸溶液10 mL，超聲(功率250 W,頻率40 kHz)處理 3 min，再加三氯甲烷10 mL,加熱回流1 h，放冷，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷振搖提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?0 mL量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

取缺大黃陰性樣品，按2.3項(xiàng)下的制備方法制備缺大黃陰性對(duì)照溶液。精密吸取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺大黃陰性對(duì)照溶液,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：在與對(duì)照品相同保留時(shí)間位置上無干擾。見圖1。

1.大黃酸；2.大黃素；3.大黃酚；4.大黃素甲醚；A.對(duì)照品； B.供試品； C.缺大黃陰性對(duì)照品圖1 逐痰丸的高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對(duì)照品溶液1，4，7，10，13，17，20 μL，進(jìn)行測(cè)定分析。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，分別進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。

表1 逐痰丸中4種成分線性關(guān)系考察結(jié)果

2.6 精密度試驗(yàn)

取混合對(duì)照對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定并計(jì)算大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚色譜峰面積的RSD分別為0.81%、0.76%、0.75%、0.78%。結(jié)果表明：本法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取逐痰丸細(xì)粉(批號(hào)180701)，精密稱取6份，制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚色譜峰的RSD分別為1.26%、1.41%、1.39%、1.23%。結(jié)果表明：本方法具有良好重復(fù)性。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液(批號(hào)180701)，室溫放置，在0，2，4，6，8，10，12 h測(cè)定峰面積。結(jié)果：供試品中大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚色譜峰面積的RSD分別為1.17%、1.36%、1.28%、1.32%。結(jié)果表明：12 h內(nèi)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

2.9 回收率試驗(yàn)

取已知含量的逐痰丸(批號(hào)180701)，精密稱定細(xì)粉6份，每份約0.25 g，分別精密加入已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的對(duì)照品溶液，并按供試品項(xiàng)下方法制備加樣回收供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。回收率計(jì)算結(jié)果見表2。

表2逐痰丸中4種成分的加樣回收率測(cè)定結(jié)果

n=6

2.10 樣品測(cè)定

取3批逐痰丸，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表3。

表33個(gè)批號(hào)的逐痰丸中4種成分含量的測(cè)定結(jié)果

mg·g-1

3 討 論

筆者在實(shí)驗(yàn)過程中，在提取方法研究中對(duì)加熱回流和超聲提取兩種方法進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱回流提取4種成分的含量略高于超聲提取。對(duì)加熱回流提取時(shí)間進(jìn)行了比較，確定以加熱回流提取60 min為宜。逐痰丸中4種蒽醌類成分極性較小且略顯酸性，因此在研究報(bào)道中多采用有機(jī)相比例較大并含有酸的水相為流動(dòng)相[5-6]。本實(shí)驗(yàn)采用了不同比例甲醇、不同體積分?jǐn)?shù)的磷酸水溶液為流動(dòng)相，測(cè)定逐痰丸中4種成分的含量。研究發(fā)現(xiàn)：流動(dòng)相中甲醇比例過大，出峰時(shí)間提前，色譜峰的分離度不佳；磷酸溶液比例稍大時(shí)，出峰時(shí)間推遲而且峰形變寬、拖尾，峰形不佳。當(dāng)以甲醇-1 mL/L磷酸(83∶17)的比例為流動(dòng)相，分離效果為最好，且分析時(shí)間適中，故選擇該配比作為流動(dòng)相組成。

大黃是逐痰丸的主藥。大多數(shù)文獻(xiàn)都是對(duì)大黃中的大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素5種成分進(jìn)行含量研究[7-8]，但在本制劑中，蘆薈大黃素在與對(duì)照品色譜峰相同保留時(shí)間位置上有干擾峰出現(xiàn)，因此未將蘆薈大黃素作為研究指標(biāo)。

采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定逐痰丸中4種成分的含量，方法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于逐痰丸的定量控制。