降脂舒心合劑HPLC指紋圖譜的建立及制劑安全性項目的影響因素檢測

劉敏 范蕾 陳桂云 余樂 馮美玲

[摘要] 目的 完善降脂舒心合劑的質量控制標準。 方法 以Waters XB C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm）為色譜柱，以甲醇為流動相A，以混合水溶液（含磷酸為0.6%和四氫呋喃0.2%）為流動相B。梯度洗脫：0～15 min，2% A;15～55 min，2%～25% A;55～90 min，25%～40% A;90～110 min，40%～50% A。檢測波長為280 nm，柱溫30℃，流速為1.0 mL/mim，分析時間為120 min，進樣量為10 μL。采用上述方法建立降脂舒心合劑的指紋圖譜。采用高效液相色譜法對該制劑中防腐劑的含量進行測定。采用電感耦合等離子質譜法對其可能含有的重金屬及有害元素進行檢測。 結果 10批樣品相似度均符合要求;苯甲酸含量均<0.3%。樣品鉛、鎘、鉻、砷、鎳、銅、汞含量均符合《美國藥典》新通則<232>的規定。 結論 本研究建立的指紋圖譜簡便、重復性好，為降脂舒心合劑的綜合質量評價提供了科學依據;建議增加影響制劑安全性的項目，以便嚴格控制制劑質量。

[關鍵詞] 降脂舒心合劑;指紋圖譜;防腐劑;重金屬及有害元素

[中圖分類號] R284.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（c）-0117-06

[Abstract] Objective To improve the quality control standard of Jiangzhi Shuxin Mixture. Methods Waters XB C18 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） was used as the mobile phase， and methanol was used as mobile phase A. The mixed aqueous solution （containing 0.6% phosphoric acid and 0.2% tetrahydrofuran） was used as mobile phase B. Gradient elution： 0-15 min， 2% A; 15-55 min， 2%-25% A; 55-90 min， 25%-40% A; 90-110 min， 40%-50% A. The detection wavelength was 280 nm， the column temperature was 30℃， the flow rate was 1.0 mL/mim， the analysis time was 120 min， and the injection volume was 10 μL. The above method was used to establish a fingerprint for Jiangzhi Shuxin Mixture. The content of the preservative in the preparation was determined by high performance liquid chromatography. Inductively coupled plasma mass spectrometry is used to detect heavy metals and harmful elements that may be contained. Results The similarity of 10 batches of samples met the requirements. The contents of benzoic acid were less than 0.3%. The contents of lead， cadmium， chromium， arsenic， nickel， copper and mercury in the samples all conform to the new general rule <232> of the American Pharmacopoeia. Conclusion The fingerprint established in this study is simple， reproducible and provides a scientific basis for the comprehensive quality evaluation of Jiangzhi Shuxin Mixture. It is suggested that more items affecting the safety of the preparation should be added in order to strictly control the quality of the preparation.

[Key words] Jiangzhi Shuxin Mixture; Fingerprint; Antiseptic; Heavy metals and harmful elements

降脂舒心合劑是由延胡索、姜黃、丹參、當歸、莪術、地黃、降香、何首烏、山楂、虎杖、銀杏葉、荷葉共十二味中藥配伍制備而成的醫院制劑，具活血化瘀的功效。臨床用于血瘀癥引起的頭暈、心悸、胸悶等癥。目前該制劑的執行標準為2005年版《浙江省醫療機構制劑規范》[1]，其檢驗項目僅限于延胡索乙素的薄層鑒別、pH值、相對密度檢查等常規檢驗項目。上述標準僅收載了延胡索的薄層色譜鑒別方法，未對組方中其他藥材進行監控，也無影響制劑安全性的檢查項目。本研究采用高效液相色譜法建立降脂舒心合劑的指紋圖譜，并對主要的色譜峰進行了歸屬性研究，揭示了制劑的起效物質基礎。根據2015年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱“《中國藥典》”）通則[2]要求，建立了制劑中防腐劑苯甲酸鈉的高效液相含量測定方法。此外，基于鎘、鉛、砷、汞等重金屬對人體的危害性[3-4]，本研究參照2015年版《中國藥典》通則[2]項下方法對其可能含有的重金屬及有害元素含量進行了檢測。本研究建立的上述3個方法能科學、全面、有效地控制制劑質量，建議修訂并納入降脂舒心合劑的質量標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200、1260高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）;XS105DU電子天平（梅特勒，d=0.01 mg/ 0.1 mg）;Agilent 7900型電感耦合等離子體質譜儀（美國安捷倫科技有限公司）;Mlli-Q Advantage A10超純水系統（美國MERCK MLLIPORE）;CEM MARSXPERSS微波消解儀（美國CEM公司）。

1.2 試藥

原兒茶醛對照品（生產批號：110810-201007，含量為98.2%）;丹參素鈉對照品（生產批號：110855-200809，含量為100.0%）;虎杖苷對照品（生產批號：111575-200301，含量為100.0%）;2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷對照品（生產批號：110844-201713，含量為93.6%）;異槲皮苷對照品（生產批號：111809-201403，含量為92.9%）;丹酚酸B對照品（生產批號：111562-201009，含量為96.0%）;苯甲酸鈉對照品（生產批號：100433-200301，含量為100.0%）;5-羥甲基糠醛對照品（生產批號：111626-201308，含量為98.3%）;丹參對照藥材（生產批號：120923-201414）;荷葉對照藥材（生產批號：121322-200402）;虎杖對照藥材（生產批號：120980-200804）;何首烏對照藥材（生產批號：120934-200507）;山楂對照藥材（生產批號：121626-201402）;地黃對照藥材（生產批號：121180-200402）;上述對照品、對照藥材均購自中國食品藥品檢定研究院。

鉻標準液（生產批號：15082，1000 μg/mL）;鎳標準液（生產批號：16041，100 μg/mL）;銅標準液（生產批號：16103，1000 μg/mL）;砷標準液（生產批號：16052， 1000 μg/mL）;鉛標準液（生產批號：16064，1000 μg/mL）;鎘標準液（生產批號：16074，1000 μg/mL）;汞單元素標準溶液（生產批號：16084，1000 μg/mL），上述標準物質溶液均購自中國計量科學研究院。鉍單元素標準物質溶液（生產批號：171007-2，1000 μg/mL）;鍺單元素標準物質溶液（生產批號：171015，1000 μg/mL）;銦單元素標準物質溶液（生產批號：171005，1000 μg/mL）;金單元素標準物質溶液（生產批號：16A007-2，1000 μg/mL），上述標準物質溶液均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心。

濃硝酸為優級純，甲醇、磷酸、四氫呋喃為色譜純;乙酸銨為分析純;超純水經Mlli-Q超純水系統自制而得。

降脂舒心合劑（由浙江省麗水市中醫院提供，批號分別為20151009、20160126、20160527、20160729、20160927、20170224、20170630、20170901、20171027、20180001）。

2 方法與結果

2.1 指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件? 色譜柱：Waters XB C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。以甲醇為流動相A，以混合水溶液（含磷酸為0.6%和四氫呋喃0.2%）為流動相B，梯度洗脫：0～15 min，2%A;15～55 min，2%～25%A;55～90 min，25%～40%A;90～110 min，40%～50%A。檢測波長為280 nm，柱溫30℃，流速為1.0 mL/mim，分析時間為120 min，進樣量為10 μL。

2.1.2 供試品溶液的制備? 精密量取樣品5 mL置于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 對照溶液的制備? 分別精密稱取對照品適量，置于同一量瓶中，以50%甲醇為溶劑制成含丹參素鈉40.2 μg/mL、原兒茶醛13.6 μg/mL、虎杖苷27.7 μg/mL、2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷27.9 μg/mL、異槲皮苷46.5 μg/mL、丹酚酸B 33.3 μg/mL的混合對照品溶液;另以水為溶劑配制成含苯甲酸鈉87.696 μg/mL對照品溶液，以甲醇為溶劑配制成含5-羥甲基糠醛200.0 μg/mL對照品溶液（因苯甲酸鈉對照品緊缺，故用防腐劑含量測定項下對照品進行定位，5-羥甲基糠醛穩定性差，故單獨配制配制進行定位）。

2.1.4 方法學考察? 取同一批降脂舒心合劑（生產批號：20160927）進行精密度、重復性、穩定性試驗。色譜圖中單峰面積占總峰面積大于3%的共有指紋峰共有10個，以分離度較好、保留時間適中的虎杖苷為參照。

精密度試驗：相對保留時間的RSD范圍為0.02%～1.65%，相對峰面積的RSD范圍為0.53%～2.47%。

重復性試驗：相對保留時間的RSD范圍為0.01%～0.94%，相對峰面積的RSD范圍為1.42%～2.95%。

穩定性試驗：在24 h內，相對保留時間的RSD為0.07%～1.56%，相對峰面積的RSD為0.81%～2.48%。方法學實驗結果符合要求。

2.1.5 相似度評價? 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”（2012.0版）對10批樣品進行評價，以S1為參照圖譜，生成色譜的方法為平均值，選擇時間寬度0.5，生成對照指紋圖譜R，確定了18個共有峰，各批樣品與對照指紋圖譜比較相似度值范圍為0.977～0.992。

2.1.6 專屬性考察? 分別稱取丹參、荷葉、何首烏、虎杖、山楂、地黃對照藥材各1 g加適量水煎煮30 min，濃縮至40 mL，制成對照藥材溶液。精密吸取上述對照藥材各5 μL，分別進樣，記錄色譜圖。依據所得圖譜，通過光二極管陣列檢測器確定10個主要藥材成分峰的歸屬：9、11、17號峰歸屬于丹參藥材，13、18號峰歸屬于虎杖藥材，6、15號峰歸屬于何首烏藥材，5、16號峰歸屬于荷葉藥材，3號峰歸屬于生地，7號峰在地黃及山楂藥材中均有檢出，并且此類成分在藥材煎煮過程中也容易生成，故無法確定其歸屬。通過查閱相關文獻[5-18]，進行主要成分的確證，確定了8個化學成分。主要色譜峰的相對保留時間及鑒定結果見表1。