鹽酸溴己新滴鼻劑的研制及含量測定與透皮性能評價

金偉華，蒲志強，陳 華，于波濤，羅鈺潔

(1.西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院藥劑科，四川 成都 610083；2.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)系，四川 瀘州 646000)

鹽酸溴己新是臨床常用祛痰藥，有較強的溶解粘痰作用，屬黏液調(diào)節(jié)劑，該藥可直接作用于支氣管腺體，促使黏液分泌細胞的溶酶體釋出，使痰中的黏多糖纖維分化裂解，還可抑制黏液腺和杯狀細胞中酸性糖蛋白的合成，使之分泌黏滯性較低的小分子糖蛋白，從而使痰液的黏稠度降低，易于咳出。臨床適用于急、慢性支氣管炎及其他呼吸道疾病，如肺氣腫、哮喘、支氣管擴張等痰液黏稠不易咳出的患者。目前已有片劑、注射劑等劑型。臨床上常有用鹽酸溴己新注射液霧化吸入給藥，但在2016年《霧化吸入療法在呼吸疾病中的應(yīng)用專家共識》[1]中已明確指出，靜脈制劑不推薦霧化使用。從患者用藥角度考慮，經(jīng)鼻腔用藥吸收快，生物利用度高，使用方便，尤其適合于兒童，進而可提高患者用藥依從性，同時可避免首過效應(yīng)，減輕胃黏膜刺激，降低患者不適感。為此，本研究對制備的滴鼻劑進行了體外透皮試驗，累積透過率較滿意，證明作為滴鼻劑可透過鼻黏膜發(fā)揮治療作用。

1 試驗材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀(美國安捷倫公司)；PHS-3C精密pH計(上海康儀儀器有限公司)；AL204型電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]；HH-S24S數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海君竺儀器制造有限公司)；改良的Franz擴散池(自制)。

1.2 試藥

鹽酸溴己新對照品(含量≥98%，批號15159，Med Chem Express LLC)；液狀石蠟(吉林市吉化江城油脂化工有限責(zé)任公司，批號170101)；無水乙醇(含量≥99.7%中國長江磷化股份有限公司，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；甲醇為色譜純；水為超純水；冰醋酸、三乙胺均為國產(chǎn)分析純，鹽酸溴己新滴鼻劑供試品自制(規(guī)格：0.1%，批號：180310、180311、180312)。

1.3 動物

雄性KM小鼠[20～25 g，成都達碩實驗動物公司，生產(chǎn)合格證SCXK(川)2015-030]。

2 處方與制備

2.1 處方

鹽酸溴己新1.0 g，無水乙醇50 ml，加液狀石蠟制成1 000 ml。

2.2 制備

取適量液狀石蠟與無水乙醇混合，加入鹽酸溴己新，攪拌均勻，然后加液狀石蠟至全量，攪拌并超聲使藥物均勻分散，即得。

3 含量測定

3.1 色譜條件

Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-醋酸溶液(取冰醋酸40 ml置于1 000 ml容量瓶，加水定容至刻度，用三乙胺調(diào)節(jié)pH至3.2)(55∶45)；流速：1 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：247 nm。

3.2 溶液的制備[2]

對照品溶液：精密稱取鹽酸溴己新對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1 ml中含鹽酸溴己新約187.2 μg的溶液，即得，作為對照品儲備液備用。

供試品溶液：取同批次的鹽酸溴己新滴鼻劑10 ml，用50 ml流動相進行萃取，分取下層溶液，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

陰性對照溶液：取不含鹽酸溴己新的陰性樣品10 ml，同供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

3.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

按“3.1”項下色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，注入色譜儀，測定，即得，結(jié)果見圖1，陰性無干擾，專屬性良好，理論板數(shù)按鹽酸溴己新峰計算不低于3 000。

圖1 鹽酸溴己新滴鼻劑HPLC圖 A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液；1.鹽酸溴己新

3.4 線性關(guān)系考察

精密量取鹽酸溴己新對照品儲備液(濃度為187.2 μg/ml)，加流動相溶液分別稀釋制成濃度為37.44、74.88、112.32、149.76 μg/ml的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進樣濃度(X)為橫坐標(biāo)，鹽酸溴己新峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為Y=11.996X+124.6(r=0.999 9)。結(jié)果表明，鹽酸溴己新在37.44～187.2 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗

精密吸取“3.2”項下鹽酸溴己新對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)測定6次，記錄峰面積，計算鹽酸溴己新RSD為0.44%，表明儀器精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗

取鹽酸溴己新滴鼻劑(批號：180303)，精密量取，按“3.2”項下方法制成供試品溶液，分別于0、2、4、8、24 h進樣，記錄峰面積，計算鹽酸溴己新RSD為0.97%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.7 重復(fù)性試驗

精密量取同批次鹽酸溴己新滴鼻劑6份(批號：180303)，按“3.2”項下方法制成供試品溶液，分別進樣測定，記錄峰面積，計算鹽酸溴己新RSD為0.63%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.8 回收率試驗

按照處方比例配置缺溴己新空白基質(zhì)滴鼻劑樣品，然后精密量取空白基質(zhì)樣品3份，每份10 ml，再分別精密加入低、中、高濃度的溴己新對照品溶液(濃度分別為0.609、0.734、0.871 mg/ml)10 ml，依次用50 ml流動相進行萃取，分取下層溶液，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積，計算回收率，結(jié)果低、中、高3種濃度的樣品平均回收率分別為104.00%、101.59%、98.51%(n=9)，RSD為0.89%、1.35%、0.35% ，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸溴己新滴鼻劑回收率測定結(jié)果(n=9)

3.9 樣品含量測定

取批號分別為180310、180311、180312的鹽酸溴己新滴鼻劑，按“3.2”項下的方法制備供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積，計算3批樣品的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

4 體外透皮試驗

4.1 離體鼠皮制備[3]

取雄性KM小鼠，6%Na2S溶液褪除背部毛，用生理鹽水洗凈皮膚，次日斷頸處死，處死后立即剝離背部皮膚，去除皮下組織和脂肪等粘連物，用生理鹽水清洗干凈，放入生理鹽水中4 ℃短期保存。使用前檢查鼠皮完整性，不得有破損。

4.2 體外透皮試驗[4-5]

采用改良的Franz擴散池，接收池體積為13 ml，接收池與離體皮膚之間的有效接觸面積為2.5 cm2，流動相為接收介質(zhì)。恒溫水浴加熱，溫度控制在(37±1)℃，接收池內(nèi)加入磁力攪拌子，以300 r/min恒速攪拌。

將保存的離體鼠皮用生理鹽水清洗，固定在供給室和接收池之間，角質(zhì)層朝上，真皮一側(cè)與接收液充分接觸，排盡氣泡。精密量取2 ml搖勻后的鹽酸溴己新滴鼻劑(批號：180311)，滴于試驗皮膚上，打開磁力加熱攪拌器。于1、2、4、6、8、12、24 h取接收液1 ml(立即補充同溫等量空白接收介質(zhì))。采用HPLC法測定接收介質(zhì)中鹽酸溴己新含量并計算累積透過量Qn與累積透過率P。累積滲透量Qn的計算公式為:

累積透過率P=(累積透過量Qn/加樣量)×100%

式中：Qn為第n個取樣點的累積滲透量(μg)，Cn、Ci為第n個和第i(i≤n-1)個取樣點的鹽酸溴己新質(zhì)量濃度(μg/ml)，V0為擴散池體積(13 ml)，V為取樣體積(1 ml)。以鹽酸溴己新累積透過量Qn(μg)對時間t(h)作圖，繪制體外透皮曲線(圖1)，結(jié)果24 h內(nèi)累積滲透量為964.56 μg，透過量達給藥量的60.29%，表明鹽酸溴己新滴鼻劑透皮效果良好。

圖2 鹽酸溴己新滴鼻劑體外累積滲透曲線(n=3)

5 討論

5.1 制劑溶媒的選擇

制備鹽酸溴己新滴鼻劑時，由于鹽酸溴己新水溶性較差，若選擇水為分散介質(zhì)，鹽酸溴己新漂浮于液面，且易粘附在容器壁上，經(jīng)攪拌無法均勻分散；若以甘油為分散介質(zhì)，但滴鼻液處方中甘油含量過大時，使用后鼻黏膜會有不適灼燒刺激性；以液狀石蠟為分散介質(zhì)，藥物均勻分散，且粒子沉降速度慢，沉降后沒有結(jié)塊現(xiàn)象，振搖后能迅速均勻分散，故選擇液狀石蠟為制劑分散介質(zhì)。

5.2 流動相的確定

關(guān)于流動相選擇，曾試驗《中國藥典》上鹽酸溴己新含量測定項下流動相磷酸鹽緩沖液-乙腈(20∶80)[6]，但試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)出峰情況較差，峰型不正常不對稱，基線不平穩(wěn)，所以未采用該流動相。根據(jù)參考文獻[7]中使用的流動相甲醇-醋酸溶液(70∶30)，通過預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)鹽酸溴己新出峰情況較好，再經(jīng)過調(diào)試，最終確定流動相為甲醇-醋酸溶液(55∶45)，系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果良好，樣品分離度好，峰型對稱，基線平穩(wěn)。

5.3 透皮接受液的選擇

體外透皮試驗中，根據(jù)鹽酸溴己新的溶解性，選擇流動相甲醇-醋酸溶液(55∶45)作為接收介質(zhì)，同時為了防止流動相揮發(fā)，整個透皮試驗均在密封下進行。通過檢測24 h滲透給藥后接收液中鹽酸溴己新含量，發(fā)現(xiàn)藥物滲透量與時間成正相關(guān)，表明鹽酸溴己新滴鼻劑的透皮效果良好。