Rad51、BRCA2在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床意義

孟 盟，佟秀琴

（1.興安盟人民醫(yī)院婦一科，內(nèi)蒙古 興安盟 137400；2.包頭市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 包頭 014040）

近年來(lái)，卵巢癌的發(fā)生率逐年上升且呈年輕化趨勢(shì)，成為目前人們關(guān)注的熱點(diǎn)。卵巢癌發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，目前研究較多的是癌基因的激活以及DNA損傷修復(fù)機(jī)制等。DNA損傷修復(fù)機(jī)制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用，同源重組(HR)是體內(nèi)參與DNA損傷修復(fù)的重要機(jī)制,而DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad51和乳腺癌易感蛋白（BRCA2）是體內(nèi)參與同源重組性DNA修復(fù)的重要因子，并且與腫瘤對(duì)放療和化療藥物的耐受性有關(guān)。為分析Rad51與BRCA2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，本研究采用免疫組化方法檢測(cè)卵巢癌組織中Rad51與BRCA2的表達(dá)情況，探討兩者在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集包頭市中心醫(yī)院婦科2008年1月—2013年1月手術(shù)切除并病理診斷的上皮性良性卵巢腫瘤組織30例，上皮性交界性卵巢腫瘤組織30例及上皮性惡性卵巢腫瘤組織30例，以及經(jīng)因子宮病變而切除的正常卵巢組織30例，所有患者術(shù)前或就診前均未行激素治療、化療或放療。

1.2 主要試劑

兔抗人RAD51多克隆抗體、兔抗人BRCA2多克隆抗體均為北京博奧森公司的產(chǎn)品，免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑、磷酸鹽緩沖液（PBS）均購(gòu)自上海長(zhǎng)島公司。

1.3 免疫組化方法

采用SP法檢測(cè)Rad51、BRCA2蛋白的表達(dá)。4%多聚甲醛固定標(biāo)本，石蠟包埋，4um厚切片，脫蠟，水化組織切片，0.1%枸櫞酸鹽緩沖液抗原熱修復(fù)，冷卻至常溫，SP免疫組化染色，二甲苯透明中性樹(shù)脂封固，顯微鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判斷

RAD51、BRCA2以細(xì)胞漿、細(xì)胞核和細(xì)胞膜中出現(xiàn)淡黃至棕黃色顆粒為陽(yáng)性顯色,以染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)定陽(yáng)性表達(dá):光鏡下隨機(jī)選取每張切片中5個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，取其平均值。染色強(qiáng)度分級(jí)如下:無(wú)著色為0,淡黃色為1,棕黃色為2,棕褐色為3,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分級(jí)為:陽(yáng)性細(xì)胞小于5%為0，5～25%為1，26～50%為2，51～75%為3，76%及其以上為4，兩項(xiàng)得分相乘，結(jié)果0為陰性，1～4為（+）,5～8為（++），9～12為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用x2檢驗(yàn)。RAD51、BRCA2之間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Rad51在不同卵巢組織中的表達(dá)結(jié)果

免疫組化顯色結(jié)果顯示Rad51定位于上皮性卵巢組織上皮細(xì)胞胞核內(nèi)，部分病例細(xì)胞漿中同時(shí)表達(dá)，見(jiàn)圖1-4。Rad51蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.67%、46.67%、56.67%和86.67%，呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且Rad51在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與上述各組織中的表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 BRCA2在不同卵巢組織中的表達(dá)結(jié)果

免疫組化顯色結(jié)果顯示BRCA2定位于上皮性卵巢組織上皮細(xì)胞胞核內(nèi)，部分病例細(xì)胞漿中同時(shí)表達(dá)，見(jiàn)圖5-8。BRCA2蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80.00%、66.67%、56.67%和30%，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且BRCA2在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與上述各組織中的表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 Rad51、BRCA2在不同卵巢組織中的表達(dá)結(jié)果

2.3 Rad51與BRCA2在卵巢癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

采用spearman相關(guān)分析對(duì)30例卵巢上皮性惡性腫瘤中Rad51與BRCA2陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，Rad51與BRCA2的相關(guān)系數(shù)rs為-0.426（P＜0.05）。兩者呈負(fù)相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 Rad51與BRCA2在卵巢癌組織中表達(dá)的關(guān)系

3 討 論

3.1 Rad51在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義

同源重組性DNA損傷修復(fù)機(jī)制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程起著重要作用，DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常時(shí)，都會(huì)引起基因修復(fù)失敗，導(dǎo)致細(xì)胞染色體畸變、基因突變等，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[1]。近年來(lái)，Rad51作為同源重組的關(guān)鍵因子,與腫瘤的關(guān)系越來(lái)越引起了人們的重視。Rad51在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)[2]。本研究結(jié)果顯示，Rad51蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且Rad51在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與上述各組織中的表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。可見(jiàn)Rad51在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到了重要作用[3]。Rad51蛋白水平的升高可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞同源重組修復(fù)能力的增加, 從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放、化療的耐受性。Connell等[4]在對(duì)383例手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌研究時(shí)發(fā)現(xiàn), RAD51表達(dá)較強(qiáng)的患者其生存中值明顯短于表達(dá)弱者,這也說(shuō)明RAD51與預(yù)后有關(guān)。研究表明RAD51 G135C位點(diǎn)的多態(tài)性也與非小細(xì)胞肺癌的不良預(yù)后密切相關(guān)。

3.2 BRCA2在卵巢癌組織中的表達(dá)及意義

大量的研究表明，BRCA2突變與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，BRCA2在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與上述各組織中的表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這一結(jié)果與乳腺癌的表達(dá)趨勢(shì)是一致的。說(shuō)明BRCA2參與了卵巢癌的發(fā)生，并且可能在卵巢癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但其在卵巢癌中的具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。等研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌中的BRCA1/BRCA2突變是卵巢癌預(yù)后的一個(gè)敏感指標(biāo)[5-6]，抑制BRCA1/BRCA2表達(dá)后，用順鉑和紫杉醇治療卵巢癌患者，其生存率明顯提高。由此可見(jiàn)，BRCA2也是與卵巢癌化療放療密切相關(guān)的指標(biāo)。

3.3 卵巢癌組織中Rad51、BRCA2蛋白表達(dá)的相關(guān)性

在本研究中，為了研究Rad51和BRCA2蛋白在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的相互作用，采用spearman相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，卵巢癌組織中Rad51和BRCA2蛋白的表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。由此可見(jiàn)，卵巢癌的發(fā)生發(fā)展是復(fù)雜、多因素的病理變化過(guò)程。

綜上所述，Rad51和BRCA2在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。