64例Ⅳ期賁門癌組織中KRAS突變與血清CA19-9水平的相關性研究

牛 虹，王留興，田同德

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院中西醫結合腫瘤內科，河南 鄭州 450008；2.鄭州大學第一附屬醫院腫瘤科，河南 鄭州 450052)

中國胃癌發病人數和死亡人數分別占全球胃癌發病和死亡的42.6%和 45.0%，在全球183個國家中發病率居第5位、死亡率居第6位[1]。肺癌發病居全國惡性腫瘤發病的首位，每年發病約78.1萬，其后依次為胃癌、結直腸癌、肝癌和乳腺癌[2]。按死亡人數順位，肺癌居全國惡性腫瘤死亡首位，死亡病例約62.6萬，其后依次為肝癌、胃癌、食管癌和結直腸癌。

RAS基因家族隸屬于一個常見的癌基因家族，可以激活包括經典絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)通路在內的多條信號途徑，分為HRAS、KRAS、NRAS等3個亞型，其中KRAS及下游BRAF在絕大多數的胃癌中發生突變[3]。

糖類抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)是一種粘蛋白型的糖類蛋白腫瘤標志物，為細胞膜上的糖脂質，在血清中以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處。1979年Koprowski等[4]用結腸癌細胞系WS1116免疫小鼠，并與骨髓瘤雜交得到NS1116(CA19-9) 單克隆抗體。

我們觀察到Ⅳ期賁門癌組織中KRAS突變和血清CA19-9的升高具有一致性，因此，本文就賁門癌中KRAS突變和血清CA19-9升高之間的相關性進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集鄭州大學附屬腫瘤醫院2015年1月至2018年12月經胃鏡病理確診的Ⅳ期賁門癌患者64例，其中男35例，女29例，患者年齡41～80(62.0±6.7)歲。

1.2 KRAS和CA19-9檢測方法用限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)檢測胃鏡取得癌組織中的KRAS突變情況。晨起空腹采集靜脈血3 mL，用酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測患者血清中CA19-9水平，其中≤100 u·mL-1為陰性，>100 u·mL-1為陽性。

1.3 統計學處理采用SPSS 23.0進行統計學分析，KRAS和CA19-9表達的相關性分析用Spearman相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

64例Ⅳ期賁門癌組織中KRAS突變陽性者27例(42.19%)，血清中CA19-9陽性者25例(39.06%)。27例KRAS突變陽性者中23例CA19-9陽性，兩者均陽性者占35.94%；37例KRAS突變陰性者中35例CA19-9陰性，兩者均陰性者占54.69%。64例賁門癌中KRAS和CA19-9表達呈正相關(rs=0.808，P<0.001)。見表1。

表1 64例Ⅳ期賁門癌組織中KRAS與血清CA19-9表達的相關性

注：rs=0.808，P<0.001

3 討論

賁門癌有著與胃癌不同的生物學特性。王霞等[5]發現胃癌的賁門部位人表皮生長因子受體2(HER-2)陽性率高于其他部位，且腸型胃癌患者的HER-2表達明顯高于混合型及彌漫型，表明HER-2高表達與胃癌病變部位有關。Yu等[6]研究發現，HER-2過表達與患者的年齡>60歲、腫瘤位于賁門、腺瘤和高中分化組織學分型相關。

本文研究了賁門癌組織中KRAS的表達情況，與HER-2基因表達類似，賁門部癌變常伴隨KRAS基因的突變。KRAS是表皮生長因子受體(EGFR)下游信號傳導通路中的關鍵環節，突變后的KRAS基因不依賴于上游EGFR的活化而直接激活MAPK信號通路，導致腫瘤增殖、轉移等[7]。KRAS是最易被激活的致癌基因之一，其中17%～25%的腫瘤具有激活的KRAS突變[8]。致癌的KRAS基因的激活關鍵區域主要為密碼子12、13、59、61和63[9-10]。這些激活的突變通過失活內源性鳥苷三磷酸(GTP)酶活性并引起GTP酶活化蛋白抵抗，從而增加GTP結合態的RAS蛋白含量[11]。

在內胚層來源的胰腺癌(85%)、肺癌(35%)和結腸直腸癌(30%)中，KRAS突變頻率最高。這些組織由一系列不同分化的細胞類型組成，這些細胞具有專門的功能，但有共同的祖細胞，均來自相同的原始胚層內胚層。這一特性提示，突變活化的KRAS可能在內胚層祖細胞或干細胞水平上發揮致癌活性[12]。活化的KRAS在產生內胚層來源組織的祖細胞或干細胞中可發揮獨特的活性,在這些組織中,KRAS的突變率較高,這一特性提示,突變活化的KRAS可能在內胚層祖細胞或干細胞水平上發揮致癌活性[13]。

而胃癌也發生于內胚層。本研究中64例Ⅳ期賁門癌中KRAS基因突變者27例，陽性率為42.19%。略高于Lee等[14]報道的37.5%，這可能與本研究均為Ⅳ期患者有關。Lee等[14]檢測了140例胃癌的KRAS基因突變特征，發現其中11例(7.9%)的密碼子12產生了突變，發生在不同位置的腫瘤，其KRAS突變率亦有區別，位于胃上1/3的腫瘤的KRAS密碼子12突變頻率更高(37.5%)，胃中1/3的突變率為13.8%，胃下1/3的突變率為3%。Kim等[15]在66例胃癌和16種胃癌細胞系中發現了7種KRAS錯義突變，沒有發現BRAF突變。而謝玲等[16]報道96例胃癌中，漫型胃癌KRAS基因突變率(9.1%)高于腸型胃癌(2.7%)，但差異無統計學意義(P>0.05)，而彌漫型胃癌預后相對較差，提示KRAS突變者預后不良。

CA19-9屬于一種低聚糖類抗原，是一種含黏液成分的大分子糖蛋白，結構為唾液酸化的Ⅰ型乳糖系巖藻五糖，包括6個糖基，相對分子質量為5×106[17]。Lamerz等[18]統計分析發現，CA19-9在胰腺癌患者中升高最明顯,敏感性最高,膽管癌次之,胃癌、結腸癌、卵巢癌再次之,部分肺癌、乳腺癌、子宮癌也可升高；CA19-9升高還可見于胰腺癌以外的惡性腫瘤。在多種腺癌，特別是進展期胃癌中，CA19-9水平也可能升高[19-20]。

本研究結果顯示，64例Ⅳ期賁門癌組織中KRAS突變陽性者27例(42.19%)，血清中CA19-9陽性者25例(39.06%)。27例KRAS突變陽性者中23例CA19-9陽性，兩者均陽性者占35.94%；37例KRAS突變陰性者中35例CA19-9陰性，兩者均陰性者占54.69%。64例賁門癌中KRAS和CA19-9表達呈正相關(rs=0.808，P<0.05)。在胰腺癌研究中也發現了KRAS和CA19-9呈正相關[21]。研究[22]發現，血清CA19-9水平升高大腸癌患者的KRAS和BRAF基因的突變率更高。

CA19-9是Lewis血型抗原的組成部分，其產生或合成與Lewis血型密切相關。在少量Lewis血型均陰性人群中，CA19-9會呈現假陰性。本研究中27例KRAS突變患者中有2例患者CA19-9陰性，推測這2例患者有Lewis血型均陰性可能。

CA19-9升高和KRAS突變均預示臨床預后不佳，賁門癌血清中CA19-9的表達與癌組織中KRAS突變具有一致性，但CA19-9的檢測相對簡單、經濟，利于在基層醫院開展，可幫助判斷預后。我們分析賁門癌KRAS突變過程中可能同時伴隨某種酶的活化導致CA19-9升高，但具體機制尚需進一步深入研究。