一起豬繁殖與呼吸綜合征與豬瘟混合感染的緊急流行病學調查

董雅琴 ， 楊旭兵 ， 李 印 ， 蘭鄒然 ， 張 鋒 ， 李曉成

(1.中國動物衛生與流行病學中心 ， 山東 青島 266032 ； 2.廣東永順生物制藥股份有限公司 ，廣東 廣州 511356 ； 3.山東省動物疫病預防與控制中心 ， 山東 濟南 250022)

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)，是臨床常見重要豬群疫病之一。其病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，不同品種、年齡、性別的豬只均可感染，臨床表現為母豬繁殖障礙與生長豬呼吸道癥狀[1-2]。2012年，我國學者分離到與美國PRRSV變異株NADC30基因同源性較高的毒株[3]，統稱為類NADC30毒株(NADC30-like毒株)。此類毒株臨床上主要導致妊娠母豬流產、產死胎或弱仔，各階段豬呼吸道癥狀，細菌繼發感染和死淘率增高，種豬群和生長豬群生產成績不穩定。近兩年，類NADC30毒株在臨床上愈發普遍，逐漸成為繼高致病性PRRSV后又一田間優勢流行毒株[4]。該類毒株常因引種帶入豬群，因病毒自身的免疫抑制作用，使豬群免疫力下降，從而易繼發其他病原感染。研究表明，現有PRRS疫苗對類NADC30毒株僅能提供有限的交叉保護作用[5-6]。

豬瘟(CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。CSFV可以感染不同階段豬只，具有傳染性強、致死率高等特點。我國CSFV毒株具有多樣性，目前優勢流行毒株為2.1b亞型[7]。CSF在臨床上多以繼發感染為主，常與其他病原混合感染，如PRRSV、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒等，給CSF的診斷造成一定困難。種豬的隱性感染易導致病毒在群體中持續存在。由于CSF治療無有效藥物，主要通過疫苗免疫接種進行預防。傳統脾淋苗和普通細胞苗因抗原含量低，臨床使用效果往往不如傳代細胞苗。

2017年6月22日起，山東省萊州市某豬場仔豬陸續出現腹瀉、發燒、呼吸道癥狀，發病3-4 d后死亡，呈窩發特點，經兩次治療無效。9月15日，調查組接到報告，于次日趕赴現場進行調查，報告如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 磁珠法核酸提取試劑盒，購自西安天隆科技有限公司；一步法RT-PCR試劑盒、ExTaqDNA聚合酶，購自寶生物工程(大連)有限公司。高通量組織研磨儀，德國萊馳公司產品；2720型PCR儀，美國ABI公司產品。

1.2 病例定義

1.2.1 可疑病例 2017年6月22日-9月29日，該養殖場出現腹瀉、咳嗽、氣喘、渾身發紅等癥狀中至少一項的死亡仔豬。

1.2.2 確診病例 淋巴結、扁桃體、肺、脾、腎等組織樣品經RT-PCR檢測結合測序分析，PRRSV野毒和CSFV野毒均為陽性的可疑病例。

1.3 調查方式

1.3.1 現場調查 到發病場戶進行實地調查，查看生產記錄；與養殖場管理人員進行座談，了解發病經過、免疫、飼養管理及豬只調運等信息；進入生產區，觀察養殖環境、圈舍衛生狀況，同時搜索可疑病例，進行臨床診斷及病理剖檢。

1.3.2 采樣檢測 采集2頭死亡仔豬及2頭發病仔豬的淋巴結、扁桃體、肺、脾、腎等病變組織樣品，進行腹瀉、高熱類病原的PCR/RT-PCR檢測；陽性樣品擴增產物送生工生物工程(上海)股份有限公司測序。

1.4 數據整理與分析 用Excel軟件整理調查結果和檢測結果，并進行數據分析，用以描述疫病分布、追蹤、溯源、建立病因假設并驗證假設。

2 結果

2.1 現場調查

2.1.1 養殖場概況 該發病豬場于2012年開始啟用，是家庭經營的小型專業戶，場主與其妻共同管理，另雇有衛生清潔人員1名。現有豬舍3棟，生豬存欄約400頭，其中能繁母豬50頭，采取自繁自養、連續飼養的飼養模式。該養殖場是村中唯一的豬場，且獨立在村落之外，周圍3 km內沒有其他豬場。2017年初至此次疫情前，該場豬群一直比較健康，僅有正常的零星發病和死淘。

2.1.2 疫病經過及前期防控情況 6月22日起，4-5日齡哺乳仔豬開始出現腹瀉、發熱(41℃)、渾身發紅的癥狀，發病后3-4 d即死亡；7月17日，經鎮獸醫站診斷為病毒性腹瀉；次日，對腹瀉仔豬肌肉注射痢菌凈、恩諾殺星，并腹腔補液，同時對所有母豬緊急免疫傳染性胃腸炎-豬流行性腹瀉二聯活疫苗1頭份，但未能控制住疫情；8月7日起，斷奶后仔豬開始出現類似的腹瀉、發熱、呼吸道癥狀，發病4-5 d后死亡；8月20日，養殖戶采集病死豬組織樣品送至某院校實驗室檢測，診斷為CSFV感染；8月25日，全群緊急免疫豬瘟脾淋苗1頭份，疫情仍未見好轉。截至9月16日開展調查時，場中仔豬累計死亡約150頭。

2.1.3 疫病分布

2.1.3.1 時間分布 根據可疑病例的病死情況繪制流行曲線(圖1)。疫情的暴發呈現明顯的時間聚集性，共有兩波集中的發病、死亡：第一波開始于6月22日，哺乳仔豬發病；6月25日，開始出現死亡；截至7月22日，哺乳仔豬累計發病、死亡7窩，約80頭，發病率[8](1)發病率=新發病例數/[(初始風險動物數-1/2出欄和患病數+1/2補欄)×時間]，下同為0.98例/豬-月或0.93例/窩-月，病死率100%。第二波開始于8月7日，斷奶后仔豬發病；8月10日，開始出現死亡；截至9月29日，保育豬累計發病、死亡6窩，約75頭，發病率為0.39例/豬-月或0.35例/窩-月，病死率100%。第二波疫情較第一波緩和，但持續更久。

圖1 疫病流行曲線

2.1.3.2 空間分布 6月22日，北舍首先發病；7月3日，中舍開始發病；南舍由于只有育肥豬，沒有發病豬。以窩為研究單元，比較疫病暴發期間兩舍仔豬的發病風險，統計分析表明，兩舍仔豬發病風險沒有顯著差異(表1)。據調查，該場僅有6臺產床和6臺保育床，且均在北舍。產床和保育床不夠用時，就用普通圈欄充當。仔豬斷奶(約30日齡)后并不轉舍，保育期結束(約75日齡)后方轉至南舍育肥。因此，中舍發病并非轉舍造成。

表1 不同豬舍仔豬發病情況比較

2.1.3.3 群間分布 此次疫情暴發過程中，只有哺乳仔豬和保育仔豬發病。其中哺乳仔豬的損失更為嚴重，發病率高達0.98/豬-月；保育仔豬發病率為0.39/豬-月；育肥豬和母豬均無發病。見圖2。

圖2 不同生長階段豬群發病情況比較

2.1.4 臨床診斷 進入生產區發現，北舍、中舍個別仔豬全身潮紅、耳緣發紫、發熱、排黃色水樣便。

2.1.5 病理剖檢 現場剖檢了2頭死亡仔豬和2頭發病仔豬，發現豬只多器官內、外表面遍布出血點(見中插彩版圖3)，呈現急性豬瘟典型病變。具體表現為：頜下淋巴結、腹股溝淋巴結腫大、嚴重出血，腦溝出血，肺臟、心臟表面出現米粒大小出血點，盲腸表面彌漫性出血；胃黏膜帶狀出血，腎臟剖面、氣管黏膜和膀胱黏膜呈現針尖樣出血。已死豬病變較未死發病豬更為嚴重。

圖3 仔豬剖檢病變
a: 頜下淋巴結腫大、出血 ； b: 氣管黏膜針尖樣出血 ； c: 腎臟剖面遍布出血點 ； d: 盲腸表面彌漫性出血

2.2 實驗室診斷 此次疫情中，豬只發病后僅3-5 d即死亡，符合病毒類疫病特征，因此對采集的樣品，用PCR/RT-PCR方法對臨床上導致腹瀉、高熱呼吸類征候群的相關病毒性病原進行檢測，并對陽性樣品進行測序。結果表明，4頭仔豬樣品CSFV核酸均為陽性，測序結果為2.1b亞型毒株；PRRSV核酸均為陽性，測序結果為類NADC30毒株。見表2。

表2 組織樣品病原學檢測結果

PRV：偽狂犬病病毒； PCV2：豬圓環病毒2型； PEDV：豬流行性腹瀉病毒； TGEV：傳染性胃腸炎病毒； PRoV：豬輪狀病毒。

3 討論

3.1 病因分析 綜合臨床診斷、病理剖檢和實驗室診斷結果，判定此次疫情系PRRSV與CSFV混合感染。根據病毒特性，推斷該發病場很可能先感染PRRSV，而后繼發感染CSFV。經調查認為，引種、購豬車帶毒、斷奶應激可能是此次疫情暴發的原因。相關事件發生順序見圖4。

圖4 事件發生的時間順序

3.1.1 引種 3月2日，該場自某種豬公司購入母豬13頭，引種后未隔離即混群。以窩為研究單元，比較疫病暴發期間新引進母豬和場中原有母豬所產仔豬的發病風險，分析表明，新引進母豬所產仔豬的發病風險是原有母豬所產仔豬發病風險的2.708(95%CI：1.121-6.543)倍(表3)。由此推斷，病毒很可能經引種帶入豬場。據調查，提供新進母豬的原種豬場平時不開展PRRS疫苗免疫，但售豬時建議養殖戶引種后先隔離飼養，并做好PRRS疫苗的全群免疫。然而，該養殖戶由于此前一直未免疫PRRS疫苗仍能維持豬場穩定無疫，便忽視了隔離和免疫。待發病后，才緊急免疫了2次PRRS疫苗，這對疫情控制起到了一定作用。因此認為，引種且未合理免疫PRRS疫苗可能是導致疫情暴發的原因。

表3 疫病暴發期間不同來源母豬生仔死亡情況比較

3.1.2 購豬車輛帶毒 此次疫情暴發前1個月內，有3次售豬行為，分別在5月25日、5月30日和6月5日。5月30日售豬時，購豬車輛來該場時，車上已有2頭死豬，死因不明。收購人員將死豬在售豬通道處解剖，并取其內臟飼喂了場中2只狗。據了解，這2只狗平時拴養，不直接與豬只接觸，但與飼養員每天接觸。由于條件有限，豬場做不到分棟分人飼養。如果狗吃了病豬內臟，極有可能通過接觸飼養員將病原傳播到豬舍中，致使豬只感染發病。由于此事發生的時間與疫情起始時間較接近，因此認為購豬車輛帶入病毒也可能是此次疫情暴發的原因。

3.1.3 斷奶應激 第一次疫情發生后，通過采取緊急免疫和藥物治療等措施，7月中旬以后出生的哺乳仔豬均無發病死亡現象。而8月11日，斷奶后仔豬開始發病。斷奶后，飼料的轉變對生長發育旺盛期的仔豬造成強烈應激，外加少了母源抗體保護，豬只抵抗力急劇下降。因此，認為斷奶應激是保育仔豬集中發病的主要誘因。

3.1.4 其他誘因 現場調查發現，該場生物安全措施不健全，具體表現為：場內衛生較差；沒有任何消毒設施；發病豬未隔離飼養；病死豬扔于院中。此外，疫情發生后，場主因擔憂于經濟損失，急于控制住疫情，對上門推銷的獸藥都予以采用，這樣既易導致應激引起發病，又易造成細菌的耐藥性。因此，認為缺乏生物安全措施以及濫用藥物，也可能是疫情發生的誘因。

3.2 干預措施 針對該場情況，建議全群緊急免疫豬瘟脾淋苗2頭份，間隔1個月后加免1次；對仔豬應用強力霉素配合替米考星或頭孢類抗生素以控制呼吸道癥狀，劑量加倍，外加清熱解毒中草藥拌料，治療7 d。加強飼養管理，采取必要的生物安全措施：在場區入口及豬舍入口設立消毒池及人員噴淋設施；轉舍時務必對欄舍進行消毒；發病豬及時隔離治療。養殖戶接受了建議，并于9月20日起逐步采取了相應措施，疫情逐漸得到控制，9月30日后再無病死豬出現。

3.3 局限性分析 (1)由于此次疫情持續時間較長，仔豬生長階段變化較大，因此無法計算襲擊率，只能以發病率來描述疫病發生頻率和嚴重程度；(2)調查組了解疫情并介入的時間較晚，未能進一步減少豬場損失，且無法對部分推測病因進一步求證；(3)由于該場缺乏詳盡生產記錄、用藥記錄和發病記錄，故調查組獲得的數據大多來源于場主回憶，無法進行深入的數據分析，且也存在一定的回憶性信息偏倚。

3.4 結論 通過流行病學調查，確認此次疫情系PRRSV與CSFV混合感染引起的仔豬腹瀉、呼吸道癥狀及死亡，引種、購豬車帶毒及斷奶應激等均可能是引起此次疫情暴發的原因。