利用三七殘根栽培白參菌初探

張玉潔 王禎元 韋繼雯 陳中堅

（1文山學院三七研究院，云南文山663099；2文山州食品藥品檢驗研究院，云南文山663099）

白參菌（Schizophyllum commune Fr.）別名樹花、裂褶菌、白花、八擔柴、雞毛菌子、雞冠菌[1]。白參菌子實體秀雅、味道馨香爽口，其作為一種食藥兼用菌，含5種常量元素和26種微量元素，并富含硒[2-3]。云南民間將其用于治療胃腸道疾病及產后補品。研究表明其細胞壁多糖具有免疫調節和抗炎、抗癌作用[4]。

三七是云南大宗中藥材，文山是三七之鄉。采挖過三七后的土壤中均遺留大量的三七殘根。三七的晾曬、剪切和加工過程也會抖落大量的三七絨根。這些三七毛狀根中含有2%～5%三七皂苷[5]，其藥用價值研究和新食品開發是三七產業發展的一個重要方向。試驗用三七殘根栽培白參菌，探索白參菌對三七殘根的分解利用情況，并跟蹤監測白參菌對殘根中皂苷成分的吸收利用和轉化情況。

1 材料與方法

1.1 原材料和試劑

三七殘根由文山苗鄉三七農業科技有限公司提供。白參菌菌種由文山學院環境資源學院微生物實驗室野外分離得到，保存于文山學院三七研究院。麩皮、小麥、石膏粉、木屑、馬鈴薯、甘蔗渣等從文山市場購買；耐高溫栽培袋、蓋、塞為訂購。三七總皂苷、薄層層析板和分析試劑購自深圳市商祺檢測器材有限公司。

1.2 母種擴繁和栽培種制作

用PDA培養基活化并擴繁母種。用小麥粒培養基擴繁栽培種[6]。

1.3 供試配方

以三七殘根部分替代對照配方中甘蔗渣為試驗配方。具體配方如下。對照組：甘蔗渣69%，麩皮20%，玉米粉10%，石膏1%；配方1，配方2，配方3，配方4，分別用25%，20%，15%，10%三七殘根替代對照配方中甘蔗渣。

1.4 栽培方法

三七根和甘蔗渣粉碎稱重后分別浸泡。裝袋前撒入輔料拌勻調料含水量至60%。用17 cm×55 cm×0.0015 cm聚丙烯耐高溫袋裝料，每袋裝料600 g（濕料）。每個配方20袋，共100袋。料袋121℃滅菌2.5 h，降溫至適宜后，移至無菌操作臺接種。

菌絲培養：菌絲生長保持溫度15～26℃，出菇溫度控制在16～23℃。溫度適宜接種后20 d左右開始出菇[7]。在現蕾處開口出菇。出菇期噴水保濕并保持通風良好。待子實體葉片長到將要平展時采收。共采收2潮菇。

測定供試配方白參菌菌絲生長速度（菌絲長滿菌袋所需時間），統計子實體的平均產量。采用SPSS 17.0軟件和Microsoft Excel 2003對各組數據進行統計分析。

1.5 培養料中三七皂苷類成分的跟蹤檢測

樣品處理：取各配方栽培白參菌子實體，菌渣干燥、研磨，粉碎備用。

皂苷提取：采用超聲抽提法[8]。

三七總皂苷標準品：含三七皂苷R1 6.9%，人參皂苷Rg1 28.0%，人參皂苷Rb1 29.7%，人參皂苷Rd 7.3%為主，少量其他稀有皂苷。加甲醇制成1 mL總量含5 mg的混合溶液。另取三七粉0.5 g，與供試樣品一起處理，抽提皂苷成分作為陽性對照。

利用高效硅膠60預制板（Merck）為層析板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）為展開劑，進行層析。噴硫酸乙醇液，進行顯色。

2 結果與分析

2.1 供試配方栽培白參菌結果

試驗結果表明，少量的三七殘根對白參菌菌絲生長有一定的促進作用，而添加15%以上三七殘根顯著抑制菌絲生長，并可降低子實體產量；三七殘根用量超過20%時，菌絲生長稀疏、只產生很少的子實體。三七殘根用量25%，白參菌菌絲不生長，不出菇。詳見表1，表2。

2.2 皂苷成分的跟蹤檢測結果

將從各級樣品中抽提的皂苷類生物堿用甲醇溶解，利用薄層色譜法進行展層和染色得到皂苷色譜圖3。

由圖3可見，三七粉抽提所得三七皂苷和皂苷標準品主條帶基本一致。白參菌出菇后的菌渣中皂苷成分與標準品相比條帶都有所變化，表現為層析版下層極性較小的兩個三七皂苷成分有所減少，層析版上層極性較大、分子量較小的皂苷成分含量有所增加。

圖1 對照組培養料栽培的白參菌

圖2 添加三七殘根培養料栽培的白參菌（配方3，4）

表1 供試配方白參菌菌絲生長情況

表2 供試配方白參菌子實體產量及生物轉化率

圖3 白參菌菌渣及子實體中皂苷含量層析色譜

對子實體中皂苷類物質成分層析檢測的結果表明，有些三七皂苷成分或其降解產物被成功轉移到白參菌子實體中。說明有些小分子三七皂苷及三七皂苷降解物可以被白參菌菌絲吸收或轉化。

3 小結與討論

試驗表明，白參菌培養料中添加少量的三七殘根可以促進其菌絲生長并可顯著提高白參菌產量。培養料中添加15%以上的三七殘根會逐漸抑制白參菌菌絲生長，并大幅度降低其子實體產量。利用三七殘根所培養的白參菌子實體中檢測到三七粉和三七皂苷標準品中的某些成分相對應的三七苷植物堿的染色點，說明白參菌菌絲體可以吸收培養料中的某些小分子皂苷成分或三七皂苷的降解產物。