雞傳染性法氏囊炎病毒疫苗激發黏膜免疫的研究

[摘 要] 傳統的傳染性法氏囊病（IBD）疫苗免疫研究主要集中于系統抗體水平的監測，忽略了黏膜免疫抗體在抵抗感染中的作用。本文拓展傳統思路，根據自然感染規律，以研究局部黏膜免疫為主線，深入分析弱毒疫苗激發雛雞的黏膜免疫抗體變化規律，對科學使用和評價畜禽疫苗、降低養殖業的損失具有重要的意義，對提高養殖經濟效益將產生積極的影響。

[關鍵詞] 傳染性法氏囊病;活疫苗;黏膜免疫

[中圖分類號] S858.31 [文獻標識碼] B [文章編號] 1674-7909（2019）28-105-3

隨著養雞業規模化和集約化的發展，傳染病的種類和數量以及其發病率在不斷增加。有效的生物安全措施對于控制疾病具有重要意義，其中疫苗接種是最有效和最經濟的手段，可有效提高家禽對特定疫病的特異性免疫力[1]。近年來，黏膜免疫日益引起人們重視，并被認為處于現代免疫預防的中心地位。因為黏膜組織是機體和環境進行交流的場所，其主要功能是作為機體的防御屏障，清除和排斥病原體的入侵外源，保護機體免受損害[2，3]。

1 傳染性法氏囊病研究進展

1962年，Cosgrove正式報道了該病在美國特拉華州（Delaware）甘布羅鎮（Gumboro）的肉雞群中發生，因此又稱“甘布羅病”。1970年，Hitchner建議將該病命名為傳染性法氏囊病（IBD）。我國于1978年由周蛟等發現該病，并于1982年分離到病毒。1985年以來，世界許多地方相繼報道了變異株/血清亞型或超強毒株（vvIBDV）的出現，從而使該病呈現了新的流行特點，對養雞業造成愈加嚴重的危害。

2 黏膜免疫研究進展

早在20世紀30年代就有人注意到，當呼吸道和消化道感染時，其保護性免疫力與血清中抗體關系不大，而與黏膜表面分泌液中抗體關系密切。據此推斷，動物除循環抗體外，尚有局部免疫防御系統。之后，又有學者提出局部抗體的概念。到1963年，Chodirker和Tomasi等對黏液免疫球蛋白的類型進行了大量的免疫化學研究，首先在外分泌液中發現了一種IgA類抗體，導致了黏膜免疫概念的產生。

3 材料與方法

3.1 試驗材料

3.1.1 試驗動物。試驗動物為7～10日齡SPF雛雞（雞胚在實驗室培養箱中孵化），SPF雞蛋購自乾元浩股份有限公司南京生物藥品廠。

3.1.2 疫苗。雞傳染性法氏囊活疫苗（NF8株），由乾元浩股份有限公司南京生物藥品廠生產，批號181101，有效期為2020年5月，用于免疫雛雞。

3.2 試驗方法

3.2.1 動物分組與免疫。7日齡SPF雛雞141只，隨機分為3組，即試驗組一（簡稱T1組，70只）、試驗組二（簡稱T2組，50只）、對照組（簡稱C組，21只）。試驗組一，7日齡雛雞按照規定劑量（2羽份/只）飲水免疫一次;試驗組二，7日齡雛雞按照規定劑量（2羽份/只）飲水免疫一次，于2周后加強免疫一次（2羽份/只）;對照組，7日齡雛雞，作空白對照組。

3.2.2 樣品的采集與處理。

試驗組一，分別于免疫后7、14、21、28、35、42 d和49 d各處死雛雞5只，每只雛雞均收集血液（分離血清）、食道黏液、十二指腸黏液、空腸中斷黏液;試驗組二，分別于第2次免疫后7、14、21、28、35、42 d和49 d各處死雛雞5只（死亡之前僅采集血清樣品），雛雞均收集血液（分離血清）、食道黏液、十二指腸黏液、空腸中斷黏液;對照組，每次處死雛雞3只，采集樣品作為陰性對照。

4 結果與分析

4.1 血液中IgA的檢測及其變化規律

雛雞血液IgA含量在IBD疫苗初次免疫后28 d達到最高峰，然后緩慢下降。而經過二次免疫后的雛雞血液IgA含量逐漸升高，且維持時間較長。兩組的IgA含量明顯高于對照組的IgA含量（見表1）。

4.2 血液中IgG的檢測及其變化規律

雛雞血液IgG含量在IBD疫苗初次免疫后21 d達到最高峰，然后緩慢下降。而經過二次免疫后的雛雞血液IgG含量逐漸升高，且維持時間較長。兩組的IgG含量明顯高于對照組的IgG含量（見表2）。

4.3 不同腸斷的黏膜抗體檢測結果及其變化規律

4.3.1 食道黏液中IgA的含量。雛雞食道中IgA含量在IBD疫苗初次免疫后28 d達到最高峰，然后緩慢下降。而經過二次免疫后的IgA含量逐漸升高，且維持時間較長。兩組的IgA含量明顯高于對照組的IgA含量（見表3）。

4.3.2 十二指腸黏液中IgA的含量。雛雞十二指腸中IgA含量在IBD疫苗初次免疫后28 d達到最高峰，然后緩慢下降。而經過二次免疫后的IgA含量逐漸升高，且維持時間較長。兩組的IgA含量明顯高于對照組的IgA含量（見表4）。

4.3.3 空腸中斷黏液中IgA的含量。雛雞空腸中IgA含量在IBD疫苗初次免疫后28 d達到最高峰，然后緩慢下降。而經過二次免疫后的IgA含量逐漸升高，且維持時間較長。兩組的IgA含量明顯高于對照組的IgA含量（見表5）。

5 討論

本研究拓展了傳統的研究思路，根據自然感染規律，以研究局部黏膜免疫為主線，以IBDV弱毒疫苗作為試驗材料，深入分析其激發雛雞的黏膜免疫抗體變化規律，從而為生產實踐提出建設性意見，對提高養殖經濟效益產生積極的影響。

雞的黏膜免疫系統是由與黏膜相關的淋巴組織，包括與腸道和支氣管相關的淋巴組織組成的，包括腸道黏膜集合淋巴結、消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜下層的淋巴小結和彌散淋巴組織，這些器官和組織中含有豐富的B細胞、T細胞和巨噬細胞等[4]。參與黏膜免疫的主要成分是與黏膜相關的免疫球蛋白，即分泌型IgA和一些能下調全身性免疫應答的效益型T細胞，以及黏膜定向細胞運輸系統[5]。黏膜免疫系統的結構，根據形態分為黏膜集合淋巴體和彌散淋巴組織，集合淋巴體的濾泡發生中心的部分B細胞含有黏膜IgA，其與黏膜上皮產生的大量IgA有關。

研究表明，黏膜免疫系統既是機體與外界的屏障，也是病原體入侵機體的重要門戶，因此其在機體免疫力方面有著極其重要的地位，IgA是黏膜免疫作用的主要抗體[6]。本試驗檢測了雛雞經過免疫后，不同黏膜免疫應答部位中IgA的消長規律均有所不同。IgA在局部黏膜免疫系統分泌中濃度較高，在血清中含量較低，主要在黏膜免疫中發揮重要作用。由此可見，在進行黏膜免疫復雜的免疫應答變化過程中，IgA的檢測是十分重要和必要的。再次應答產生的抗體高于初次應答產生的抗體，且維持時間長，疫苗有較好的免疫作用。

參考文獻

[1]B.W卡尼克.禽病學[M].高福，劉文軍，譯.10版.北京：中國農業出版社，2018.

[2]黃健生.雞傳染性法氏囊病免疫程序初探[J].中國畜禽傳染病，1977（4）：22-24.

[3]陳忠斌，徐宜為.傳染性法氏囊病毒分子生物學研究進展[J].國外獸醫學—畜禽傳染病，1997（2）：1-4.

[4]楊淑靜.黏膜免疫[J].國外醫學免疫學分冊，2001（6）：296-298.

[5]楊倩，周廣禮.動物黏膜免疫新進展[J].畜牧與獸醫，2001（5）：38-39.

[6]朱國強，王永坤.禽類免疫系統的結構與功能[J].預防獸醫學進展，2001（1）：27-30.