5種消毒劑對鴨場常見病原菌的殺滅效果試驗

吳伯梅 ， 鮮思美 ， 饒體宇 ， 張 友 , 楊 倩 ， 包滔滔

(1.貴州大學動物科學學院 ， 貴州 貴陽 550025 ； 2.貴州省動物疫病研究所 ， 貴州 貴陽 550025)

養鴨業在我國農業經濟產業中占有重要地位，隨著經濟發展，傳統養鴨業結構也在發生著很大的變化，即由農村散養轉變為集約化養殖。鴨場環境衛生不達標、地面潮濕、舍內通風不良、飼養密度過大等均是導致細菌性疾病發生的誘因，一旦發生疫病將給養殖戶帶來巨大的經濟損失。預防性消毒是集約化養殖場防控細菌性疾病的重要措施之一，常見的消毒方法包括物理消毒、化學消毒及微生物消毒等，其中化學消毒法主要通過消毒劑熏蒸、噴灑和浸泡等方式殺滅病原微生物。本試驗選用市場常售的5種消毒劑對鴨場常見5種病原菌進行殺滅效果觀察，對養殖場選擇消毒劑進行有效消毒具有指導意義。

1 材料與方法

1.1 菌株 大腸桿菌、鴨疫里默桿菌、巴氏桿菌、沙門菌和葡萄球菌均由貴州省動物疫病研究所臨床分離鑒定及保存。

1.2 試劑 消毒劑：聚維酮碘、戊二醛癸甲溴銨(河南后裔實業集團有限公司)；苯扎溴銨(江西鵬創生物科技有限公司)；月芐三甲氯銨(西鄉長江動物藥品有限責任公司)；復方戊二醛(英國考文垂化學藥品有限公司)。培養基：LB肉湯、普通營養瓊脂、瓊脂粉、脫纖維羊血、胰蛋白胨大豆肉湯、特級馬血清。中和劑：參照GB15982-2012醫院消毒標準配制消毒劑中和劑，聚維酮碘及月芐三甲氯銨配制0.5%硫代硫酸鈉溶液；苯扎溴銨配制0.3%吐溫-80+0.3%卵磷脂溶液；復方戊二醛(戊二醛+苯扎氯胺)及戊二醛癸甲溴銨(戊二醛+癸甲溴銨)配制3%吐溫-80+0.3%卵磷脂+0.3%甘氨酸。

1.3 菌液制備 將加入25%甘油保存的菌種解凍，采用分區劃線法在瓊脂平板中接種，37 ℃恒溫培養箱培養過夜后得到單個菌落，挑取單個菌落進行增菌，37 ℃恒溫培養18-24 h，平板計數法測定菌落總數，制備細菌懸液。

1.4 5種消毒劑對鴨場常見病原菌的MIC/MBC測定 參照2002年版《消毒技術規范》檢測MIC/MBC，使用無菌標準硬水將各消毒劑稀釋成使用濃度的2倍，對該濃度進行倍比稀釋。取稀釋好的消毒劑1 mL分別加入含1 mL雙倍營養肉湯的試管中混勻，再接入0.1 mL制備好的菌懸液混勻，標記；陽性對照以營養肉湯加菌液為對照，陰性對照以營養肉湯及無菌標準硬水為對照，各樣本設2個平行對照，將試驗組、陽性對照組及陰性對照組放置37 ℃搖床中，培養24 h，觀察結果。判定標準：當陽性對照管有細菌生長(混濁)，陰性對照管無菌生長(透明)，試驗組無菌生長的最高稀釋度所對應的抗(抑)菌劑濃度，重復試驗3次，得到一致結果，即可判定該濃度為樣品對受試菌的MIC，試驗菌工作濃度為5×105CFU/mL～5×106CFU/mL。

在MIC 試驗觀察 24 h 后，往無菌生長的試管加入經鑒定合格的中和劑 2 mL混勻，于 37 ℃ 培養箱中培養48 h，觀察是否有菌生長，將培養后的液體在營養瓊脂上進行點種，無細菌生長的最大稀釋度即為該樣品對受試菌的MBC。

2 結果

通過營養肉湯稀釋法檢測5種消毒劑對鴨場常見病原菌的MICs/MBCs值，結果見表1、表2。由表1、表2可知，這5種消毒劑對病原菌的殺菌效果有明顯差別，聚維酮碘對同種受試菌的MICs/MBCs值均一致，對不同受試菌的MICs/MBCs值表現出2倍差異，苯扎溴銨對這5種病原菌的MICs/MBCs值分別為1∶200、1∶25；月芐三甲氯銨對這5種病原菌的MICs/MBCs值分別為1∶1 920、1∶960，復方戊二醛對這5種病原菌的MICs/MBCs值分別為1∶1 200、1∶600；戊二醛癸甲溴銨對這5種病原菌的MICs/MBCs值分別為1∶1 000、1∶500。

表1 5種消毒劑對鴨場常見病原菌的MICs值

表2 5種消毒劑對鴨場常見病原菌的MBCs值

3 討論

在養殖鴨子的環境中存在著大量微生物，一般情況下不會對鴨產生危害，但環境污染、圈舍濕冷、氣溫驟變等應激導致鴨子抵抗力降低，常誘發細菌性疾病，病原菌隨排泄物、分泌物排到養殖環境中，造成地表、飼料及飲水等污染，鴨群通過消化道、呼吸道及傷口感染，導致細菌性疾病的發生與傳播，給養殖戶帶來嚴重經濟損失。消毒是預防和控制細菌性疾病發生與流行的有效手段，常使用消毒劑消滅停留在不同傳播媒介上的病原體，通過切斷傳播途徑，以控制細菌性疾病的發生與傳播。

聚維酮碘主要通過釋放游離碘，作用于細菌體內的蛋白質，使蛋白質變性、沉淀，導致細菌死亡，廣泛應用于黏膜、皮膚、器械、隱形眼鏡等消毒[1-3]。本試驗中聚維酮碘對病原菌的MICs/MBCs均低于廠家推薦使用濃度，根據周慶民等[4]研究影響聚維酮碘穩定性的試驗中，發現有效碘含量會隨著存儲時間增加、溫度升高而減少，避光保存可減緩有效碘含量的下降速率，聚維酮碘中有效碘的含量與殺菌能力呈正相關，推測試驗使用的聚維酮碘中因保存不當導致有效碘含量降低，從而表現出低的殺菌效果。

本試驗根據薛廣波等[5]方法在檢測苯扎溴銨MIC/MBC時，MICs/MBCs表現出8倍的差異，為了解導致苯扎溴銨對病原菌MIC/MBC差異大的原因，通過對苯扎溴安作用后的菌液進行細菌總數測定，發現苯扎溴銨在稀釋比為1∶25～1∶200時，試管中的顏色變化與陰性對照一致，但細菌濃度比工作濃度(5×105CFU/mL～5×106CFU/mL)低，表現出一定的抑菌作用，故判定苯扎溴安對病原菌的MIC為1∶200。

檢測這5種消毒劑對病原菌的MICs/MBCs值均低于廠家推薦使用濃度，按照廠家推薦使用濃度進行消毒，不能對環境做到有效消毒，而戊二醛癸甲溴銨溶液按照廠家推薦的常規環境消毒稀釋比1∶2 000～1∶4 000，疫病發生時環境消毒稀釋比1∶500～1∶1 000，通過與檢測到的MICs/MBCs值相比，按照疫病發生時環境消毒的稀釋最大比進行配制消毒劑，可對病原菌造成一定的殺滅效果。造成消毒劑對病原菌的MIC/MBC低于廠家推薦使用濃度的原因，可能是消毒劑保存不當或病原菌對消毒劑產生耐藥性。因此，養殖廠在選擇消毒劑時，應結合消毒劑對病原菌的殺滅效果，制定科學的消毒規程，對養殖場進行有效消毒。