細葉石仙桃石油醚部位自由基清除活性研究

李培源 莫媛媛

摘要[目的]研究細葉石仙桃提取物石油醚部位對自由基的清除活性。[方法]采用石油醚溶劑得到細葉石仙桃石油醚提取物，并研究其對DPPH自由基和羥自由基的清除能力。以蘆丁為對照品，測定其總黃酮含量。[結果]細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH清除率在高藥液濃度時達到最大值，對羥自由基清除率最高可達到100%。[結論]細葉石仙桃石油醚提取物具有優異的自由基清除活性。

關鍵詞細葉石仙桃;DPPH;羥自由基;清除能力;總黃酮含量

中圖分類號TS202.3文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2019）01-0174-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.01.052

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

活性氧（ROS）由自由基（如超氧陰離子和羥基自由基）和非自由基物種（如H2O2和單氧）組成，是不同形式的活性氧。ROS是由所有需氧生物產生的，并且可以容易地與包括蛋白質、脂類、lipoproteins和DNA在內的大多數生物分子發生反應。因此，充足的ROS導致各種病理生理紊亂，如關節炎、糖尿病、炎癥、癌癥和遺傳毒性。因此，需要使用抗氧化劑來抵抗氧化應激和ROS的毒性作用[1-3]。由于合成的抗氧化劑副作用多，近年來科研工作者致力于尋找來源于植物的天然抗氧化劑[4-9]。細葉石仙桃作為一種常用的草藥，其抗氧化方面的研究未見報道。通過冷浸法得到細葉石仙桃石油醚提取物，測定其總黃酮含量，并采用DPPH和羥自由基體系，評估其對自由基的清除能力。

1材料與方法

1.1儀器與材料

UV1901型紫外可見分光光度計（北京普析電子科技有限公司）。細葉石仙桃藥材購于廣西百色。蘆丁標準品購于百靈威試劑公司（北京）。所有試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1細葉石仙桃石油醚提取物制備。

稱取20g細葉石仙

桃粉末，加入200mL石油醚（95%），冷浸72h。重復上述操作3次，合并提取液。旋轉蒸發回收溶劑，得到細葉石仙桃石油醚提取物。

1.2.2總黃酮含量測定。

1.2.2.1標準曲線測定。

精密吸取蘆丁對照品溶液（lmg/mL）于10mL量瓶中，分別加5%亞硝酸鈉0.4mL，靜置6min，加入5%硝酸鋁0.4mL，靜置6min。加5%氫氧化鈉試液4.0mL，用95%石油醚稀釋至刻度，搖勻。靜置15min，在510nm處測定吸收度。以吸收度對溶液濃度進行回歸分析，繪制標準曲線，推出回歸方程。

1.2.2.2細葉石仙桃石油醚提取物總黃酮含量測定。

將蘆丁標準溶液換為固定濃度提取物溶液，同上操作測定吸光度，多次測量求平均值。根據標準曲線計算總黃酮的蘆丁當量，總黃酮含量以每克干物質的蘆丁當量（mg）表示，并計算提取得率。

1.2.3二苯基苦味肼基自由基（DPPH）體系[4]。

取不同濃度細葉石仙桃石油醚提取物溶液（0.2、0.5、0.8、1.2、1.5、1.8和2.0mg/mL）加入8mLDPPH（0.004%）溶液中。在最大波長處（517nm）測吸光度，直到平衡為止。清除率計算公式如下：S（%）=（1-A樣品）/A空白×100%。其中，A空白為未加藥液的DPPH溶液的吸光度，A樣品為加入藥液的DPPH溶液的吸光度。

1.2.4羥自由基體系。

以蒸餾水將75mmo1/L鄰二氮菲無水乙醇溶液稀釋至7.5mmol/L，依次往50mL比色管中加入1.0mL濃度7.5mmol/L鄰二氮菲溶液，5mLpH7.4PBS、1.0mLFeSO4溶液、一定量的抗氧劑溶液、1.0mLH2O2應用液，以蒸餾水補充體積至25mL。37℃保溫反應60min，測A510。既加抗氧劑，又加H2O2的為加藥管;不加抗氧劑，只加H2O2的為損傷管;未損傷管兩者均不加。羥自由基清除率s=（A加藥-A損傷）/（A未損傷-A損傷）×100%。若為負值，則此時表現促氧化性;若為正值，則此時表現抗氧化性。

2結果與分析

2.1細葉石仙桃石油醚提取物總黃酮含量測定結果

細葉石仙桃石油醚提取物總黃酮含量以蘆丁為對照品測定，以吸收度對溶液濃度進行回歸分析，得到回歸方程y=9.6778x+0.0167（R=0.9992）。根據線性方程得出細葉石仙桃石油醚提取物的總黃酮含量測定結果，其總黃酮含量為10.6mg/g。

2.2細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基的清除能力

2.2.1不同濃度提取物對DPPH自由基的清除能力。

不同濃度細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基的清除能力如圖1所示。當藥液濃度低于1.5mg/mL時，提取物對DPPH自由基的清除率基本維持在一個水平，不同濃度提取物對DPPH自由基的清除率從高到低的順序為：1.2mg/mL>0.8mg/mL>0.5mg/mL>1.5mg/mL>0.2mg/mL。當藥液濃度高于1.5mg/mL時，提取物對DPPH自由基的清除率增加到較高值，藥液濃度為2.0mg/mL時，提取物對DPPH自由基的清除率達到最大值。

2.2.2不同時間提取物對DPPH自由基的清除能力。

細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基的清除能力與反應時間之間的關系如圖2所示。將藥液濃度為2.0mg/mL提取物溶液加入DPPH自由基體系中，立即吸取溶液進行清除率測定，測得DPPH自由基清除率為13.7%。在反應時間為10min時進行測定，細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基的清除能力增大為反應時間0min時的1.26倍。對比提取物在反應時間10～40min的DPPH自由基清除率，發現其數值基本維持在一個水平。

2.3細葉石仙桃石油醚提取物對羥基自由基的清除能力

細葉石仙桃石油醚提取物對羥基自由基的清除能力與藥液濃度之間的關系如圖3所示。藥液濃度對于細葉石仙桃石油醚提取物羥基自由基清除能力的影響很大，在較低濃度（小于0.5mg/mL）時，提取物羥基自由基清除率為負值，表示細葉石仙桃石油醚提取物具有促氧化作用。當藥液濃度增加到0.8mg/mL，提取物羥基自由基清除率為10.3%，表現出抗氧化性。隨著藥液濃度增加，提取物對羥基自由基清除率增加，在藥液濃度為1.2和1.5mg/mL，提取物羥基自由基清除率分別增加為0.8mg/mL藥液濃度下羥基自由基清除率的6.97倍和8.75倍。

2.4細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH和羥基自由基EC50值的影響

EC50值表示抗氧化劑對自由基清除一半時所需的藥液濃度，細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基的EC50值為21.36mg/mL，對羥自由基的EC50值為1.05mg/mL。結果表明細葉石仙桃石油醚提取物對于羥自由基具有很強的清除能力，在很低的藥液濃度就對羥自由基達到半數抑制。

3結論

測定細葉石仙桃石油醚提取物的總黃酮含量，并采用DPPH自由基體系和羥自由基體系來評估其自由基清除活性。以蘆丁為對照品，測得細葉石仙桃石油醚提取物的總黃酮含量為10.6mg/g。細葉石仙桃石油醚提取物對DPPH自由基顯示出良好的清除效果，藥液濃度為2.0mg/mL時，提取物對DPPH自由基的清除率達到最大值，在反應時間為10～40min，其數值基本維持在一個水平。該提取物對羥自由基具有很強的清除能力，在較高濃度時提取物對羥自由基

清除率完全。試驗結果表明，細葉石仙桃石油醚提取物具有優異的自由基清除能力。

參考文獻

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