氣相色譜法測定紫雪散中麝香酮的含量

1.廣西壯族自治區梧州市食品藥品檢驗所中藥室，廣西 梧州 543001； 2.廣西壯族自治區婦幼保健院中藥房，廣西 南寧 530003

紫雪散收載于2015年版中國藥典一部，是由石膏、北寒水石、滑石、磁石、玄叁、木香、沉香、升麻、甘草、丁香、芒硝(制)、硝石(精制)、水牛角濃縮粉、羚羊角、人工麝香、朱砂等藥材組成的復方制劑，具有清熱開竅、止痙安神的功能。由于麝資源的不足，遠遠不能滿足許多名貴中成藥(包括急救藥)的生產及臨床用藥，現國家規定處方中麝香以人工麝香等量替代使用[1]，本處方中的人工麝香芳香以開心竅，三藥配伍，清熱開竅熄風，為佐使藥[2]。人工麝香具有降壓、抗缺氧、抗缺血、抗炎等藥理作用，臨床用于高血壓、急性腦缺血損傷及中風急性期的治療[3]，常用于配制化妝品，亦在香精料、醫藥工業上使用[4]。麝香酮在紫雪散中的含量緊緊關聯著藥物的質量和藥物的有效性，目前對中成藥中的麝香酮含量測定已有相關報道[5-7]，但尚未見有對紫雪散中麝香酮的含量測定方法進行報道，而在中國藥典中有用氣相色譜法對紫雪散中麝香酮成分進行鑒別，供試品提取方法為索氏提取，以供試品色譜峰應呈現出與對照品色譜峰保留時間相同的色譜峰而鑒別出紫雪散中含有麝香酮[8]，但并沒有對其含量進行明確的規定，因此建立紫雪散中麝香酮的含量測定方法對控制該藥的質量和保證其臨床用藥的有效性、安全性有著重要的意義。麝香酮的含量測定方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、薄層掃描法和比色法[9-11]，已有文獻使用GC-MS法測定麝香酮含量[12-14]，因麝香酮在大多數的中成藥中的含量極低，干擾成分多，氣相色譜法靈敏度和分離效率高，適用于含量低的樣品測定[9]。本文采用氣相色譜法，以麝香酮為對照品對紫雪散中麝香酮含量進行測定，該方法準確、簡單、便捷，可以用于控制紫雪散中人工麝香的麝香酮含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀GC-2010(配備火焰離子化檢測器FID，日本島津公司)；GR-202電子分析天平(梅特勒-托利多公司)；KM-1990QFY智能型液晶數控型超聲波清洗機(威固特新型設備有限公司)。

1.2 試藥 麝香酮對照品(批號：110719-20121，中國藥品生物制品檢定所)，紫雪散樣品(批號：150803、141202、140903，分別由3個不同制藥公司提供，方法學采用批號為150803)；乙酸乙酯(分析純)。

2方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：聚乙二醇(ZB-Wax)毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm,涂層厚0.25 μm)；進樣口溫度：250℃；色譜柱溫度180℃；FLD檢測器；檢測器溫度250℃；分流比10∶ 1；進樣量1 μL。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取麝香酮對照品適量，加入乙酸乙酯配制成0.02 g·L-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取供試品約1 g，精密稱定，置具塞錐形杯中，精密加入乙酸乙酯10 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取人工麝香外根據處方量及其工藝制得的樣品約5 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法，制備陰性樣品溶液，即得。

取對照品溶液，陰性樣品溶液和樣品溶液分別進樣，記錄色譜圖，見圖1～3。結果表明，樣品中缺麝香酮以外的成分對含量測定無干擾，保留時間8.694 min，理論塔板數均不低于5000。

2.3 線性關系考察 取麝香酮對照品0.4709 g/L，然后分別精密吸取該溶液0.2、0.5、1、2、5 mL置25 mL容量瓶中，加入乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，并依照上述方法測定，結果詳見圖4。以濃度(mg/L)為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸處理，求得回歸方程：Y= 1639.2X-69.329，r= 0.9993。麝香酮在3.767～94.180 ng范圍內呈良好的線性關系。

2.4 穩定性試驗 供試品(批號：150803)，按2.2.2項下的供試品制備方法制備供試品溶液。以1 μL為進樣量，測定樣品中麝香酮的峰面積。然后放置0、2、4、6、10 h后按上述色譜條件進行分析，結果RSD為0.42%。試驗表明，在24 h內被測物穩定。

2.5 重復性試驗 取相同批號的樣品(批號：150803)，共6份，按2.2.2項下的提取方法提取供試品溶液，進樣量為1 μL，按樣品含量測定方法測定，結果測得樣品中麝香酮的含量為0.1082 mg/g，RSD為2.77%。試驗表明本方法重復性良好。

2.6 精密度試驗 以2.3項下對照品溶液，按上述相同色譜條件連續測定6次，所得平均峰面積為28800.23，RSD=0.46%，試驗表明本方法的精密度較好。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量樣品(批號：150803，麝香酮含量為0.1082 mg/g)0.5 g，共取6份，置具塞錐形瓶中，精密加入麝香酮對照品溶液適量，按樣品含量測定方法測定，計算回收率.結果麝香酮的的平均回收率(n=6)為101.11%;RSD為2.11%，詳見表1。

表1 加樣回收率結果 (n=6)

2.8 樣品測定 取3個不同廠家的紫雪散共3批，按正文含量測定項下的方法制得供試品溶液，測定麝香酮的含量，結果3批含量分別為(0.118±0.002)mg/g、(0.066±0.001)mg/g、(0.075±0.001 )mg/g。詳見表2。

表2 含量測定結果 (n=3)

3 討論

根據麝香酮的極性,參考相關的文獻[15-22]，本文提取溶劑分別考察了無水乙醇、乙酸乙酯、環己烷、甲醇等有機溶劑對樣品進行提取，結果分析表明，用乙酸乙酯作為提取溶劑，雜質干擾較小，而其余均存在不同程度的干擾，容易影響測定結果，所以選用乙酸乙酯作為提取溶劑。對常用的3種提取方法浸漬、超聲、回流進行考察，3種方法分別為：超聲30 min、浸漬4 h、回流1 h，超聲30 min與浸漬4 h提取效果基本相同，而回流提取樣品麝香酮的含量降低，分析原因在于麝香酮有揮發性，回流過程中較高溫度使麝香酮的含量在提取過程中有所減失，故排除回流作為提取方法。所以，在提取時間和提取方法的簡便性上綜合比較，選用超聲30 min作為提取方法。對提取方法為超聲時長進行了考察，結果超聲30 min能夠達到滿意的效果。

目前人工麝香的質量控制指標尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時選用與購買的人工麝香的質量會有所差別，而這個差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一，但人工麝香配方工藝嚴格保密[23]，其質量標準也未見有相關的報道，所以在原料藥人工麝香的選取上也會對紫雪散中麝香酮的含量造成影響。本文通過對麝香酮的含量測定研究結果可發現，目前市面上的紫雪散，相同廠家，不同批號測定出的麝香酮的含量也有所不同，分析其原因可能為本文中檢測的紫雪散生產年份不同，即生產的時間上有所區別，而麝香酮在放置環境與儲存時間的長短也會影響麝香酮在紫雪散中的含量[24-25]; 人工麝香的質量控制指標尚未得到全面的控制以及采用，所以在制備紫雪散時選用與購買的人工麝香的質量會有所差別，而這個差別也是影響麝香酮在該藥中含量的原因之一。因此本文建立紫雪散中麝香酮的含量測定方法有著重要的作用，本文采用氣相色譜法進行測定，該方法具有操作簡便、迅速、準確、干擾少、精密度與重復性較好等優點，可用來測定紫雪散中麝香酮的含量。