細胞凋亡調控基因p53、bax和 bcl-2在妊娠期肝內膽汁淤積癥患者胎盤組織中的表達

(鄭州市第一人民醫院，河南 鄭州 450000)

妊娠期肝內膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)屬于孕期特有的肝臟疾病，易引發胎兒窘迫、胎死宮內及新生兒窒息等,已被列為高危妊娠之一[1]。臨床積極探究一種可評估ICP疾病嚴重程度的基因標志物尤為重要。長期臨床實踐表明細胞凋亡在妊娠期胎盤組織中發揮重要作用，妊娠晚期胎盤滋養細胞凋亡增多，其在一定程度上利于母兒間營養物質交換，但當細胞凋亡增加所致胎盤損傷超過其代償能力時，將出現胎盤功能減退，其中p53、bax和 bcl-2均為細胞凋亡中重要的調控基因[2]。目前，臨床有關ICP患者胎盤細胞凋亡調控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達意義的研究尚在進一步探索中，本文進一步對此展開臨床對照性研究，結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2015年10月～2017年12月鄭州市第一人民醫院收治的50例妊娠期肝內膽汁淤積癥孕婦為觀察組，同期36例正常妊娠者為對照組。病例患者納入標準：符合《中華婦產科學》有關ICP診斷標準；既往無肝膽疾病史、皮膚病史及其他妊娠期相關并發癥；患者及其家屬對本研究內容目的知曉，自愿簽署書面知情同意書；均為單胎孕產婦。排除標準：妊娠期高血壓疾病及妊娠期糖尿病、膽石癥和急性肝炎等疾病者；合并其他產科并發癥或合并癥；合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具可比性。

1.2 方法

標本采集：兩組孕婦均在胎盤娩出5min內，取胎盤母體面中央組織4 cm3，應避免梗死及鈣化區，采用10%中性緩沖甲醛固定，采用石蠟包埋。實驗方法：胎盤病理切片采用蘇木素伊紅染色，在光鏡下對細胞形態變化進行觀察，p53鼠抗人單克隆抗體、bax鼠抗人單克隆抗體和 bcl-2兔抗人單克隆抗體(均購自福州邁新生物技術有限公司)，免疫組織化學檢測試劑盒為即用型(購自DAKO公司)，采用免疫組織化學EnVision法檢測胎盤細胞凋亡調控基因p53、bax和 bcl-2的蛋白表達情況，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行；采用放射免疫法檢測兩組血清膽汁酸水平。細胞內出現黃色或棕黃色顆粒即為陽性信號，其中p53陽性信號位于細胞核內，bax和bcl陽性信號位于細胞膜及細胞質；采用MIQAS醫學影像定量分析系統及醫學圖像定量分析軟件(上海求為生物科技有限公司提供)測量染色后不同成分在免疫組織化學圖像中顯示陽性區域面積比和光密度值(OD)進行定量分析；每片在顯微鏡25×1O視野下隨機選取三次測量顯色陽性區域面積比以及OD值，計算平均值，檢測免疫組織化學陽性指數=陽性面積比×OD。

1.3 觀察指標

兩組血清膽汁酸水平比較；p53、bax和 bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達情況；p53、bax和 bcl-2與ICP胎盤凋亡發生的相關性分析。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組血清膽汁酸水平比

對照組血清膽汁酸水平(3.59±1.00)μmol/L，觀察組為(29.46±3.76)μmol/L。兩組比較差異有統計學意義(t=40.21，P<0.05)。

2.2 p53、bax和bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達比較

觀察組p53、bax蛋白表達較對照組明顯高，而bcl-2蛋白表達較對照組低，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2；p53、bax和bcl-2在ICP患者胎盤組織中表達情況，見圖1～3。

表2 p53、bax和bcl-2在兩組胎盤組織中的蛋白表達比較

圖1p53在ICP患者胎盤組織中表達

圖2 bax在ICP患者胎盤組織中表達

圖3 bcl-2在ICP患者胎盤組織中表達

2.3 p53、bax和 bcl-2與ICP胎盤凋亡發生的相關性分析

pearson相關系數分析結果顯示，p53、bax與ICP胎盤凋亡發生存在明顯正相關(r=0.29、0.30，P<0.05)，而bcl-2與ICP胎盤凋亡發生存在明顯負相關(r=0.30，P<0.05)，年齡與ICP發生無明顯相關性(P>0.05)。

3 討論

ICP為妊娠中晚期常見并發癥，患者主要表現為皮膚瘙癢和血中膽汁酸增高，易引發胎兒窘迫、死胎、新生兒窒息及死產等多種并發癥，病因多與激素因素、免疫因素、遺傳因素及環境因素等有關，ICP診斷主要依據患者臨床表現、多參數實驗室檢查等手段，同時排除急性病毒性肝炎、膽石癥及妊娠期急性脂肪肝、肝酶升高等[3]。現代醫學研究指出，在ICP病理妊娠期間，因存在高膽汁酸血癥及缺氧等致細胞凋亡因素，常導致胎盤細胞增殖和凋亡間的平衡紊亂，胎盤灌注不足，最終引發胎兒宮內缺氧等；p53、bax和 bcl-2屬于細胞凋亡調控的常見基因[4]，目前有關ICP患者胎盤細胞凋亡調控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達水平及臨床意義的研究并不多見。

本研究發現觀察組膽汁酸水平、p53、bax蛋白表達較對照組高，bcl-2蛋白表達較對照組低，p53、bax與ICP發生存在正相關，而bcl-2與ICP發生存在負相關，年齡與ICP發生無明顯相關性，初步證實了ICP患者胎盤細胞凋亡調控基因p53、bax在胎盤中的表達上調，而bcl-2表達下調，三者在ICP胎盤細胞凋亡中發揮重要作用。其中p53屬于一個轉錄調節因子，其水平升高與細胞DNA損傷程度密切相關，在細胞凋亡調控方面發揮重要作用；Bcl-2為抑制細胞凋亡作用的基因，其在抑制組織細胞凋亡和延長細胞壽命方面積極作用明確；bax基因主要分布在細胞質中，當細胞受到凋亡信號刺激時，bax基因表達隨之增多，構象發生變化，并通過其疏水性羧基端結合在線粒體膜上，從而改變線粒體膜通透性，繼而誘發細胞凋亡[5]。

綜上所述，ICP患者胎盤細胞凋亡調控基因p53、bax和 bcl-2在胎盤中的表達對胎盤細胞凋亡情況影響顯著，臨床上可據此為ICP患者制訂安全、有效的治療方案。