人參皂苷Rg3對胃癌（SNU-216）細胞的生長抑制作用

汪彥君 ，胡海燕 ，王 婷 ，陳 蕾

（1.長春中醫藥大學，長春130021；2.吉林大學第一醫院，長春130021）

人參皂苷Rg3是五加科人參屬植物的主要有效成分，具有多種生物學活性。近年來研究表明人參皂苷Rg3對肺癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌等多種腫瘤的發生、發展有抑制作用。腫瘤血管是腫瘤細胞生長和轉移的形態學基礎,腫瘤血管除向腫瘤細胞提供營養外,還不斷地向人體其它部位輸送腫瘤細胞,導致惡性腫瘤的生長和轉移。人參皂苷Rg3具有抑制腫瘤轉移作用,其機理與抑制抑瘤細胞的粘附、浸潤、以及抗新生血管的形成有關[1～5]。本研究探討人參皂苷Rg3在體外抑制腫瘤細胞的增長，將不同濃度的人參皂苷Rg3作用到體外培養胃癌 (SNU-216))細胞,觀察人參皂苷Rg3以不同濃度、不同作用時間對胃癌(SNU-216)細胞的生長抑制效應。為今后人參皂苷Rg3活性研究和抗腫瘤藥物的開發提供依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑

DMEM培養基和胎牛血清購自美國iGbco公司；四甲基偶氮唑鹽(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購自美國Sigma公司；胰蛋白酶購自Genview公司；胃癌(SNU-216)細胞購自中科院上海細胞生物學研究所；人參皂苷Rg3吉林大學藥學院饋贈；其余試劑均為國產分析純。

1.1.2 主要儀器

倒置顯微鏡(OLYMPUS日本)；C02培養箱(SANYO 日本);酶標儀（BioTeK 美國）;離心機(上海安亭)。

1.2 方法

胃癌(SNU-216)細胞用含10%小牛血清的DMEM培養基置于37℃、5%CO2條件下培養箱內培養。人參皂苷Rg3固體用DMSO溶解制成儲液,濃度為200mg/mL。

實驗分組：I組對照組不給藥組;II人參皂苷Rg30.020μmol/L組；III人參皂苷 Rg3 0.040μmol/L組;IV人參皂苷Rg30.080μmol/L組。取對數生長期的胃癌(SNU-216)細胞接種于 96孔平底板(4×103/孔),培養貼壁后,加入不同濃度的藥物。 對照細胞加入無血清培養液，每組6個復孔。分別在加人參皂苷Rg3培養 24、48 及 72h 后,加入 MTT(5mg/ml),每孔 20μl,繼續培養4h。3500轉離心10min,棄上清,每孔加入150μl二甲基亞楓(DMSO),充分震蕩,待孔內藍色結晶完全溶解,酶標儀測定490nm吸光度值(A值),并計算細胞生長抑制率。抑制率=(1-實驗組A值/對照組A值)×100%。

1.3 統計學處理

采用SPSS10.0統計學軟件處理，t檢驗判斷組間差異顯著性，±s表示P＜0.05有統計學意義。

2 結果

三種劑量的人參皂苷Rg3均可以抑制胃癌（SNU-216）細胞生長。抑制率以劑量依賴方式增殖。結果表明：劑量為 0.020、0.040、0.080μmol/L 的人參皂苷Rg3實驗組與對照組比較具有顯著性差異 (P＜0.01),并且隨著人參皂苷Rg3濃度增高,抑制效率也在增強。其中在72 h以內作用時間增加,抑制效率增強,,但在三種劑量的人參皂苷Rg3作用48 h和72 h兩組間比較,抑制效率差異較24h相差較大。胃癌（SNU-216）細胞生長抑制率見表1。

表1 人參皂苷Rg3不同藥物濃度組對SNU-216細胞的生長抑制率的變化(%,±s,n=6)

表1 人參皂苷Rg3不同藥物濃度組對SNU-216細胞的生長抑制率的變化(%,±s,n=6)

注：II組、III組、IV 組與 I組比較 *P＜0.01

樣本數n=6抑制率(%)24h 48h 72h 24h 48h 72h OD 值(490nm)±s組別I 對照組 6 1.54±0.11 1.52±0.12 1.55±0.11 0 0 0 II Rg30.020umol/L 6 0.46±0.08 0.42±0.10 0.45±0.10 70.13* 72.37* 70.97*IIIRg3 0.040umol/L 6 0.32±0.08 0.30±0.10 0.33±0.09 79.22* 80.26* 78.71*IV Rg30.080uml/L 6 0.26±0.09 0.22±0.06 0.23±0.06 83.11* 85.53* 85.16*

3 討論

本實驗將人參Rg3作用到體外培養胃癌 （SNU-216）細胞,觀察不同劑量人參皂苷Rg3對胃癌（SNU-216）細胞的生長抑制作用。結果表明人參Rg3各種劑量對胃癌（SNU-216）細胞具有明顯地抑制作用(P＜0.01),并且隨著藥物濃度增高抑制效率增強,并呈劑量依賴關系。不同劑量人參皂苷Rg3作用于胃癌（SNU-216）細胞時間方面觀察,在72h抑制效率最強。72h抑制效率雖然最強，但是在4h8到72h觀察抑制效率，兩組間比較,抑制效率變化并沒有顯著性差異。

人參皂苷Rg3作為從人參皂苷中分離出的一種單體,研究發現人參皂苷Rg3是一種有效的分化誘導劑,服用人參皂苷Rg3可延緩疾病進展,提高患者的生存率〔6～7〕。 近年來胃癌發病率呈上升趨勢，人參皂苷Rg3可作為臨床治療胃癌的輔助用藥,能夠降低化療藥的副作用[8]。許多研究報道,含有人參皂苷Rg3中藥制劑能抑制多種腫瘤細胞生長,誘導腫瘤細胞的分化,尤其對胃癌、食道癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、白血病等多種腫瘤的發生、發展有明顯的抑制作用。本實驗結果與文獻報道相似，人參Rg3對體外培養胃癌（SNU-216）細胞具有抑制作用。本研究為進一步研究開發利用人參皂苷Rg3作為胃癌治療藥物提供借鑒。