擬南芥CKI1基因上游轉錄調控因子篩選及鑒定

劉振寧，袁黎，Venkatesan Sundaresan，余小林

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擬南芥基因上游轉錄調控因子篩選及鑒定

劉振寧1,2,3，袁黎2,4，Venkatesan Sundaresan2，余小林3

1. 臨沂大學農林科學學院，臨沂 276000 2. 加州大學戴維斯分校植物科學系，加利福尼亞州戴維斯 95616，美國 3. 浙江大學農業與生物技術學院，杭州 310058 4. 西北農林科技大學園藝學院，楊凌 712100

擬南芥CKI1 (cytokinin independent 1)是雙組分信號系統中一個組氨酸激酶蛋白，通過作用于下游組氨酸磷酸轉移蛋白激活雙組分信號通路，在調控胚囊中央細胞命運分化和發育過程中具有重要作用。然而目前對于基因上游轉錄調控因子還知之甚少。本研究分析了不同長度的啟動子在擬南芥胚囊中的活性，并利用酵母單雜交技術對上游轉錄調控因子進行了篩選和鑒定。結果表明，位于內含子區域中的片段表現出與啟動子全長相一致的表達活性。進一步選取3個串聯重復的片段用于構建誘餌表達載體，同時，選取擬南芥雌蕊構建cDNA文庫，通過酵母單雜交篩選獲得226個陽性克隆。去除低質量及冗余重復的序列后共獲得66條可讀序列，其中8條序列對應的基因編碼具有DNA結合功能的蛋白。研究結果為進一步揭示基因的轉錄調控機制提供了重要參考信息。

；轉錄調控；酵母單雜交；擬南芥

雙組分信號系統(two-component system, TCS)最初是在研究大腸桿菌()氮調節蛋白系統時發現的[1]。最簡單的雙組分信號系統包括用于感應輸入信號的組氨酸激酶(histidine kinase, HK)和用于調節輸出信號的反應調節因子(response regulator, RR)兩種元件，原核生物常以簡單的雙組分信號系統形式存在。……