防風藥材及其偽品的揮發油類成分氣相指紋圖譜研究

張 丹，牟玉瑩，木盼盼，郭 梅，郭 龍，鄭玉光

(河北中醫學院 藥學院，河北 石家莊 050200)

防風為傘形科植物防風Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根，具有祛風解表、勝濕止痛、止痙的功效，主要用于感冒頭痛、風濕痹痛、風疹瘙癢、破傷風等癥[1]。近年來防風需求量日益增大，而野生藥材資源日益減少，難以滿足市場需要，栽培防風逐漸成為市場的主流。目前，防風藥材品質差異較大，主要體現在規范化種植防風所占面積較小以及地方習用品的混入，造成主流市場真偽混雜、質量良莠不齊。近年來對于防風藥材的質量評價多基于高效液相色譜法對其香豆素類成分進行研究[2-8]，而對其揮發油類成分的研究較少。中藥作為一個整體，是由多種成分共同作用發揮其活性的。鑒于此，本研究開展了防風藥材及其偽品的揮發油類成分的氣相指紋圖譜研究，以期完善防風的質量評價體系，為防風藥材的質量綜合評價體系的建立提供依據。

1 材料

1.1 設備器材

美國安捷倫7890B氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；BSA224S-CW電子分析天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；KQ2200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；一次性使用無菌注射器帶針2.5 mL(江西洪達醫療器械集團有限公司)。

1.2 試劑

正己烷(分析純AR，天津歐博凱化工有限公司)。

1.3 藥材

34批防風藥材購買于各地藥材市場，經鑒定為防風S.adivaricata(Turcz.)Schischk.(關防風、口防風)、葛縷子CarumcarviL.(小防風)、竹葉西風芹SeselimaireiWolff.(云防風)、寬萼巖風Libanotislaticalycina(水防風)的干燥根，憑證標本保存于河北中醫學院生藥學研究室。

表1 防風樣品詳細信息

2 方法

2.1 防風揮發油的提取

經多種提取方法的篩選，最后結合《香港藥典》中艾葉的提取方法，用正己烷超聲提取，過濾，將濾液倒入蒸發皿中，揮干。所有樣品都有油析出，方法可靠。

2.2 氣相色譜條件

色譜柱：載氣：高純氮氣(99.999%)；載氣流速1 mL/min；進樣量：2進樣；分流比5∶1；檢測器溫度：250 ℃。程序升溫：柱初始溫度50 ℃：保持3 min，然后以10 ℃/min速率升溫至210 ℃，保持5 min，再以2 ℃/min，初始升溫至240 ℃，保持2 min，最后以3 ℃/min，升溫至280 ℃保持2 min。

2.3 供試品溶液的制備

精密取樣品粉末約l g，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入正己烷10 mL，稱定重量，置超聲波清洗器中超聲30 min，放冷，再稱定重量，用正己烷補足減失的重量，搖勻，濾過。取濾液至10 mL量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3 結果

3.1 精密度試驗

精密吸取同一防風(S1)供試品溶液，連續進樣6次，以1號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%。

3.2 穩定性試驗

精密吸取同一防風(S1)供試品溶液，分別在供試品溶液制備后第0、2、6、8、12、24 h進樣，以1號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%，表明供試品溶液在制備后24 h內穩定。

3.3 重復性試驗

取同一批防風(S1)粉末約1 g，平行6份，精密稱定，按“2.3”項下方法處理，得供試品溶液，分別進樣，記錄特征圖譜，以3號峰為參照峰，各特征峰保留時間的RSD<3.0%，相對峰面積的RSD<3.0%，表明該方法的重復性良好。

3.4 防風揮發油的指紋圖譜研究

33批防風樣品的色譜見圖1，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004 A版”對防風藥材氣相圖譜進行處理。防風藥材及其偽品的指紋圖譜相似度結果見表4，由結果可知不同產地的防風藥材揮發油的各樣品間相似度在0.030～0.990之間，表現為關防風、口防風和河南防風具有較好的相似度，而甘肅產小防風、云南產云防風與之具有較大的差異。由此說明，所建立的防風藥材揮發油指紋圖譜適用于防風藥材的真偽鑒別。

圖1 防風藥材揮發油指紋圖譜

表2 防風藥材HPLC指紋圖譜共有峰的相似度

4 討論

本實驗通過對不同產區、不同來源的防風及其偽品的揮發油類成分進行氣相分析，并建立了氣相指紋圖譜，通過對指紋圖譜及相似度分析結果進行對比發現，不同產地的正品防風具有較好的相似性，而不同來源防風，其所含揮發油種類存在顯著差異。相似度分析結果表明，內蒙古、黑龍江、河北、河南產的防風與對照圖譜具有較好的相似性，說明所含揮發油種類相似度較高；甘肅、云南所產防風與對照圖譜相似度較差，可見所建立的氣相指紋圖譜可用于防風藥材的真偽鑒別。