復方丹七郁膠囊質量標準及其穩定性研究*

譚本仁，鄭錦坤，徐曉梅，劉宴林，郭基燕

（1．汕頭大學醫學院附屬粵北人民醫院，廣東 韶關 512026；2．廣東省韶關市食品藥品檢驗所，廣東 韶關 512028）

復方丹七郁膠囊根據民間老中醫臨床多年應用的驗方及傳統中醫藥理論研制的中藥復方新制劑，以丹參、三七、郁金為主藥，配以川芎、澤瀉、石菖蒲、甘草等多種中藥組方，具有補肝腎、活血化瘀、調血脂、抗動脈粥樣硬化的功效。丹參有效成分主要有丹參酮、隱丹參酮、丹參酮ⅡA等脂溶性成分[1-2]，以及丹酚酸A，B，C，D，E和丹參素等水溶性成分，其中丹酚酸B含量最高，是丹參發揮療效作用的主要成分[3-5]。本研究中以薄層色譜（TLC）法對復方丹七郁膠囊中丹參主要成分丹參酮ⅡA和三七主要成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1等進行定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法測定復方丹七郁膠囊中丹酚酸B含量[6]，并全面考察其制劑穩定性，為控制復方丹七郁膠囊的藥品質量提供科學依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-2010C型高效液相色譜儀（日本島津公司）；UV-2450型紫外分光光度儀（日本島津公司）；HT-300BQ型數控超聲波清洗器（濟寧恒通超聲電子設備有限公司）。

1．2 試藥

三七皂苷R1對照品（北京索萊寶科技有限公司，批號為110745-201318）；人參皂苷Rg1對照品（批號為110703-201530），人參皂苷Rb1對照品（批號為110704-201424）均由德思特生物有限公司提供；丹參酮ⅡA對照品（北京萬佳首化有限公司，批號為110766-201520）；丹酚酸B對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111562-201313，純度為97．0%）；復方丹七郁膠囊（醫院制劑，批號分別為20150903，20150909，20150923）。硅膠G（供薄層層析用，青島海洋化工廠分廠）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 薄層色譜鑒別

丹參：取復方丹七郁膠囊內容物1 g，精密稱定，溶于70%甲醇10 mL，超聲處理0．5 h，濾過，作為供試品溶液；另取丹參酮ⅡA對照品適量，加乙酸乙酯制成質量濃度為1 g／L的對照品溶液。照TLC法，精密吸取供試品溶液、對照品溶液各4μL，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，1%香草醛硫酸溶液為顯色劑，在110℃加熱數分鐘。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯橙紅色斑點。詳見圖1。

三七：取三七藥材0．5 g，精密稱定，溶于甲醇5 mL，超聲處理15 min，取上清液作為三七對照藥材溶液；另取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品各適量，精密稱定，分別加甲醇制成質量濃度為1 g／L的對照品溶液。照TLC法，精密吸取供試品溶液、三七對照藥材溶液、3種對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-無水乙醇-水（70∶45∶6．5，V∶V∶V）為展開劑，硫酸乙醇溶液（1→10）為顯色劑，在110℃加熱數分鐘。供試品溶液色譜中，在與三七對照藥材溶液色譜和3種對照品溶液色譜相應位置上，日光燈下檢視顯粉紅色斑點，紫外燈（365 nm）下檢視顯黃色斑點。詳見圖2。

2．2 含量測定

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；進樣量：10μL；流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59，V∶V∶V∶V）；流速：1mL／min；柱溫：30℃；檢測波長：286 nm。

2．2．2 溶液制備

圖1 丹參薄層色譜圖

圖2 三七薄層色譜圖

取丹酚酸B對照品10．2 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，并超聲處理0．5 h，取出，放冷，并稀釋至刻度，得質量濃度為0．2 g／L的對照品溶液。取復方丹七郁膠囊內容物約1g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇適量，超聲0．5 h，取出，放冷，并稀釋至刻度，用0．45μm微孔濾膜濾過，即為供試品溶液。根據復方丹七郁膠囊處方比例制成缺丹參的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2．2．3 方法學考察

線性關系考察：精密量取0．5，1．0，1．5，2．0，2．5 mL丹酚酸B對照品溶液分別置于10 mL容量瓶中，配制成系列對照品溶液，精密吸取各10μL，按擬訂色譜條件進樣測定。以進樣質量濃度（X）為橫坐標、丹酚酸B峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=3 540．4X-2 360．2，r=0．999 2（n=5）。結果表明，丹酚酸B質量濃度在9．94～49．71μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

專屬性試驗：精密吸取陰性對照溶液適量，按擬訂色譜條件進樣測定，結果在與丹酚酸B對照品溶液出峰位置上無相應色譜峰，表明陰性對照無干擾。色譜圖見圖3。

精密度試驗：取丹酚酸B對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣6次，每次10μL，測定含量。結果的RSD為0．05%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖3 高效液相色譜圖

穩定性試驗：取樣品（批號為20150903）適量，依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時各進樣10μL。結果的RSD為0．75%（n=6），且未出現分層、失水等異常現象，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗：取樣品（批號為20150903）適量，平行制備6份供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進樣10μL。結果丹酚酸B的平均含量為1．75 mg／g，RSD為0．32%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的供試品溶液共6份，分別置10 mL容量瓶中，并精密加入適量的對照品溶液，加70%甲醇定容至刻度，按擬訂色譜條件分別進樣10μL，測定，計算回收率。結果見表1。

2．3 穩定性考察

加速試驗：取3批樣品，按2015年版《中國藥典》原料藥與藥物制劑穩定性指導原則，置溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%條件下貯藏，進行6個月加速試驗，按2．2項下含量測定方法檢測，并考察外觀性狀，結果3批樣品外觀性狀無明顯變化，其丹酚酸B含量見表2。

表1 丹酚酸B加樣回收試驗結果（n=6）

長期試驗：取3批樣品，按2015年版《中國藥典（二部）》原料藥與藥物制劑穩定性指導原則，置溫度（25±2）℃、相對濕度（60±10）%條件下貯藏，進行12個月長期試驗，按2．2項下含量測定方法檢測，并考察外觀性狀。結果3批樣品外觀性狀無明顯變化，其丹酚酸B含量見表2。

表2 各批樣品穩定性試驗結果（mg／g）

3 討論

復方丹七郁膠囊定性鑒別中，參考了2015年版《中國藥典（一部）》丹參和三七項下的TLC法[7]，因斑點分散，均對展開劑進行了調整[8-9]，調整后，斑點圓整、清晰、無干擾，分離度好，易于鑒別。

現代藥理試驗表明，丹參可調血脂，尤其是降低血液中三酰甘油的作用明顯[10-11]。作為復方丹七郁膠囊的主藥，其主要活性物質是丹酚酸B，故本研究中選擇其作為質量控制的指標性成分，通過參考文獻[12-14]，采用HPLC法測定復方丹七郁膠囊中丹酚酸B含量，結果顯示，以甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59，V∶V∶V∶V）為流動相，分離效果最佳，峰形對稱，陰性對照無干擾，能較好地測定其含量。通過復方丹七郁膠囊的穩定性試驗，包括加速試驗和長期試驗，考察了其外觀性狀、含量等指標，均無顯著變化，說明本品質量穩定。

綜上所述，所建立的復方丹七郁膠囊的質量標準，可為復方丹七郁膠囊的質量控制提供參考。