真方白丸膠囊質量標準研究

皮鳳娟 張慶蓮 黃娟 邵單炫 廖光輝

摘要：目的 采用多指標綜合評價的方法，為真方白丸膠囊提供質量控制的方法和依據。方法 采用薄層色譜法（TLC）對制劑中的天麻、枳殼進行定性研究;采用高效液相色譜法（HPLC）測定真方白丸膠囊中天麻素的含量;采用紫外分光光度法測定真方白丸膠囊中總膽酸的含量。結果 薄層色譜斑點清晰，陰性對照無干擾，天麻素在0.13～2.60μg（r=0.9999），鵝去氧膽酸在0～0.167μg（r=0.9999）范圍內線性關系良好，平均回收率分別為99.98%，99.57%，RSD分別為0.202%（n=9）、2.890%（n=6）。結論 該方法簡便、靈敏度高、重復性好，能用于該制劑的質量控制。

關鍵詞：真方白丸膠囊;總膽酸;天麻素

中圖分類號：R927 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2019）01-0066-04

真方白丸為元代《瑞竹堂方》所裁，主要藥物有川烏頭、白附子、半夏、天南星、天麻、全蝎等，主治中風病之半身不遂，于明代中葉失傳[1-2]。目前，該方被發掘出來后即受到學術界的普遍重視，已成為治療中風急性期中經絡的一個主要方劑。現根據方中藥物特性，已將其制備成真方白丸膠囊，為保證該制劑的質量可控性和穩定性，本實驗參考《中國藥典》（2015年版一部）對制劑中的天麻，枳殼等進行了薄層定性鑒別，采用高效液相色譜法對君藥天麻有效成分天麻素測定了含量，采用紫外分光光度法測定了制劑中的總膽酸的含量，并進行方法學研究。

1 儀器與材料

膽南星（購自內江良輝藥業有限公司，）FA2004型電子天平（上海安亭電子儀器廠）;ZDHW調溫電熱套（北京中興偉業儀器有限公司）;紫外分光光度計;恒溫水浴鍋;鵝去氧膽酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）;天麻素對照品（中國藥品生物制品檢定所），橙皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所）。所用試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 天麻素含量測定方法的建立

2.1.1 色譜條件 美國賽分 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以乙腈：0.05%磷酸（3：97）為流動相;流速為1 mL/min;檢測波長為220 nm，進樣量為10 μL;柱溫30℃[3-5]。

2.1.2 溶液的制備 供試品溶液制備：取真方白丸膠囊10粒，取出內容物，精密稱取混合粉末0.8 g，精密加入25 mL稀乙醇，稱定，超聲處理30 min后再次稱定，用稀乙醇補足減失的重量，過濾，精密量取續濾液10 mL，水浴蒸干，殘渣用流動相溶解并定容至25 mL，即得。

對照品溶液制備：精密稱取天麻素對照品6.5 mg，置于50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻;即得對照品溶液。

陰性對照品溶液：按處方量比例稱取除天麻外的混合藥粉，按照供試品溶液制備的方法，制備缺天麻的陰性對照溶液。

2.1.3 專屬性實驗 分別精密吸取天麻素對照品溶液，供試品溶液，缺天麻陰性對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件檢測。結果對照品溶液和供試品溶液在相同的保留時間均有出峰，陰性對照無干擾。說明該測定方法專屬性強，無干擾。

2.1.4 線性范圍考察 精密稱取天麻素對照品適量，用甲醇稀釋制成含天麻素對照品0.0130 mg/mL～0.2600 mg/mL的溶液，在上述色譜條件下，分別取混合對照品溶液10μL注入液相色譜儀測定峰面積，以進樣量x為橫坐標，峰面積y為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：y=1381.8x+0.0536（r=0.9999）。結果表明：天麻素在0.13-2.60 μg內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.1.5 精密度實驗 吸取2.1.2項下樣品溶液適量，重復測定6次，結果天麻素峰面積的RSD值為1.64%，表明該方法精密度良好。

2.1.6 穩定性實驗 精密量取2.1.2項下混合對照品溶液，在0，2，4，6和8h分別進樣10 μL，記錄峰面積，計算RSD為0.73%，結果表明天麻素在8 h內穩定。

2.1.7 重復性實驗 取同一批樣品6份，照2.1.2項下方法制備供試品溶液，依照上述色譜條件平行操作測定，記錄峰面積，計算含量。結果RSD值小于1.0%，表明本方法的重復性良好。

2.1.8 耐用性實驗 取同一批樣品，照2.1.2項下方法制備供試品溶液，改變色譜柱溫度±5℃、流動相比例±5%，流速±2%，進行耐用性試驗。結果RSD<3.0%，說明本方法穩定。

2.1.9 加樣回收率實驗 精密量取已知天麻素含量的樣品0.3 g，共9份，分別置于具塞錐形瓶中，每份按高、中、低濃度加入對照品。照2.1.2項下方法制備供試品溶液，依照上述色譜條件平行操作測定，記錄峰面積，計算回收率，結果RSD<3.0%，說明加樣回收率好。結果見表1。

2.1.10 含量測定 取3批真方白丸膠囊，依法制備供試品液并測定天麻素的含量。3批真方白丸膠囊天麻素平均含量為3.32mg·g-1。

2.2 UV法測定總膽酸含量

2.2.1 溶液的制備 對照品溶液：取鵝去氧膽酸對照品5.02 mg置10 mL量瓶中，用冰乙酸溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品儲備液。分別精密移取對照品儲備液適量至10 mL量瓶中，加冰乙酸稀釋至刻度，制成50.2 μg·mL-1和2.51 μg·mL-1的對照品溶液[6-8]。

供試品溶液：取真方白丸膠囊0.4 g，置錐形瓶中，加入10 mL乙酸乙酯，水浴加熱回流150 min，加入0.6 g活性炭，再加熱回流30 min，過濾，蒸干，殘渣加60%冰乙酸溶液溶解并稀釋至10 mL，取1 mL稀釋液加入14 mL 50%硫酸溶液，搖勻后于75℃水浴10 min，立即冰浴2 min，即得。