E-cadherin、α-catenin 在 Ⅱ期結直腸癌中的表達及與預后的關系

余爭垚 鄭伯安 董全進 王建軍 牟虹

近年來，結直腸癌發病率逐漸上升[1]。隨著美國國家綜合癌癥網絡、歐洲腫瘤內科學會指南的更新，結直腸腫瘤的治療不斷規范。Ⅲ、Ⅳ期結直腸癌患者術后須行輔助化療已達共識，但對于Ⅱ期結直腸癌患者術后是否行輔助化療尚有爭議。因此，對Ⅱ期結直腸癌術后是否行化療，需要一個可靠、有效的評價指標。筆者對E-cadherin、α-catenin在Ⅱ期結直腸癌中的表達及與預后的關系作了研究，以探討這2項指標對術后化療的指導意義，現將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2010年1月至2016年1月在淳安縣第一人民醫院手術治療的45例Ⅱ期結直腸癌患者的石蠟標本。入選標準：（1）術后經病理學證實為結直腸癌；（2）術前均未接受任何治療；（3）術前CT診斷為Ⅱ期結直腸癌；（4）均為中國漢族人種；（5）均經過根治性手術治療。患者男 32 例，女 13 例；年齡 23～76（54.4±14.2）歲。其中30例患者的標本同時包括距結直腸癌組織5cm以外的正常黏膜組織。本研究經醫院倫理委員會審查通過，所有患者簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 采用免疫組化法。使用鼠抗人αcatenin單克隆抗體（中國北京中山生物技術有限公司）、即用型鼠抗人E-cadherin單克隆抗體（中國福州邁新生物技術開發中心）、Envision system試劑盒（丹麥DAKO基因有限公司）。石蠟標本經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，切片經微波抗原修復；采用Envision法染色、蘇木素復染、切片脫水透明、封片。以已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。E-cadherin陽性標準：沿細胞邊界的細胞膜均勻染有棕黃色。αcatenin陽性標準：細胞膜均勻染有棕黃色。根據染色強度分為陰性、中度陽性、強陽性，并將中度陽性、強陽性歸為陽性表達。

1.3 統計學處理 應用SPSS 20.0統計軟件。計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。采用Kaplan-Meier法繪制患者的生存曲線，并采用logrank檢驗分析結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達與患者預后的關系。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Ⅱ期結直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中E-cadherin、α-catenin表達比較 Ⅱ期結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin 陽性表達率均為 84.4%（38/45），免疫組化結果見圖1a、2a（插頁）；癌旁正常黏膜組織中E-cadherin、α-catenin陽性表達率均為 100.0%（30/30），免疫組化結果見圖1b、2b（插頁）。Ⅱ期結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin陽性表達率均明顯低于癌旁正常黏膜組織，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

2.2 Ⅱ期結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達與患者臨床特征的關系 E-cadherin陽性表達率與Ⅱ期結直腸癌患者浸潤深度、有無靜脈侵犯有關（均P＜0.05），與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、有無淋巴結轉移、病理組織學類型、有無淋巴管侵犯等均無關（均P＞0.05）；α-catenin陽性表達率與有無靜脈侵犯有關（P＜0.05），與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度、有無淋巴結轉移、病理組織學類型、有無淋巴管侵犯等均無關（均P＞0.05），見表1。

表1 Ⅱ期結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達與患者臨床特征的關系[例（%）]

2.3 Ⅱ期結直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達與患者預后的關系 隨訪至2017年5月31日。在Ⅱ期結直腸癌患者中，7例E-cadherin陰性表達者1、3、5年生存率分別為85.7%、42.9%、0.0%，38例陽性表達者1、3、5年生存率分別為 94.7%、65.8%、39.5%；E-cadherin陽性表達者總生存率明顯高于陰性表達者，差異有統計學意義（P＜0.05），生存曲線見圖3。7例α-catenin陰性表達者 1、3、5年生存率分別為 85.7%、28.6%、0.0%，38例 α-catenin陽性表達者 1、3、5年生存率分別為94.7%、68.4%、39.5%；α-catenin陽性表達者總生存率明顯高于陰性表達者，差異有統計學意義（P＜0.05），生存曲線見圖4。

3 討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤的重要生物學特征[2]。黏附分子在惡性腫瘤的發生、浸潤和轉移中起著重要作用，其中E-cadherin是與結直腸癌浸潤和轉移較為密切的黏附分子。E-cadherin是一種主要介導細胞間黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，其基因定位于染色體16q22，廣泛分布于成人的上皮細胞，與細胞的黏附有關[3]。E-cadherin在腫瘤細胞中缺失表達與患者預后不良有關[4]。此外，E-cadherin表達與惡性腫瘤分化程度、浸潤深度、轉移特性等相關[5]。體外研究證實，E-cadherin黏附能力的喪失是獲得去分化和有侵襲力表型的第一步[6]，同時證實E-cadherin能抑制腫瘤浸潤轉移的[7-8]。高鈞等[9]回顧性分析了227例結腸癌患者的臨床資料，探討了結腸癌組織中E-cadherin表達與結腸癌復發、轉移及生存的關系，結果顯示E-cadherin表達缺失可能與結腸癌復發、轉移和不良生存預后有關。Ngan等[10]采用免疫組化法檢測了140例結直腸癌組織中E-cadherin蛋白表達情況，結果顯示術后生存期＞5年的患者E-cadherin蛋白表達強度明顯高于生存期＜5年的患者。本研究結果顯示，E-cadherin在癌旁正常黏膜組織中呈高表達；E-cadherin在結直腸癌組織中表達較弱，且與結直腸癌的浸潤、轉移有關。此外，E-cadherin陽性表達的結直腸癌患者生存率明顯高于陰性表達者。

圖1 Ⅱ期結直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中E-cadherin表達（a：橫結腸黏液腺癌組織中E-cadherin蛋白染色呈陰性，定位于細胞膜；b：正常大腸黏膜組織中E-cadherin蛋白呈棕黃色保存型表達，定位于細胞膜；免疫組化染色，×240）

圖2 Ⅱ期結直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中α-catenin表達（a：直腸管狀腺癌組織中α-catenin染色呈陰性，定位于細胞膜；b：癌旁正常黏膜組織中α-catenin蛋白呈棕黃色保存型表達，定位于細胞膜；免疫組化染色，×240）

圖3 E-cadherin表達陽性與陰性Ⅱ期結直腸癌患者的生存曲線

圖4 α-catenin表達陽性與陰性Ⅱ期結直腸癌患者的生存曲線

catenin 是一組膜內蛋白，包括 α-catenin（102kDa）、β-catenin（88kDa）、γ-cat（82kDa）。其中α-catenin基因位于染色體5q21-22，編碼906個氨基酸[11]。研究表明，α-catenin在維持正常組織形態方面發揮著重要作用，若它缺失或異位表達，可使癌細胞獲得惡性增生、浸潤轉移的能力[12]。E-cadherin功能的發揮，不僅需要有鈣離子的存在，還需要與其配體——連環素（包括αcatenin、β-catenin和γ-catenin）、細胞骨架——肌動蛋白絲連接，發揮其黏附功能。若無α-catenin，即使在正常E-cadherin表達的情況下，細胞也不能相互黏附[13]。α-catenin的基因產物與E-cadherin胞漿區形成復合體，再與細胞骨架中的肌動蛋白微絲結合，發揮其黏附功能，使相鄰細胞形成穩定連接。α-catenin基因丟失或α-catenin蛋白突變，都可導致細胞失去黏附功能。因此α-catenin的正常表達是E-cadherin發揮黏附功能的必要條件，而E-cadherin與α-catenin結合是E-cadherin介導的細胞黏附功能的關鍵步驟。本研究結果顯示，αcatenin在癌旁正常黏膜組織中呈高表達，在結直腸癌組織中表達強度減弱；α-catenin陽性表達率與有無靜脈侵犯有關。生存分析發現，α-catenin陽性表達者生存率明顯高于陰性表達者。

綜上所述，E-cadherin、α-catenin表達強度與Ⅱ期結直腸癌患者預后有關，其表達越弱，患者預后越差。對于E-cadherin和/或α-catenin表達陰性者，應嚴密隨訪，必要時予以輔助化療；對于E-cadherin和/或αcatenin表達陰性者，無需輔助化療。