水蛭對IgA腎病血瘀證大鼠治療作用的實驗觀察*

藍 芳 史 偉△ 謝永祥 趙 潔

IgA腎病臨床上以反復發作的肉眼或鏡下血尿為主要表現，腎臟病理檢查以光鏡下腎小球系膜細胞增生、基質增多，免疫熒光下可見系膜區廣泛 IgA沉積為特點，其病情多反復，病程冗長。中醫認為其肉眼或鏡下血尿為體內血不歸經的一種表現，“出血必有瘀滯”，而其病程長，則有“久病入絡為血瘀”之說，故認為血瘀證幾乎貫穿 IgA 腎病始終。水蛭作為傳統的中藥材，因其破血通經、逐瘀消癥之功，廣為臨床研究應用，現代藥理研究發現水蛭中包含各種抗凝血成分，其中天然水蛭素是目前發現最強的抗凝藥物，抑制凝血酶活性，具有抗血栓形成，改善瘀血狀態的功用[1],同時研究發現水蛭有抑制腎間質纖維化的進展[2]。本研究通過觀察水蛭對IgA腎病血瘀證大鼠腎功能、尿蛋白定量、血液黏度的影響，探討水蛭對血瘀證IgA腎病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物實驗用清潔級6周齡的Wistar 雄性大鼠80只，體質量180～200 g，動物合格證號：SCXK桂2014-0002，購自廣西食品藥品監督管理局。

1.2 實驗藥物水蛭免煎顆粒(江陰天江藥業有限公司生產)，每10 g相當于生藥10 g；醋酸潑尼松片(浙江仙琚制藥股份有限公司生產)，5 mg/片。

1.3 主要試劑及儀器

1.3.1 主要試劑尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿蛋白定量(24hUpro)測試盒均購自南京建成生物工程研究所，白介素-6(IL-6)采用酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測，試劑盒購自武漢華美生物工程有限公司,批次：W09013962，按試劑盒說明書操作。

1.3.2 儀器 Beckman CX-7全自動生化分析儀，TGL-16 H 高速低溫離心機(珠海黑馬醫學儀器有限公司)，LB-2A全自動血流變測試儀(天津市唐宇醫療器械科技發展有限公司)。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組與模型建立購進實驗大鼠后，在廣西中醫藥大學清潔級實驗室進行適應性喂養1周；大鼠按數字表隨機分為血瘀證組(60只)、空白對照組(20只)。血瘀證組運用脂多糖牛血清白蛋白+脂多糖+四氯化碳方法建立實驗性 IgAN模型[3，4]，造模成功后隨機分為：模型組、強的松治療組、水蛭組，共3組，每組20只。

1.4.2 給藥方法所有各組14周內進食進水不限。其中空白對照組及模型組予正常飲食和生活，不予任何干預，直至第14周末；強的松治療組，造模成功后每日早上予強的松懸液2 ml，灌胃給藥至14周末，強的松5.5 mg/kg/d；水蛭組：造模成功后每日早上予強的松懸液2 ml，予水蛭懸液2 ml，灌胃給藥至14周末，水蛭用量為1.2 g/kg/d，強的松5.5 mg/kg/d。

1.4.3 標本采集及觀察指標1)實驗各組造模成功后，分別用代謝籠收集0 d、14周的24 h尿，取標本送至廣西中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科檢測24 h尿蛋白定量(Up)。2)實驗各組造模成功后，隨機取每組10只大鼠腹主動脈血3 ml于非抗凝真空采血管中，離心，取上清分裝，-80 ℃冰箱保存；實驗終點14周末同上方法取各組余下大鼠腹主動脈血3 ml于非抗凝真空采血管中，離心，取上清分裝，-80 ℃冰箱保存；以上標本按照試劑盒說明書分別行尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、白介素-6(IL-6)檢測；同時留取腹主動脈血1 ml，注入含有 3.2% 枸櫞酸鈉抗凝( 抗凝劑與血液比例為 1∶9) 的試管中，用LB-2A全自動血流變測試儀行全血粘度及血漿黏度檢測。

2 結果

2.1 水蛭對腎功能、肌酐、尿蛋白定量、IL-6的影響造模成功后，模型組BUN、Scr、Up、IL-6均較空白對照組顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)；經治療后，強的松治療組及水蛭組BUN、Up、IL-6均較模型組顯著下降(P<0.01)，強的松治療組Scr較模型組顯著下降(P<0.05)，但水蛭組療效較強的松治療組更顯著(P<0.01)。見表1。

表1 水蛭對腎功能、肌酐、尿蛋白定量、IL-6的影響 (只，

注：與空白對照組相比，1)P<0.01；與模型組相比，2)P<0.01，3)P<0.05；與強的松治療組相比，4)P<0.01

2.2 水蛭對血液黏度的影響與空白對照組相比，模型組高切、中切、低切及血漿黏度顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，強的松治療組及水蛭組均可顯著降低全血黏度及血漿黏度(P<0.01)；水蛭治療組療效顯著優于強的松治療組(P<0.01)，水蛭治療組高切全血黏度及血漿黏度與空白對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

3 討論

對于IgA 腎病的中醫認識，中醫學并沒有明確記載，但從本病的常見臨床表現，IgA 腎病可歸屬于中醫學中“尿血”“腎風”“水腫”“虛勞”“腰痛”等范疇。而對其中醫病機分析，侯丕華等[5]認為本病主要為虛證為主，腎虛為綱，虛實夾雜，證候遷延，瘀血推動疾病進展；曹式麗[6]認為 IgA 腎病病機為瘀毒病理產物堆積形成瘀血;或熱毒血絡血溢脈外，或久病氣虛，統攝失司，而導致血凝脈外形成瘀血，瘀血促進疾病的發生發展，在潘莉等[7]的研究中， 316 例 IgA 腎病患者的中醫證候，血瘀證為最常見的兼證，故認為 IgA 腎病主要病機為本虛標實，血瘀是 IgA 腎病的重要邪實之一，也是本病發展轉歸的致病因素，提示 IgA 腎病治療中，活血化瘀是極其關鍵的治則。

表2 水蛭對血液黏度的影響 (只，

注：與空白對照組相比，1)P<0.05，3)P>0.05；與模型組相比，2)P<0.01；與強的松治療組相比，4)P<0.01

本研究選用水蛭治療IgA 腎病，水蛭始載于《神農本草經》，功“主逐惡血，瘀血，月閉，破血產瘕積聚，無力，利水道”，水蛭其味辛咸、性平。現代藥理研究發現其主要成分為蛋白質及多肽類大分子，如水蛭素、肝素、組織胺、吻蛭素等。而其主要成分水蛭素(hirudin)是天然凝血酶特異性抑制因子，是高效凝血酶抑制劑，能降低纖維蛋白原、血小板聚集率和尿N-乙酞-β-D 氨基葡萄糖酶，具有明顯的抗凝抗栓、抗動脈粥樣硬化、抗血小板聚集及降脂作用，同時有抗炎、抗細胞凋亡功效。研究表明，水蛭還可以降低腎組織內MMP-2、TIMP-2 水平調節腎臟細胞外基質的代謝，抑制腎臟纖維化的發生，也提示水蛭可以改善IgA 腎病患者瘀血狀態[8]。水蛭素可以通過干預蛋白分子的表達，改善IgA 腎病血瘀證預后[9]。

在本研究結果中，予強的松基礎治療同時加用中藥水蛭，可改善大鼠腎臟功能，尿素氮、肌酐較模型組及強的松治療組顯著下降，同時可減少尿蛋白定量，改善全血黏度及血漿黏度，下調IL-6。血液流變性、凝血、纖溶、微循環等理化檢測異常，提示血循環瘀滯，為血瘀證診斷標準之一[10]，故認為改善其血液黏度可改善血瘀證癥狀，郭玉東等[11]研究發現復方丹參片能降低急性血瘀模型大鼠的全血黏度、血漿黏度、纖維蛋白原含量等，提出復方丹參片可能通過降低血液黏度和抑制血小板聚集從而起活血化瘀的作用。莫超等[12]認為水蛭及其提取物可以改善腎病血瘀證患者預后，保護腎功能。

IgAN 與炎癥因子關系密切，可加速 IgAN 的進展，故清除腎臟炎性因子對IgAN 具有重要意義，IL-6是與機體炎癥反應和免疫應答反應密切相關的細胞因子，其可促使系膜增生，導致腎臟血流動力學的改變，促使腎小球系膜細胞纖維化，導致腎小球腎炎病情進展，是加速病情進展至終末期腎病的獨立風險。本研究應用水蛭治療血瘀證IgA腎病大鼠，可顯著下調IL-6水平，提示水蛭同時有抗炎作用，這可能是水蛭抗腎纖維化的作用機制之一。

綜上所述，水蛭可改善IgA腎病血瘀證大鼠全血黏度及血漿黏度，下調IL-6，減少尿蛋白，保護腎功能。下一步可繼續深入研究以找到水蛭對 IgA 腎病血瘀證干預機制及作用靶點，為臨床使用水蛭治療 IgA 腎病血瘀證提供更豐富的理論依據。