氣相色譜內標法測定d-檸檬烯含量

邱小梅，熊寶林，陳 石

（云南省化工研究院，云南 昆明 650228）

作為綠色環保農藥的有效組分和實用助劑——d-檸檬烯（d-Limonene），對鱗翅目、鞘翅目、半翅目、膜翅目等農業害蟲均具殺滅作用，是農業用橙油桔油等產品的重要有效成分之一[1-2]。含檸檬烯的農藥產品，在高品質農產品的種植生產中，使用程度越來越高，可大量減少有機磷及化學農藥的使用。在2018年召開的第九屆全國農藥登記評審委員會第二次委員會議上，d-檸檬烯原藥及可溶液劑被評審通過為新農藥產品。雖然，檸檬烯在藥品和保健品領域，有較為成熟的檢測方法，檢測多以GC-MS、GC和HPLC等方法進行[3-4]，但在農藥應用領域，檸檬烯水劑的氣相色譜檢測方法尚未見文獻報道。本文建立和討論的氣相色譜內標法，可做為產品質量的控制方法，在今后，亦可為相應檢測標準的制定，提供可靠的經驗和數據支持。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

儀器:Agilent6890氣相色譜儀，帶FID檢測器。

試劑:甲醇分析純，國藥集團化學試劑有限公司；乙酸丁酯，不含有干擾分析的雜質；d-檸檬烯標準品（D-limonene） 質量分數為90.0%（巴西 CUTRALE）。

1.2 氣相色譜檢測條件

毛細管色譜柱:Agilent HP-innowax（30m×0.25mm×0.25μm）；柱溫 50℃；進樣口溫度220℃；檢測器溫度250℃；進樣量1.0μL；載氣為高純氮，流速1.5mL/min，分流比30∶1；空氣300mL/min；氫氣:30mL/min。

1.3 樣品檢測

1.3.1 標準溶液的配制

內標溶液的配制:乙酸丁酯1.5g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻。

標樣溶液的配制:稱取d-檸檬烯標樣0.0841g，置于25mL容量瓶中，用移液管準確加入5mL內標溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

試樣溶液的配制:稱取試樣0.8～1.2g，置于25mL容量瓶中，用移液管準確加入5mL內標溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

1.3.2 樣品檢測

在上述氣相色譜操作條件下，待儀器穩定后，連續注入數針標樣溶液，待相鄰兩針中待測組分與內標物的峰面積比值的相對響應值變化小于1.5%時進樣檢測。色譜圖如圖1所示。由圖1看出，待檢組分與內標物分離度良好。

1.4 結果計算

試樣中d-檸檬烯質量分數w按下式計算:

圖1 d-檸檬烯與內標物的氣相色譜圖Figure 1 Gas Chromatogram of the D-limonene and the internal standard

式中:r1為標樣溶液中，d-檸檬烯與內標物峰面積比的平均值；r2為試樣溶液中，d-檸檬烯與內標物峰面積比的平均值；m1為d-檸檬烯標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；w0為標樣中d-檸檬烯的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 線性相關性驗證

稱取d-檸檬烯標樣0.75g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻備用。用移液管分別移取1、2、5、10、20mL標樣溶液，置于25mL容量瓶中，準確加入5mL內標溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

按上述氣相色譜操作條件進行多組分析測定，以d-檸檬烯與內標物的質量比為橫坐標，d-檸檬烯與內標物的峰面積比為縱坐標繪制標準曲線，得線性方程為y=0.0161x+0.0005；其線性相關系數為0.9999。如圖2所示。

圖2 標準曲線Figure 2 Standard curve

2.2 方法精密度驗證

按前述內標檢測方法,對同一個檸檬烯樣品進行平行測定，精密度測定結果見表1。

表1 精密度試驗結果Tab1 Precision test results

由表1可見，d-檸檬烯含量的相對標準偏差為0.35%。

2.3 方法準確度驗證

以加標回收率作為準確度驗證方法，在已知d-檸檬烯含量的樣品中分別加入不同量的d-檸檬烯標準樣品，按前述述色譜條件進行測定。結果見表2。由表2可見，d-檸檬烯的平均回收率為100.3%。

表2 準確度試驗結果Tab2 Accuracy test results

3 結論

氣相色譜內標法測定d-檸檬烯含量，以乙酸丁酯為內標物，具有前處理過程簡便，樣品分離效果好等優勢。相比于外標法，此方法不受樣品進樣量的影響，并且由于通過測量內標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算，也一定程度上消除了手動進樣、分流歧視、操作條件波動等的變化所引起的誤差，檢測方法更為簡便可靠。