酶聯免疫吸附試驗在梅毒螺旋體感染診斷中的應用價值

張克華

江西省上饒市弋陽縣中醫院 (江西上饒 334400)

梅毒作為常見的性疾病，其傳染性強且危害較大，極易侵犯、損傷全身各器官功能，故強化對病原體的檢測及早診斷并治療梅毒顯得尤為重要[1]。梅毒螺旋體感染為誘發梅毒的常見原因，目前甲苯胺紅不加熱血清試驗(toluidine red unheated serum test，TRUST)作為檢測梅毒螺旋體表達的常用方法，臨床應用特異度不高，存在一定的假陽性、假陰性[2]。近年來，酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)憑借操作簡便、自動化程度高等優點已在梅毒螺旋體檢查中逐漸應用[3]。鑒于此，本研究旨在探討ELISA、TRUST在梅毒螺旋體感染診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年10月至2018年9月在我院就診的106例疑為梅毒螺旋體感染患者，男66例，女40例；年齡22～67歲，平均(40.52±5.36)歲。本研究已獲院內醫學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

入選者均接受TRUST、ELISA檢查，以及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(treponema pallidum gelatin particle agglutination test，TPPA)。(1)TRUST檢測：將50 μl血清樣本加入加樣卡片圈，整個卡片圈中均勻涂布，將抗原液搖勻(所用試劑盒由上海榮盛生物藥業有限公司提供)；采用針頭取抗原液1滴加入，然后向立體脫色搖床中放置卡片，以100 r/min速度震蕩8 min，然后于亮光下觀察結果，其中圓圈內可見粉色或紅色絮狀物判定為陽性，圓圈內甲苯胺紅顆粒于中央聚集成為一點或均勻分布判定為陰性。(2)ELISA檢測：將50 μl血清標本加入預包被板條孔，設置空白對照、陰性、陽性，于37 ℃環境中溫育1 h；然后將板條孔取出，將酶標記物50 μl加入對照、陰性、陽性孔內，震蕩搖勻，于37 ℃環境中溫育0.5 h；然后取出并洗板，將底物緩沖液50 μl加入各個孔中，震蕩搖勻，于37 ℃環境中溫育0.5 h；將終止液50 μl加入各孔中，混勻，于ST360酶標儀(上海天呈科技有限公司)讀出數值，其中樣品OD值S/CO<1則梅毒抗體陰性，樣品OD值S/CO≥1為梅毒抗體陽性。(3)TPPA檢查：將每份標本做孔(9個)，將標本稀釋液加入U形反應板，加100 μl至第1孔，另外8孔各為25 μl；通過移液器取25 μl血清向第1孔加入，待混勻后取出25 μl并向第2孔加入，隨后取25 μl向第3孔加入，4～9孔同上，混勻最后1孔并棄去25 μl；將未致敏粒子D液25 μl加入第3孔，將致敏粒子C液25 μl加入4～9孔，向振蕩器內置入微量反應板，震蕩30 s，并置于有蓋濕盒內；于37 ℃孵箱靜置2 h，觀察結果。

1.3 評價指標

觀察TRUST、ELISA檢查結果，以TPPA檢查結果作為金標準，評估TRUST、ELISA檢查準確度、靈敏度、特異度。

2 結果

TPPA確診梅毒螺旋體感染85例(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分別為25例、21例、39例)；TRUST檢出陽性、陰性各74例、32例；ELISA檢出陽性、陰性各82例、24例。以TPPA診斷結果作為金標準，TRUST診斷特異度、靈敏度、準確度分別為61.90%(13/21)、77.65%(66/85)、74.53%(79/106)；ELISA診斷特異度、靈敏度、準確度分別為95.24%(20/21)、95.29%(81/85)、95.28%(101/106)。見表1。

表1 TRUST、ELISA診斷與TPPA診斷情況對照(例)

3 討論

梅毒屬于一種傳染性強的流行性疾病，多由于梅毒螺旋體感染所致。獲得性梅毒、胎傳梅毒為兩種常見類型梅毒，其中前者多由性接觸傳染，而后者則為經臍帶血循環胎盤傳染所致，且可于胎兒內臟、組織中繁殖，促使胎兒全身感染，導致產婦流產、死亡。經臨床發現，梅毒診治不當極易誘發梅毒性心血管病、脊髓膜炎等并發癥。梅毒分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期，其中Ⅰ期、Ⅱ期為梅毒早期，傳染性小且對患者機體影響較小，Ⅲ期梅毒為晚期，感染性較大、病程長，極易損傷患者機體健康，因此及早發現梅毒并診治對減輕梅毒損傷具有重要影響。

近年來，TPPA已成為梅毒診斷中的金標準，臨床檢測準確度較高，但由于其檢查價格昂貴，往往無法用于早期篩查中，故臨床多將TPPA檢查用于梅毒復查，以提升梅毒診斷效能。近年來臨床對梅毒的認識逐漸加深且醫療水平日益發展，臨床上梅毒檢查方法逐漸增多，TRUST、ELISA為梅毒檢查的常用方法，其中TRUST作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗，多被用于評估梅毒篩查及治療效果[4]。梅毒螺旋體感染后潛伏期較長，感染后1～2個月內血清中僅可檢測到部分抗體，特異性抗體出現早于非特異性抗體，且在實施相關治療后非特異性抗體將逐漸轉變為陰性。TRUST檢查梅毒Ⅰ期特異性較低，存在假陽性、假陰性現象，而對于梅毒潛伏期，TRUST檢查靈敏度不高。

ELISA作為酶免疫測定技術，應用基因工程技術，利于吸附已知抗體或抗原于其固相載體表面，然后通過酶標記抗原抗體反應，利用洗滌法洗掉液相中游離成分，通過對底物鹽水進行觀察而判定結果[5]。ELISA法檢測中緊密結合了酶化學敏感性與抗原抗體特異性，進而可提升診斷結果。本研究結果得出，ELISA法檢測梅毒螺旋體感染特異度、靈敏度、準確度較高，表明其利于提升梅毒檢出率，可為梅毒的防治提供確切參考。郭家權等[6]研究證實，ELISA法為梅毒篩查、檢測中較為有效的方法，臨床應用靈敏度較高，本研究結果與其相似。

綜上所述，ELISA用于梅毒螺旋體感染診斷準確度較高，利于提升梅毒診斷效能，可指導臨床制定治療方案。