液態奶中的三聚氰胺檢測方法
——液相色譜串聯質譜法

曹愛巧，譚 磊，吳雯娟，黃 婷，羅 燕

(深圳市農產品質量安全檢驗檢測中心，廣東 深圳 518000)

三聚氰胺俗稱密胺、蛋白精，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，常被用作化工原料[1]。三聚氰胺對人體有害，微溶于水，無味，白色單斜晶體，可溶于甲醇、甲醛和乙酸等，不溶于丙酮和醚類，不能作為食品添加劑使用或是用于食品加工。但是，不法商人為了提高食品或飼料檢測中蛋白質含量指標，借助三聚氰胺的高含氮量，把其摻進食品或飼料中[2]。非法添加三聚氰胺會對人的腎臟和膀胱等器官產生有害作用，引發結石[3]。中華人民共和國國家衛生健康委員會、工業和信息化部和農業農村部等五部委聯合發布公告，制定了三聚氰胺在乳與乳制品中的臨時管理限量值，其中規定液態奶(包括原料乳)、奶粉和其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的產品一律不得銷售。含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量為2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的產品一律不得銷售[4-5]。

三聚氰胺在高溫下可能會分解，放出氰化物，在強酸或強堿環境下，還會發生水解。測定三聚氰胺的方法有高效液相色譜法[6-7]、氣相色譜質譜法[8]和高效液相色譜串聯質譜法，高效液相色譜法的靈敏度較低，且無法提供被檢測物的結構信息，一般常作為篩選方法。氣相色譜質譜法和高效液相色譜串聯質譜法能夠進行確證分析。中華人民共和國國家標準GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氧胺檢測方法》規定了高效液相色譜法、氣相色譜質譜法和高效液相色譜串聯質譜法測定三聚氰胺的方法，但均需對提取液進行固相萃取凈化。本文旨在對液態奶中三聚氰胺高效液相色譜串聯質譜法進一步探討。本研究使用二乙胺乙腈水溶液超聲提取液態奶中的三聚氰胺，離心后進行過濾，濾液不需要凈化，直接用氮氣吹干，20%甲醇溶液復溶。消除牛奶基質的影響，增強了抗干擾能力，降低了檢出限和提高了定量重現性。該法較為簡便，縮短了分析時間，降低了成本。

1 試驗部分

稱取2.00 g試樣，置于15 mL刻度試管中，加入7 mL乙腈，渦旋振蕩1 min，加入1 mL二乙胺，用水定容到10 mL，渦旋振蕩1 min，超聲提取15 min，8 000轉/min冷凍離心8 min(4 ℃)，過濾后備用。移取2 mL在80 ℃下氮氣吹干，1 mL的20%甲醇溶液復溶，供液相色譜串聯質譜上機測定。

2 結果與討論

2.1 標準曲線

按方法條件設置儀器參數，配制一系列濃度的標準樣品溶液(0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL和0.5 μg/mL)，待儀器基線穩定后，對系列標準樣品溶液進行測定，繪制標準曲線，其相關系數r=0.998592。

2.2 方法檢出限確定[9]

以空白牛奶樣品為基質，一個陽性添加濃度C(10.0 μg/g)，按照方法進行前處理，進行上機測定，測得信噪比S/N=19.49，可計算檢出限為0.0015 μg/g。計算公式如下：

檢 出 限(Method Detection Limit，MDL)(μg/g)=3C/(S/N)

2.3 方法精密度和回收率試驗

以空白牛奶樣品為基質，進行加標回收試驗，加標濃度分別為0.01 mg/kg、0.05 mg/k和0.2 mg/kg。將加標樣品和空白樣品按方法進行前處理[9]，上機測試，結果見表1、表和表3。

2.4 結論

經過上述試驗驗證，本方法用于液態奶中三聚氰胺殘留的測定，一系列濃度的標準樣品溶液 (0.01 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL和 0.5 μg/mL)的標準曲線相關系數r=0.998592；方法檢出限確定為0.001 5 μg/g，符合標準方法的要求；0.01 mg/kg、0.05 mg/kg和0.2 mg/kg加標試驗變異系數分別為5.07%、2.39%和4.82%，加標試驗回收率范圍分別為88.10%～100.50%、97.86%～104.54%和87.79～102.74%。驗證結果滿足中華人民共和國國家標準SN/T 0001-93的要求，具有較好的精密度和準確度，該方法具有特異性強、前處理簡單等特點，適合液態奶中三聚氰胺的定量測定。