150例高膽紅素血癥新生兒溶血三項檢測及相關影響因素分析

吳淑華，苗 銳

(湖南省永州市中心醫院檢驗科,湖南永州 425000)

新生兒溶血病(HDN)，又稱母兒血型不合溶血病，是一種與遺傳相關的免疫性溶血疾病，以高膽紅素血癥為主要臨床表現，嚴重者可導致新生兒膽紅素腦病，造成新生兒智力低下甚至死亡。因此，對高膽紅素血癥新生兒溶血病進行早期診斷、及早干預，是避免膽紅素腦病的關鍵診療工作。

高膽紅素血癥新生兒溶血病最常見發病原因為新生兒ABO血型不合，主要發生在母親血型為O型，新生兒血型為A型或者B型。如母嬰血型存在不合，應盡早預測是否有發生新生兒溶血性疾病的可能，以及判定發生高膽紅素血癥的危險程度及其影響因素，以便實現早期干預，避免并發癥的發生[1]。

目前，臨床上對HDN的檢測主要為溶血三項檢測，即直接抗人球蛋白試驗(直接試驗)、抗體釋放試驗(釋放試驗)和游離抗體試驗(游離試驗)。本研究選取了本院血液中心2016年6月至2018年6月150例患有高膽紅素血癥的HDV患兒，進行溶血三項檢測及血清總膽紅素測定，并收集患兒臨床資料，從而對高膽紅素血癥新生兒溶血三項檢測及相關影響因素進行分析，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年6月至2018年6月送檢本中心的150例確診為ABO血型不合導致高膽紅素血癥新生兒溶血病(ABO-HDN)的新生兒標本(ABO-HDN組)及母血標本，所有新生兒母親的血型均為O型，Rh(D)陽性，出生時間在3 h至12 d，其中，男78例，女72例；血型A型患兒85例，血型B型患兒65例。同時，選取出生時間在3 h至12 d的健康新生兒150例作為對照組，男76例，女74例，血型A型者83例，血型B型者67例，對照組與ABO-HDN組在年齡、性別、血型等基礎資料方面差異無統計學意義(P>0.05)。所有患兒進行新生兒溶血三項檢測及血清總膽紅素測定，母親血清進行IgG抗體效價測定，并收集患兒臨床資料。

1.2診斷標準

1.2.1HDN診斷標準[2](1)母嬰ABO血型或者Rh血型不合；(2)抗體釋放試驗結果為陽性或三項試驗中2～3項為陽性，均可診斷為HDN。

1.2.2新生兒高膽紅素血癥診斷標準[3](1)足月新生兒血清膽紅素>220.6 μmol/L(12.9 mg/dL)，早產兒血清膽紅素>256.5 μmol/L(15 mg/dL)；(2)排除同時≥2個病因導致的高膽紅素血癥(如肝臟疾病、膽汁淤積癥或腎臟疾病等)。

1.3儀器與試劑 標準抗-A、抗-B血清；抗-D血清、抗體篩選紅細胞、2-巰基乙醇試劑、抗人球蛋白試劑采購于上海血液生物醫藥有限公司，HDN微柱凝膠檢測卡、血型專用離心機、37℃孵育器采購于長春博迅生物技術有限公司。

1.4方法 ABO血型鑒定、溶血三項檢測(直接試驗、釋放試驗和游離試驗)參照《全國臨床檢驗操作規程》第4版的方法進行；母親血清IgG抗體效價采用微柱凝膠卡片法進行；新生兒血清總膽紅素測定采用貝克曼AU5800全自動生化儀進行。

2 結 果

2.1150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血型檢測結果 經臨床統計，150例ABO-HDN，母O子A不合者為85例占56.67%(85/150)，母O子B不合者為65例占43.33%(65/150)，A型患者的陽性率高于B型患者。見表1。

表1 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血型檢測結果

2.2150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血三項檢測結果 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒進行血清溶血三項檢測結果顯示：直接試驗、游離試驗和釋放試驗陽性率分別為20%、37.33%和100%。O-A組和O-B組組間進行比較，發現兩組間直接試驗、游離試驗、釋放試驗的陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血 三項檢測結果[n(%)]

2.3150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結果與血清總膽紅素結果 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒血清溶血三項檢測陽性構成結果、血清總膽紅素結果見表3。結果顯示：溶血三項檢測陽性構成，三項陽性率為7.33%(11/150)，兩項陽性率為42.67%(64/150)，一項陽性率為50.00%(75/150)。總膽紅素結果顯示：高膽紅素血癥ABO-HDN患兒總膽紅素水平較對照組明顯增高，差異有統計學意義(P<0.01)，試驗組中以三項陽性組的總膽紅素升高最明顯，但較兩項陽性和一項陽性組差異無統計學意義(P>0.05)。

表3 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測 結果與血清總膽紅素結果分析

注：*表示總膽紅素水平與對照組相比較,P<0.05；/表示無數據

2.4150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結果與送檢時間的關系 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測結果與送檢時間的關系見表4。在24 h內送檢，血清溶血三項檢測結果陽性率最高，為46.67%(70/150)，且隨著黃疸發生時間的延長，溶血三項檢測結果陽性率逐漸減低。

2.5150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒與母親血清IgG抗體效價分布 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價為1∶16～1∶64的共13例(13/150,8.67%)，母親血清IgG抗體效價為1∶128～1∶256的共121例(121/150，80.67%)，母親血清IgG抗體效價為1∶512的共16例(16/150,10.67%)，見表5。

表4 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒溶血三項檢測 結果與送檢時間的關系

表5 150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒與母親血清 IgG抗體效價分布(n)

3 討 論

HDN是由于母親血清IgG抗體使得胎兒紅細胞發生致敏反應，從而導致紅細胞在網狀內皮系統中被異常破壞，通過血清學檢查可檢測到高膽紅素血癥。因此，HDN與母嬰血型是否相合、母親血清中是否存在抗嬰兒紅細胞IgG抗體，母親IgG抗體是否致敏嬰兒紅細胞這三點有著重要關系。

HDN的臨床診斷并不困難，根據患兒一系列臨床表現，結合實驗室檢查，即可作出診斷。而實驗室檢查中的血清學檢查是其主要的診斷依據，血清學溶血三項檢測中的直接試驗是為了檢測新生兒紅細胞是否已經被母親血清中的IgG抗體致敏，游離試驗和釋放試驗是為了檢測新生兒血清中是否存在IgG類抗體，因此溶血三項檢測在HDN中具有重要的診斷價值。其中，釋放試驗在HDN的診斷中敏感度最高，也是判定HDN的最有力證據[4-5]。

高膽紅素血癥是HDN的最常見臨床癥狀，以未結合膽紅素升高為主，膽紅素可透過血-腦屏障而沉積在中樞核團，導致膽紅素腦病進而危及新生兒生命[6-7]。本研究發現母子血型為O-A型陽性率高于母子血型O-B型，這與楊冬梅等[8]的報道一致，可能與嬰兒紅細胞膜上A抗原決定簇多于B抗原決定簇，與IgG抗體結合力強有關。研究中統計發現，150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒的溶血三項檢測結果為直接試驗、游離試驗和釋放試驗陽性率分別為20.00%、37.33%和100.00%，母子血型不合O-A型組和O-B型組三項結果差異并無統計學意義，這與國內謝楠楠等[9]的研究結果一致，即直接試驗陽性率最低，釋放試驗陽性率最高，這可能與三項試驗的設計原理有關。釋放試驗因為紅細胞的大量破壞，細胞膜上的IgG抗體被釋放出來，因此具有較高的靈敏度。而直接試驗因為抗原密度在新生兒紅細胞上相對較低，吸附抗體能力較小，因此結果常呈弱陽性或者陰性。

從表3中可以發現，ABO-HDN組血清總膽紅素水平明顯高于對照組,差異有統計學意義(P<0.01)，溶血三項測試陽性結果顯示，當三項均為陽性時，血清總膽紅素水平最高，結合患者臨床資料，發現三項均陽時，患兒的臨床病情最重。從表4中可以看出患兒血清溶血三項檢測與黃疸發生時間有著密切關系：在24 h內送檢，血清溶血三項檢測結果陽性率最高，為46.67%(70/150)，且隨著黃疸發生時間的延長，溶血三項檢測結果陽性率逐漸減低。這表明應盡早采集患兒血液送檢，可能原因為隨著病程進展，致敏紅細胞逐漸溶解，血型抗體將被中和而失去抗原性，從而使得溶血三項檢測陽性率減低。因此，盡早加強總膽紅素測定有助于評估HDN患者的病情，有助于早治療、減少并發癥、降低對患兒的傷害。

有研究表明[10-11]，孕婦血清中IgG抗體效價與胎兒的受損害程度呈正比，本文的檢測結果發現，150例高膽紅素血癥ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價主要集中在1∶128～1∶256，這提醒臨床工作中對母體血清IgG抗體的效價進行準確測定，對診斷和預防高膽紅素血癥ABO-HDN有著重要意義。

綜上所述，當母體血型為O型時，ABO-HDN中A型新生兒發病率高于B型新生兒；血清溶血三項試驗檢測結果，以釋放試驗陽性率最高，直接試驗陽性率最低；ABO-HDN血清學溶血三項檢測陽性率與標本送檢時間及膽紅素水平有著密切關系；ABO-HDN患兒母親血清IgG抗體效價主要集中在1∶128～1∶256。因此，對ABO血型不合導致的高膽紅素血癥新生兒溶血，應盡早行血清學溶血三項試驗，對早診斷、早治療，減少并發癥，縮短病程等有著重要意義。