豬瘟的實驗室診斷及抗體監測

高沖 張平

摘 要 豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種具有高度傳染性的疫病，對養豬業危害極大，我國將其列為一類動物傳染病。近年來，豬瘟的非典型臨床表現和病理變化越來越常見，給該病的臨床診斷及有效防控帶來了難度。本文通過對豬瘟的實驗室診斷及抗體檢測技術進行簡要綜述，以期為做好豬瘟的實驗室診斷與抗體監測，加強豬瘟的防控和凈化提供參考。

關鍵詞 豬瘟；實驗室診斷；抗體監測

實驗室檢測技術是畜禽疾病防控的重要手段，準確而快速的診斷是畜禽疾病控制的前提。豬瘟檢測技術一直是該病防控研究的一個重要內容。2007年我國農業部發布了《豬瘟防治技術規范》和相關的系列診斷方法用于中國的豬瘟防控。近年來，隨著養殖業規模化、集約化的快速發展，非典型豬瘟流行普遍，與其他豬病混合感染現象日趨嚴重，豬瘟疫苗高密度100%全面免疫帶來了感染豬與免疫豬鑒別診斷的難題，加之非洲豬瘟的傳入，對豬瘟的實驗室診斷及抗體監測提出了更高的要求。近年來，隨著病毒學、組織培養技術、生物化學技術、單克隆抗體技術和分子生物學技術飛速發展，大大推動了我國豬瘟檢測技術的研發進程。

1 豬瘟病原學診斷技術

常用的豬瘟病原學診斷方法有病毒分離鑒定和實驗動物法、雞新城疫病毒強化實驗、免疫熒光實驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和分子生物學檢測技術。

ELISA免疫檢測技術是當前應用最廣泛、發展最快的一項免疫檢測技術。豬瘟病毒抗原ELISA檢測方法主要是雙抗體夾心ELISA，也稱抗原捕獲ELISA（AC-ELISA），該方法優點是操作簡單、自動化程度高、可做到高通量檢測大分子抗原，缺點是該方法只對強毒檢測效果良好，但對弱毒的監測不敏感。

隨著分子生物學的迅速發展，豬瘟病毒核酸檢測靈敏度呈現數量級的提高，RTPCR、RT-nPCR、熒光定量RT-PCR、RT-LAMP等多種分子生物學的檢測方法為豬瘟病毒的臨床快速診斷、基層場地實時便捷診斷、實驗室檢測、流行病學調查及野毒株和疫苗株的鑒別診斷提供了強有力的支持。其中熒光定量RT-PCR方法是在普通RT-PCR的基礎上引入熒光染料，通過熒光PCR儀進行RT-PCR擴增，檢測樣品可以使組織病料也可以是血液樣品。該方法因敏感性高、全封閉反應的優勢，有效解決了RT-PCR方法容易漏檢以及RT-LAMP方法容易污染的問題，并且實現了對病毒含量的定量檢測，是目前對豬瘟病毒疑似感染病例進行確診的最合適的方法。

2 豬瘟抗體監測技術

合理、有效的免疫程序是提高群體免疫水平的保證，因此抗體水平的監測是評價疫苗免疫效果的重要技術手段。常用的豬瘟抗體監測方法有免疫熒光抗體中和試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、豬瘟正向間接血凝試驗（IHA）。

近年來隨著免疫學、標記技術、分子生物學技術以及有關新型技術的發展，ELISA檢測技術取得了突破性進展，已發展出間接ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA、競爭ELISA、斑點ELISA和PPA-ELISA等，這些方法均已被用于豬瘟抗體的檢測，而其中豬瘟病毒間接ELISA和阻斷ELISA應用最為廣泛，也是國際貿易指定的豬瘟抗體確診方法。同時一些新型檢測技術如疫芯片技術何熒光微球技術用于豬瘟抗體診斷的研究已經顯示出良好的勢頭，開發這類技術用于豬瘟抗體的鑒別診斷具有良好的應用前景。

豬瘟正向間接血凝試驗是利用CSFV致敏紅細胞，在適宜的電解質存在的條件下，進行抗原抗體反應，最終根據紅細胞的凝集判斷結果。該方法由于操作簡單，不需要特殊檢測儀器，肉眼即可判定結果，目前仍廣泛應用于基層和技術落后地區，缺點是受主觀因素影響極大且重復性差。

間接ELISA是在已知抗原包被板中加入稀釋待檢血清，反應后加入HRPO標記的葡萄球菌蛋白A或其他可與抗體結合物質，加入底物顯色，酶標儀讀數后判定結果。該方法優點是敏感性高，可用于大批量檢測；缺點是非特異性強，各試劑盒標準不一致，相關性差。

3 小結與展望

豬瘟目前仍是嚴重危害養殖業健康發展的疾病，采用正向間接血凝試驗和ELISA對豬瘟疫苗免疫效果進行檢測，采用熒光定量RT-PCR方法對豬瘟病毒感染的疑似病例進行確診是豬瘟防控和凈化的關鍵。雖然我國豬瘟檢測技術已經實現了與國際的接軌，但相信隨著獸醫診斷技術的不斷發展和完善，探索高通量自動化的檢測技術如生物芯片技術仍將是今后研究的熱點。

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