實時熒光定量PCR檢測對結核的診斷價值

陳啟斌

（云南省昭通市第一人民醫院檢驗科 云南 昭通 657000）

在我國當前臨床中，對結核病患者的早期臨床診斷，所主要使用的方法以及病原菌的陽性診斷率存在較大不同。實時熒光定量檢驗診斷方法，整體操作相對較為簡單，且具備較高的靈敏度[1]。由此本次研究回顧性分析本院80例結核病患者，探討實時熒光定量PCR檢測診斷結核病患者臨床價值。現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析于2018年1月—12月期間本院收治的80例結核病患者作為本次研究對象，所有患者的年齡均為22～65歲，平均年齡為（45.29±3.24）歲，包括48例男性患者和32例女性患者，所有患者的病程均為0.3個月～8個月，平均病程為（3.5±0.8）個月。所有納入本次研究的患者均符合結核病的臨床診斷標準，且排除存在心臟、肝腎系統類重要器官病癥的患者。

1.2 方法

對患者行實時熒光定量檢查以及涂片抗酸染色法檢查。

實時熒光定量檢驗方法：首先完成對患者DNA的提取，使用醫用試管將患者的痰液標本收集之后，在標本中加入濃度為4%的NaOH，搖晃試管直至均勻放置常溫下20min。等待患者的痰液標本產生了相應的液化，將1ml的混合液完成5min的離心處理，之后去除上清液，將離心管內部的沉淀物質取出。之后在其中加入1ml的生理鹽水完成5Min的再次離心，將沉淀物取出之后，將其中加入50l的DNA提取液，搖晃均勻置于100℃環境中10min，再次完成5min的離心，放置零下20℃待檢測。

其次就是完成PCR檢測，通過取出如上等同的患者痰液樣品，完成上清液去除之后，添加2l置于PCR反應管內部，完成1min的離心。將其放置于儀器的樣品槽內部，處于93℃置于2min，處于55℃以下至45s，然后置于65℃以下1min，來回循環10次。將其放置于儀器的樣品槽內部，在93℃以下放置30s至55℃以下45s時間，來回循環30次。完成陰性質控品的陽性定量參考，通過依照FQ-PCR的軟件闕值，從中得出呈現對比增長的數值擴增曲線。如果該條曲線的Ct數值在36以下即為陽性，反之如果超出40即為陰性。如果曲線Ct數值處于36～40之間，則完成重復檢測之后仍然處于36～40之間，那么判斷結果是陰性。

涂片抗酸染色法檢查：通過將患者的痰液標本涂片進行收集之后，等待其干燥后固定實施Z-N染色，之后靜待染色結果。陰性片標準為：必須瀏覽300個視野，未檢出抗酸桿菌。

1.3 統計學方法

通過使用SPSS18.0軟件統計分析，通過使用χ2檢驗，以樣本值的P＜0.05代表存在顯著差異，具有統計學意義。

2.結果

通過對患者行涂片抗酸染色法檢測，陽性檢測共計為33例41.25%，對患者行實時熒光定量檢驗，陽性檢測共計為69例86.25%，實時熒光定量檢驗診斷方法檢驗率，相較涂片抗酸染色法檢測明顯較高（P＜0.05）。并且實時熒光定量PCR檢測診斷方法的靈敏度診斷率達到了76例95.00%，而涂片抗酸染色法檢測靈敏度則僅為68例85.00%，靈敏度診斷率同樣存在顯著差異（P＜0.05），見表。

表 患者檢測指標對比相較[n（%）]

3.討論

結核病在當前臨床醫學中屬于一種，由于患者發聲結核分枝桿菌所誘發的病癥，該病屬于傳染性疾病，尤為常見的病癥就是肺結核病。該病主要的傳染途徑就是呼吸道感染，通常以唾液、飛沫的傳染方式尤為常見。在我國當前主要是依照患者的既往病史、影像學檢查以及實驗室檢查等方法[2-3]，完成對該病的臨床綜合性判斷。實驗室的具體檢查方法相對較多，可以通過使用痰標本培養、痰液涂片抗酸染色法以及本次研究所使用的實時熒光定量PCR檢測診斷方法。而實時熒光定量PCR檢測診斷方法，是現如今臨床中所新興的一種診斷方法，具備了較為簡單的手術操作特點，同時還能夠確保診斷方法的高效性。通常要想完成這一實驗過程，往往需要在3h之內就可以全部完成，很大程度的將患者的實驗室檢查所耗費時間有所減短，提高了整體的診斷效率。

綜上所述，結合本次研究結果可知：通過對結核病患者行實時熒光定量檢驗方法診斷，可以取得顯著的診斷率，具備較高的靈敏性和特異度，可以及早為結核病患者的早期治療提供臨床依據，在一定程度上對患者的治療預后起到直接影響，可以在臨床中推廣應用。